水貂细菌病的病原分离·鉴定及药敏试验

徐云飞，王赠超，邹玲，李文立，任慧英(青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109)

山东省地处沿海地区，其得天独厚的地理和气候条件，加上发达的畜禽养殖业和丰富的海洋渔业资源，为水貂养殖业的发展提供了坚实的基础，使山东省成为全国水貂养殖的大省。据海关贸易总署统计，全国平均年产水貂皮1 200万张，其中山东省占2/3。目前，在山东省沿海地区和家禽养殖大县，水貂养殖业已经成为农民增收的主要手段，成为当地经济发展和农民致富的支柱产业［1－2］。然而，由于养殖密度过大、疾病防疫意识淡薄等原因，水貂传染病不断发生，给水貂养殖业造成巨大的经济损失。笔者对某水貂场的病死水貂进行病原的分离、鉴定及药敏试验，以期避免抗菌药的滥用，减少耐药菌株的产生，为临床治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 病料 病料来自山东威海某水貂养殖场病死水貂。

1.2 试剂与仪器 普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基，均购自北京路桥技术有限责任公司;微量糖发酵管和药敏纸片，均购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.3 细菌的分离培养 无菌条件下，取病死水貂心脏、肝脏、肺脏等病料划线接种于普通营养琼脂培养基和麦康凯培养基上，37℃下培养24 h。挑取单个菌落进行革兰氏染色后，置于显微镜下进行镜检。

1.4 细菌的生化鉴定 挑取单菌落分别接种于微量糖发酵管、三糖铁琼脂培养基，对疑似肠杆菌科的细菌，按照常规方法进行吲哚、MR、VP及柠檬酸盐利用试验(简称IMViC试验)［3］。

1.5 药敏试验 将纯化的菌落接种于普通肉汤，37℃摇床培养12 h。将新鲜菌液用灭菌生理盐水稀释至浓度108CFU/ml，用灭菌的棉棒涂布于普通琼脂平板。然后，将18种药敏纸片贴在培养基的表面，37℃培养18 h后观察结果［4］，按照 CLSL 标准进行药物敏感性评价［5］。

表1 各分离菌株的生化试验结果及检出率

2 结果与分析

2.1 细菌分离培养及鉴定结果 由表1可知，在病死水貂中共分离到7种细菌，共17株，菌落形态、染色特性及生化试验表明全部为革兰氏阴性菌，隶属肠杆菌科。其中，分离率最高的细菌为大肠杆菌(59%)，其次为哈夫尼菌(12%);另外，还分离到耶尔森菌、成团泛菌、志贺氏菌、沙门氏菌和克雷伯菌，占分离菌株的29%。在麦康凯培养基上，大肠杆菌和克雷伯菌形成红色菌落，但克雷伯菌的菌落粘稠，用接种环可挑起丝状物，另外也不能利用蔗糖。哈夫尼菌、耶尔森、成团泛菌、志贺氏菌和沙门氏菌均不能利用乳糖，所以在麦康凯培养基上均形成无色菌落，在三糖铁培养基上的表现及IMViC试验结果均存在差异。

2.2 药敏试验结果 从表2可以看出，70%以上的菌株对头孢派酮、头孢西叮、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、左氧沙星和磷霉素敏感，23%以上的菌株对头孢哌酮、阿米卡星的敏感性处于中介，30%以上的菌株对头孢噻吩、头孢呋辛、环丙沙星、诺氟沙星、链霉素、氯霉素、四环素和氨苄西林耐药。所有分离菌株对头孢西叮、头孢他啶和头孢吡肟均敏感。

表2 药敏试验结果

3 讨论

目前临床上治疗水貂细菌性疾病的药物有很多，但由于养殖户长期滥用抗生素，使细菌的耐药性不断增加，造成水貂患病后缺乏有效药物，甚至无药可用。该试验结果发现从病死水貂体内分离出的7种细菌对15种抗生素均产生了一定程度的耐药性。同时试验结果也表明，同一种细菌不同菌株的耐药性也不相同。这与细菌表达的多样性有关［6］。因此，同一种细菌引发的感染用相同的药物治疗，治疗效果可能会差别很大，一旦出现治疗无效的情况应立即进行药敏试验，筛选敏感药物，加以治疗。但是，由于细菌耐药性的产生与抗生素的长期大剂量使用有关，在临床治疗中应选择比较敏感的药物联合或交替使用，以减少单个药物的使用剂量和使用时间，从而减缓耐药菌株的产生［7］。

水貂细菌病的发生是由多种病原引起的。对某水貂养殖场进行了连续检测，共分离到7种细菌，均为肠杆菌科细菌，说明肠杆菌科的细菌是目前水貂细菌病发生的主要病原。肠杆菌科细菌中，沙门氏菌、志贺氏菌、克雷伯菌、大肠杆菌和耶尔森菌对人和动物具有广泛的致病性［8］，具有重要的公共卫生意义，应引起足够重视。哈夫尼菌和成团泛菌大多为条件致病菌，水貂患此类细菌病与水貂的抵抗力降低有直接关系［9－10］。在气候突变、管理不当时，水貂抵抗力下降，环境中和体内的条件性致病菌容易入侵机体，引起疾病的发生，但一般不会造成大面积流行。

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