探究影响布鲁氏菌病抗体检测的因素

顾丛丛

本文主要探究影响布鲁氏菌病抗体检测的因素。以布鲁氏菌病抗体检测方法为出发点，分析采血管、标本放置时间、试验温度、前带现象均会对布鲁氏菌抗体检测造成一定影响，出现假阳性情况。并以此为基础提出样本准备、操作方法、评定结果的对策，以期为相关工作者提供参考。

一、布鲁氏菌病抗体检测方法

1、布鲁氏菌病主要是通过布鲁氏菌所引起的传染病，具有人兽共患特点，世界动物卫生组织将其归纳为B类动物疫病之中，我国将其列入到二级动物疫病。猪、牛、羊最易感染此病，犬与60多种家禽、家畜、野生动物易感性有所不同，主要是侵害生殖系统，易引发不孕、流产等。近几年中，布鲁氏菌病阳性率逐渐升高，已成为重点防范病种。

2、本次主要使用虎红平板凝集试验。由于培养布鲁氏菌营养条件苛刻，时间漫长，因此诊断布鲁氏菌病主要依据血清学诊断标准。原理是依据相应抗体可在体外产生特异性结合，并展现出可见反应，通过已知抗原进行未知抗体检测。因为在酸性条件下抑制IgM活性，主要对IgG类凝集抗体进行检查，具有良好特异性，与二巯基乙醇试验、补体结合试验等吻合率较高。虎红平板凝集试验具有价格便宜、灵敏度高、操作便捷、检测速度快，更加适合普查群体布鲁氏菌病，也是国际贸易中猪、牛、羊布鲁氏菌病指定检测试验。

二、布鲁氏菌病抗体检测影响因素

1、采血管影响。在布鲁氏菌抗体检测中，首先将标本放置在采血管中，以此进行后续检测。而不同采血管对于抗体检测结果具有一定影响。经研究表明，选择乡镇牛羊各50头检测布鲁氏菌病抗体，使用负压采血管在羊颈静脉与牛尾静脉采血共2管，采血管一个是普通采血管，另一个则含有肝素钠抗凝剂，以以每分钟2500转的速度离心10分钟，取上清液检测。结果表明，在虎红平板凝集试验中，普通采血管检测结果均为阴性，而含抗凝剂的采血管试验结果则为阳性，在不同抗凝条件下，同一血液样品的实验结果产生两种不同结果。主要是由于普通采血管中沒有抗凝剂，血液样品采集后通常放置30分钟离心，产生的上清液则为血清而含有抗凝剂的采血管，血液样品混合而后离心，上清液则是血浆，前者没有纤维蛋白质，后者则与之相反。使用血浆试验，将会因为纤维蛋白质与试管凝集抗原及布鲁氏菌病虎红平板凝集抗原相结合，出现假阳性情况。通过上述实验可知，日常工作中应当使用普通采血管进行标本采集，避免产生假阳性问题。

2、放置时间影响。试验中采集血清后，需将放置一定时间才能进行后续实验。不同放置时间对于检测结果也存在相应影响。经研究表明，在试验中使用普通采血管，将其分别放置10、30、60分钟进行虎红平板凝集试验，结果表明血液标本在放置10至30分钟后阳性率从8.7%向4.3%降低，而放置60分钟后，血液标本阳性率逐渐稳定。由此可知，随着血清标本增加放置时间，将会降低假阳性率，主要是由于血清中存在少量纤维蛋白，导致血清凝结成块，此时试验纤维蛋白将会与抗原相结合，出现假阳性，而经过长时间放置后，血清中纤维蛋白会逐渐收缩，可提高检测结果准确率。因此，工作人员在检测过程中，应当将抗原与血清放置一段时间，避免影像检测结果。

3、实验温度影响。试验中放置血清时，应当将其放在那种温度环境下是主要研究问题，不同温度对于试验结果同样具有一定影响。经研究表明，在实验中采集血清后，将其分别放置在5℃、15℃、30℃、35℃、至5℃温度中进行试验，结果表明，在虎红平板凝结实验中，随着温度不断提高，假阳性率也随之降低。试验温度在15℃以上时，检测结果准确率趋近于100%。因此，试验温度可稳定在20至30℃左右，保证所用试剂与标本室温平衡，避免出现温度差对检测结果造成影响。

4、前带现象影响。在检测布鲁氏菌阳性血清标本时，易产生试管凝结前带现象，产生此种现象后进行虎红平板凝结实验，结果表明均为强阳性，而使用试管凝集试验，血清稀释度较低为阴性，而血清稀释度较高时，检测结果方为阳性。因此，在虎红平板凝集试验中，其检测结果为强阳性，而采取试管凝集试验表明结果为阴性，则表明实验中可能产生前带现象，此时共走人员应当将血清稀释度加大，超过1：1600时，才能将前带现象所导致的假阳性误差减少，保证检测结果准确性。

三、布鲁氏菌病抗体检测影响因素对策

通过上述分析，在应用虎红平板凝结实验进行布鲁氏菌病抗体检测中，应当注意以下几点：

1、标本准备。备好标准阴性与阳性血清、虎红平板凝集抗原（由畜牧站提供），按说明使用;使用普通采血管采集标本，血清应当无腐败气味、无溶血、无蛋白凝块，样品新鲜;干净玻璃板或玻片，划分若干方格（4cm2）;移液器或吸管，可滴加0.03mL液体;混合棒或牙签，以便搅拌。

2、操作方法。在实验之前，抗原与血清应当在室温内放置约30至60分钟，标记玻璃板被检血清标号，添加相应0.03mL血清后，继续添加0.03mL虎红平板凝集抗原，使用小棒搅拌抗原与血清，让两者充分融合，5分钟后观察结果，与准备的阳性及阴性血清做对照。

3、判定结果。在对照的阳性与阴性血清下，可判定被检血清，若是4分钟内被检血清呈现肉眼可变的凝集现象，则可判定其为阳性（+），若是并无凝结现象产生，或出现均匀粉红色，则可判定血清是阴性（至）。

总之，在应用虎红平板凝结实验检测布鲁氏菌病抗体时，其将会受到采血管、标本放置时间、温度、前带现象的影响，出现假阳性结果。因此，工作人员在抗体检测中，应当加强对抗原与标本的检查，样品应当无明显蛋白凝块、腐败其为、无溶血，血清样品运送与保存中避免出现反复受热冻结情况，确保标本与实验要求相符，从而提高检测准确率，以免误杀牲畜，对农牧民利益造成损害。

（作者单位：256400山东省淄博市桓台县畜牧兽医事务服务中心）