樱桃谷肉鸭传染性浆膜炎的诊治

李晨 孙培明 莫玲 李玲 徐文豪 李峰

中图分类号：S858.32     文献标识码：C     文章编号：1673-1085（2020）7-0047-03

樱桃谷肉鸭具有生长快、饲料转化利用率高等优点，是我国目前规模化养殖的主要肉鸭品种，但在饲养中疫病问题一直存在。其中鸭传染性浆膜炎是樱桃谷肉鸭规模养殖常见主要疫病之一[1]。该病的发生可贯穿商品肉鸭整个生长周期，特别是2～3周龄雏鸭易发，发病率在5%～90%，病死率高达80%或以上[2，3]。2020年3月份，滨州某樱桃谷肉鸭养殖场发生疑似鸭传染性浆膜炎，现就其诊断与防治情况总结如下，以期为该病综合防控提供借鉴与参考。

1  材料与方法

1.1  病料来源及记录发病情况  滨州某养殖场送检病死鸭，记录其临床发病症状，剖检观察其病理变化。

1.2  试剂材料  胰蛋白大豆琼脂（TSA）、胰蛋白大豆肉汤（TSB），购自Dfico公司;麦康凯琼脂，购自青岛海博生物技术有限公司;微量生化發酵管、药敏纸片，购自杭州天和微生物试剂有限公司;SPAReasy细菌基因组DNA快速提取试剂盒、2×Spark Taq PCR Master Mix（Spark Taq DNA 聚合酶、DNTPs、MgCl2、反应缓冲液）、DL2000 DNA Marker等，购自山东思科捷科学仪器有限公司;革兰氏染液、瑞士染液、超纯水等，由山东省滨州畜牧兽医研究院制备;鸭疫里默菌（RA）参考菌株JX-1，由山东省滨州畜牧兽医研究院分离鉴定并保存。

1.3  细菌分离与培养  无菌条件下，采集病死鸭肝脏、脾脏、脑组织，划线接种含有50mL/L的TSA，置于烛缸中，37℃温箱培养24～48h;同时，划线接种麦康凯平板，37℃温箱培养18～24h。观察菌落长出情况。

1.4  分离菌生化试验  挑取分离菌纯培养物，无菌接种于微量生化发酵管，37℃温箱培养48h，观察并记录结果。

1.5  PCR诊断

1.5.1  引物设计  参照文献[4]，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成一对特异性引物RA-F和RA-R。

RA-F：5'-GACTATACAGGTCTTACGTTCCCT

GT-3';

RA-R： 5'-TAACTGAGATGGGTTAACACCTCTA

GC-3'。

1.5.2  模板DNA制备  挑取TSA单个菌落，通过振荡培养30min，按细菌基因组DNA提取试剂盒说明提取制备DNA模板。取RA JX-1株纯培养单个菌落，同样方法提取制备DNA模板，作为对照。同时取ddH2O作为空白对照。

1.5.3  PCR反应体系  反应体系为25μL：12.5μL 2×Spark Taq PCR Master Mix，上下游引物各0.25μL，5μL模板，7μL ddH2O。反应程序为95℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸50s，30个循环;最后72℃延伸10min。扩增产物以1%琼脂糖凝胶电泳检测。

1.6  药敏试验  采用纸片法进行，按照《抗生素药物药敏试验判断标准》判定记录结果。

2  结果

2.1  临床特征与病理剖检  该场本批次饲养有10000只商品肉鸭，送检时约为16日龄，已发病4d左右。主诉表现为发病鸭精神沉郁，缩颈呆立，步态不稳，跛行或头颈扭斜，伴有头部震颤等神经症状，排黄绿色或白绿色稀便，病死鸭呈角弓反张等症状。每天死亡50～100只不等，死亡率约为5%。剖检病死鸭，均为典型的心包炎、肝周炎、气囊炎等纤维素渗出特征，肝脏、脾脏肿大，肺脏出血、淤血，喉头有粘液。

2.2  细菌分离与培养特征  肝脏、脾脏、脑组织等病料接种TSA，烛缸培养24h，均有菌落长出，而麦康凯琼脂平板上无菌落长出。挑取单个菌落，接种TSA、TSB纯化培养，同时分别涂片革兰氏、瑞士染色镜检。TSA纯培养菌落直径多为1～2mm，边缘整齐、微隆起、半透明，呈晶莹光滑黄油状。革兰氏染色镜检，可见红色小杆菌，无芽孢，单个或成双存在，有的菌体连接为一串，呈弧状、长丝状。瑞士染色呈两极浓染。

2.3  生化特征  分离菌不分解葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇、水杨苷，VP试验、硝酸盐还原试验、尿素酶试验、明胶液化试验均为阴性，不产生H2S，符合鸭疫里默菌的生化特征[5]。

2.4  PCR检测结果  经检测，分离菌与参考菌均在860bp处扩增出目的条带，空白对照无任何条带扩出，见图1。

2.5  药敏试验结果  分离菌对头孢噻呋、大观霉素高敏，对卡那霉素、新霉素中敏，对链霉素、克林霉素、多西环素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、多粘菌素、氟苯尼考、利福平耐药。

3  分析与讨论

3.1  通过临床特征、病理剖检、细菌分离、生化试验及PCR检测，确诊引起该场发病的病原为鸭疫里默菌。通过药物敏感性试验，推荐遴选敏感药物大观霉素用于临床治疗。跟踪反馈意见，防治效果良好。

3.2  鸭疫里默菌能通过污染的饲料、饮水、飞沫等经呼吸道、消化道及皮肤表面伤口等多种途径引起鸭群发病[6]。其临床特征与鸭大肠杆菌病、沙门氏菌病等具有相似性。由于缺乏合适的选择性培养基，常规的细菌培养鉴别方法费时费力。基于16S rRNA基因序列或RA的外膜蛋白A基因保守序列设计引物，建立的PCR检测方法、荧光定量PCR检测方法[7-9]等具有特异性强、敏感性高等优势，且可以实现对病料组织的直接测定，大大缩短诊断时间，已成为该病快速诊断的有效方法。

3.3  该病的防控措施主要有疫苗免疫与药物防治，一般认为该菌血清型众多，且不同血清型缺乏理想的交叉保护[10，11]，提高了疫苗制备的难度。但分析药敏试验结果，分离菌存在多重耐药，单纯依靠药物防治亦有其局限性。刘建涛等[12]试验发现，免疫鸭传染性浆膜炎三价疫苗，能有效提高成活率2.1%，且料肉比有所降低。因此，在鸭传染性浆膜炎通用疫苗研发上市之前，选择区域优势血清型进行疫苗制备，结合药敏试验选择敏感性药物进行防控是最佳组合措施。

參考文献：

[1]  张大丙.水禽新现疾病的发生概况和防治思路[J].中国兽药杂志，2009，43（10）：42-45

[2]  SaifYM.高福，苏敬良，索勋，译.禽病学[M].第11版.北京：中国农业出版社， 2004：768.

[3]  庄金秋，吴信明，徐可利.黄河三角洲禽病发生特点与防治对策[J].家禽科学， 2011（10）：34-35.

[4]  李书光，谢金文，苗立中，等.鸭疫里默氏杆菌的分离及耐药性分析[J].中国家禽， 2014，36（18）：59-60.

[5]  陆承平.兽医微生物学[M].北京：中国农业大学出版社，2001：253-254.

[6]  Tsai H J，Liu Y，Tseng C S，et al.Genetic variation of the ompA and 16SrRNA genes of Riemerella anatipestifer[J].Avian Pathology，2005，34（1）：55-64.

[7]  刘拂晓，李明义，孙秀峰，等.鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法的建立[J].中国动物检疫，2010，27（4）：39-41.

[8]  季权安，刘燕，肖琛闻，等. 鸭疫里默氏杆菌PCR快速检测方法的建立[J].浙江农业学报， 2012，24（3）：388-391.

[9]  魏凤，张文通，王金良，等.鸭疫里默氏杆菌病诊断方法研究进展[J].中国家禽， 2013，35（7）：36-39.

[10]  程龙飞，陈红梅，施少华，等.鸭疫里默氏菌的血清型及药物敏感性分析[J].中国动物传染病学报，2013，21（4）：23-28.

[11]  陈义锋，赵亚荣，牟巍.鸭疫里默氏菌疫苗及其效力检测方法研究进展[J].中国兽药杂志，2010，44（2）：46-51.

[12]  刘建涛，尚友国，李旭源.鸭传染性浆膜炎三价灭活疫苗对提高白羽肉鸭生产性能指标的观察[J].吉林畜牧兽医，2019，12：1-2.