海南苦丁茶提取液抗氧化作用的研究

樊伟伟，陈 洁，黄 纯，黄惠华

（1.三亚航空旅游职业学院，海南三亚 572000；2.华南理工大学食品科学与工程学院，广东广州 510000）

海南苦丁茶提取液抗氧化作用的研究

樊伟伟1，陈 洁2，黄 纯2，*黄惠华2

（1.三亚航空旅游职业学院，海南三亚 572000；2.华南理工大学食品科学与工程学院，广东广州 510000）

采用DPPH自由基清除能力法（DPPH），羟自由基清除法（HRSA）和金属离子螯合能力法（MCC）3种方法，对海南新老苦丁茶提取液的抗氧化作用进行了研究。结果表明，海南苦丁茶提取液具有明显的抗氧化作用，其对DPPH自由基、羟自由基（HRSA）的清除能力和对金属离子螯合能力（MCC）随浓度的增加而增大，且新茶的抗氧化能力要强于老茶。

海南苦丁茶；提取液；抗氧化作用

苦丁茶俗称茶丁、富丁茶、皋卢茶，主要来源于冬青科冬青属大叶冬青植物[1-2]。根据文献及研究报道，苦丁茶具有抗氧化、抑菌、降压降脂、调节血糖、清热解毒、抑制肿瘤、延缓衰老等多种功效[3-6]，是我国一种传统的纯天然保健饮料。海南是苦丁茶的重要产地，经过多年的培育，苦丁茶日前已成为海南一道亮丽的特产名片。海南苦丁茶资源虽然已经引起了人们的重视，但对苦丁茶保健功能的研究却很少，缺乏科学的数据支撑。因此，试验采用DPPH自由基清除能力法（DPPH）、羟自由基清除法（HRSA） 和金属离子螯合能力法（MCC） 3种方法，对海南新老苦丁茶提取液的抗氧化作用进行了研究，以便为其深度开发利用奠定基础。

1 试验材料与仪器

1.1 试验材料

苦丁茶：2种海南大叶冬青苦丁茶，分为新茶和老茶，产自海南省五指山市。

1.2 主要试剂与仪器

无水乙醇、VC，国药集团化学试剂有限公司提供；1,1-二苯基-2-三硝基（DPPH），日本TCI公司提供；氯化亚铁、七水合硫酸亚铁，广州化学试剂厂提供；菲啰嗪，广州菲博生物科技公司提供；水杨酸，天津市大茂化学试剂厂提供；乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na），南京化学试剂公司提供。

HH-4型恒温水浴锅，上海新诺仪器设备有限公司产品；XW-80A型旋涡混合器，宁波新芝生物科技有限公司产品；UV-1800型紫外/可见分光光度计，日本岛津公司产品；THZ-C型台式恒温振荡器，常州市中贝仪器有限公司产品；ME104E型电子分析天平，梅特勒拖利多国际贸易有限公司产品。

2 试验方法

2.1 茶粉提取液的制备

分别称取粉碎后的新老海南苦丁茶茶粉各3.00 g，加入30 mL蒸馏水，于80℃条件下浸提20 min，重复3次，提取液用100目纱布过滤，然后用蒸馏水定容至100 mL备用。

2.2 DPPH自由基清除能力法（DPPH）[7]

取0.1 mmol/L的DPPH溶液3 mL，分别加入1mL稀释至不同浓度的茶提取液，旋涡混匀，于常温避光处静置30 min，以无水乙醇调零，于517 nm波长处测定吸光度（Asample）。另外，对照组用无水乙醇充当样品溶液，于517 nm处测定吸光度（Acontro）l；阳性对照使用抗氧化作用明显的VC溶液。DPPH自由基清除率的计算公式如公式（1）所示：

2.3 羟自由基清除法（HRSA）[8]

取9 mmol/LFeSO4溶液1.5 mL，9 mmol/L水杨酸-乙醇溶液1.5 mL和苦丁茶茶粉浸提稀释液1.5 mL，旋涡混匀后，加入8.8 mmol/L H2O2溶液1.5 mL启动反应。混匀后，在37℃条件下水浴60 min，以蒸馏水代替水杨酸-乙醇溶液为样品调零，于510 nm波长处测定吸光度（A）x，用蒸馏水做空白对照组，在510 nm波长处测定吸光度（A）0。羟基自由基清除率计算公式如公式（2）所示：

2.4 金属离子螯合能力法（MCC）[9]

取1 mL苦丁茶茶粉浸提稀释液，依次加入蒸馏水2.7 mL和2.0 mmol/L的FeCl2溶液100 μL，混合均匀，加入5.0 mmol/L的菲啰嗪溶液200 μL，静置10 min，以等量蒸馏水代替FeCl2溶液和菲啰嗪溶液作为空白调零，于562 nm波长处测定吸光度（A）。空白对照组以等量蒸馏水代替苦丁茶浸提液，测定吸光度（A）0。以EDTA钠盐作为阳性对照，金属离子螯合能力计算公式如公式（3）所示：

2.5 半数清除率（IC5）0的计算

以样品浓度和相应的自由基清除率作图并进行线性拟合，得到线性回归方程，根据方程计算清除50%自由基时所需样品质量浓度（μgDM/mL或mgDM/mL），即 IC50值[10]。

3 结果与分析

3.1 新老海南苦丁茶提取液DPPH自由基清除能力比较分析

DPPH自由基清除法的原理是基于电子转移，DPPH的醇溶液呈紫色，当有抗氧化物质存在时，DPPH溶液与抗氧化物质反应，使得DPPH溶液颜色变浅，可用分光光度计进行测定分析。

新老海南苦丁茶提取液DPPH自由基清除的IC50值见表1，新老海南苦丁茶对DPPH自由基的清除能力与质量浓度的关系见图1。

表1 新老海南苦丁茶提取液DPPH自由基清除的IC50值

图1 新老海南苦丁茶对DPPH自由基的清除能力与质量浓度的关系

由表1和图1可知，在0.2～0.7 mg/mL的质量浓度范围内，海南苦丁茶提取液质量浓度与其对DPPH自由基的清除作用存在线性关系，新茶和老茶对DPPH自由基的清除能力有所不同，新茶提取液对DPPH自由基的清除能力要强于老茶，但均低于VC清除DPPH自由基的能力。

海南苦丁茶的新茶及老茶的水提取液均对DPPH自由基有一定的清除能力，在0.2～0.7 mg/mL质量浓度范围内，海南苦丁茶对于DPPH自由基的清除能力与质量浓度有一定成正比的线性关系，其中新茶的提取液对于DPPH自由基的清除能力要强于老茶，但均低于VC清除DPPH自由基的能力。

3.2 新老海南苦丁茶提取液对羟自由基清除能力比较分析

羟自由基清除法的原理是基于活性氧的清除能力。水杨酸能捕获羟自由基产生一种有色物质，这种物质能在510 nm紫外光下出现吸收峰，抗氧化剂会与羟自由基竞争结合，从而降低有色物质的生成，吸光度也会因此有所降低。

新老海南苦丁茶提取液羟基自由基清除的IC50值见表2，新老海南苦丁茶提取液羟基自由基除能力与质量浓度的关系见图2。

IC50值越小，说明茶提取液对羟基自由基的清除能力越高。

由表2和图2可知，海南苦丁茶的新茶和老茶均对羟自由基有一定清除能力，且新茶的清除能力要高于老茶。此外，与甘露醇（1.8 mg/mL）和苯甲酸（0.5 mg/mL）这2种公认的羟自由基清除剂相比[11]，新茶和老茶的清除效果与苯甲酸相当且显著高于甘露醇。

3.3 新老海南苦丁茶提取液对金属离子螯合能力的比较分析

MCC法的原理是通过测定植物对铁离子的螯合能力间接反映物质抗氧化能力[12]；螯合能力越强，说明物质的抗氧化能力越强。

新老海南苦丁茶提取液金属离子螯合率的IC50值见表3，新老海南苦丁茶对金属离子螯合率与质量浓度的关系见图3。

表2 新老海南苦丁茶提取液羟基自由基清除的IC50值

图2 新老海南苦丁茶提取液羟基自由基除能力与质量浓度的关系

表3 新老海南苦丁茶提取液金属离子螯合率的IC50值

图3 新老海南苦丁茶对金属离子螯合率与质量浓度的关系

由表3和图3可知，海南苦丁茶提取液对Fe2+的螯合能力与其质量浓度在一定范围内存在线性相关性，且同质量浓度下，新茶对Fe2+的螯合能力略强于老茶，不过它们均远弱于公认的金属离子螯合剂EDTA-2Na。此外，MCC法中海南苦丁茶提取液的用量远高于DPPH法和HRSA法，表明金属离子螯合并非茶提取液抗氧化的主要途径。

4 结语

试验表明，海南苦丁茶具有较强的抗氧化能力，且新茶的抗氧化能力普遍强于老茶。新茶的DPPH自由基清除能力比VC稍弱。此外，苦丁茶羟自由基清除效果与甘露醇和苯甲酸这2种公认的羟自由基清除剂相比，明显高于甘露醇，与苯甲酸相当。

目前，苦丁茶的研究还多集中在营养成分的测定上，对于其保健功能及保健机理的研究有待于进一步挖掘，同时对于海南苦丁茶的各种功能性成分的提取，苦丁茶保健产品的研制方面也可以多做探索。

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[12]Gül In L.Antioxidant activity of caffeic acid （3,4-dihydroxycinnamic acid） [J].Toxicology，2006 （2/3）：213-220.◇

Studyon Antioxidant Activities ofWater Extract fromHainan I.Latifolia

FAN Weiwei1，CHEN Jie2，HUANG Cun2，*HUANG Huihua2
（1.Sanya Aviation and Tourism College，Sanya，Hainan 572000，China；2.School of Food Science and Engineering，South China University of Technology，Guangzhou，Guangdong 510000，China）

The antioxidant activities of Hainan I.latifolia extract were determined by DPPH radical scavenging assay （DPPH），hydroxyl radical scavenging assay（HRSA） and metal ion chelating ability assay（MCC） .The results showed that Hainan I.latifolia extract has obvious antioxidant activities.The antioxidant activity increased with the increase of the concentration of the extract.The antioxidant ability of new leaves was generally higher than the old leaves.

Hainan I.latifolia；extract；antioxidant activities

R284

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.12.034

1671-9646（2017） 12b-0026-03

2017-10-10

海南省三亚市院地科技合作项目“海南苦丁茶资源保健功能及活性成分的研究”（2014YD53）。

樊伟伟（1982— ），女，硕士，讲师，研究方向为食品加工与分离技术。

*通讯作者：黄惠华（1959— ），男，博士，教授，研究方向为农产品加工与贮藏、食品科学与工程、天然活性产物的分离、食品生物技术。