解冻温度对农药残留的影响探究

张娟 王蒂 唐堂

摘 要：通过添加相同标样的平行样在不同的温度下解冻对比研究，发现解冻温度对于所检测大部分的参数没有影响，但对甲胺磷、氧化乐果、百菌清、三唑酮、氟虫腈这5种农药的影响较大，在实际工作中，可以根据具体情况进行选择，从而提高工作效率。

关键词： 解冻温度；农药残留

中图分类号： S481.8 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20160532015

在实际工作中，制备好的样品常常被放置在-18℃的冰箱里保存，待用时，需出解冻。而放置在常温下解冻的样品，常需要2～3h左右，影响工作效率，故本实验设置样品在不同温度下解冻，并对结果进行对比分析，探究解冻温度对结果是否会有影响。

1 实验部分

1.1 材料与仪器

供试农药标样：农业部农药检定所提供；

试剂：正己烷（色谱纯）、丙酮（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、氯化钠（分析纯）；

主要仪器：气相色谱仪（Agilent 7890A）、氮吹仪、匀浆机等；

分析项目：甲胺磷、甲拌磷、乐果、地虫硫磷、马拉硫磷、对硫磷、水胺硫磷、三唑酮、百菌清、氟虫腈、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、乙烯菌核利、腐霉利、异菌脲、联苯菊酯、氯氟氰菊酯、哒螨灵、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟胺氰菊酯；

标样浓度：浓度均为1000mg/L，配成32mg/L的混标溶液备用。

1.2 实验设计

实验分为3组，A组、B组、C组，每组为3个平行样，解冻温度分别为A组室温（20～25℃）、B组50℃、C组80℃。本次试验为确保结果的准确性，由同一人做3次的平行试验、及由3名不同的实验人员各做1次试验，最后的结果是由6次试验的平均数值得出。

1.2.1 试料制备

取黄瓜可食用部分，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物，采用对角线分割法，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎，制成待测样，分别放入塑料容器中，编号，备用。

分别称取9份25.0g的试料放入三角瓶中，各添加32mg/L的混标溶液0.08L，摇匀封上封口膜后，放置冰箱中于-18℃保存，过夜。注意，有机磷类的农药对在ECD上出峰的时间与三唑酮有相重复的地方（具体见图1），故加标时，需分开。

第2天，取出，分别放置在室温（A组）、50℃的水浴锅（B组）、80℃的水浴锅（C组）中解冻。当解冻至90%左右时，可以取出，利用余温解冻完全。其中A组解冻时间为1h，B组解冻时间为0.5h，C组解冻时间为0.2h。

1.2.2 提取

待完全解冻后，再分别加入50.0mL乙腈，在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5～7g氯化钠的100mL具塞量筒中，收集滤液30～40mL，盖上塞子，剧烈震荡1min，在室温条件下静止30min，使乙腈和水相分层。

1.2.3 净化

有机磷类：从100mL具塞量筒中吸取10.0mL乙腈溶液，放入150mL烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加热，杯内缓缓通入氮气流，蒸发近干。加入2.0mL丙酮溶解，完全转移至10mL刻度试管，定容至5.0mL，摇匀待测。

有机氯、拟虫菊酯类：从100mL具塞量筒中吸取10.0mL乙腈溶液，放入150mL烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加热，杯内缓缓通入氮气流，蒸发近干，加入2.0mL正己烷。将弗罗里硅土柱依次用5.0mL丙酮和正己烷（10+90）、5.0mL正己烷预淋洗，条件化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用15mL刻度离心管接收洗脱液，用5mL丙酮+正己烷（10+90）冲洗烧杯后淋洗弗罗里硅土柱，并重复1次。将盛有淋洗液的离心管置于氮吹仪上，在水浴温度50℃条件下，氮吹蒸发至小于5mL，用正己烷定容至5.0mL，在漩涡混合器上混匀，装入小瓶中，待测。

1.2.4 标准溶液的配制

有机磷、有机氯及拟虫菊酯类定量采用校准线外标法定量。准确移取65μL标样液于10mL容量瓶中，再分别配制成浓度为0.208mg/L、0.156mg/L、0.104mg/L、0.078mg/L、0.052mg/L 的标样标准曲线。其中，有机磷标样用黄瓜基质配制。以标样进样浓度C（ug/L）为横坐标，对应单离子色谱峰面积A为纵坐标绘制标准曲线，相关系数R2 在（0.9993～0.9999）范围内，均呈现正相关系。

1.3 测定

1.3.1 上机测定参考条件

FPD检测器：

色谱柱：75%苯基-25%甲基聚硅氧烷（Agilent生产的 DB-17）柱，30m×320um×0.25um；

进样口温度：250℃ 检测器温度：250℃；

柱温：90℃-1min-1min；10℃/min-180℃-0min-1min； 1℃/min -205℃-0min-35min；10℃/min-255℃-10min-50min；

气体及流量：氮气（60mL/min，纯度≥99.999%） 氢气（75mL/min，纯度≥99.999%） 标准空气（100mL/min）；

进样方式：自动进样 进样量：1μL。

ECD检测器：

色谱柱：苯基甲基二甲基聚硅氧烷（Agilent生产的HP-5）柱，30m×320um×0.25um；

进样口温度：250℃；检测器温度：300℃；

柱温：90℃-1min-1min；30℃/min-170℃- 1min- 4.6667min；8℃/min-230℃-0min-12.167min；2℃/min-

250℃-0min-22.167min ；3℃/min- 275℃- 5min -35.5min；

气体及流量：氮气（30mL/min，纯度≥99.999%）；

进样方式：自动进样 进样量：1μL。

1.3.2 色谱分析

分析吸取标准溶液和样品溶液1μL，以柱保留时间定性，以分析柱获得的样品溶液峰面积与标准溶液峰面积定量。每个平行样前后各进一针标准溶液进行计算，以减少偏差。

表1 有机磷不同解冻温度下的添加回收结果（×10-2）

编号 甲拌磷 甲胺磷 氧化

乐果 地虫

硫磷 马拉

硫磷 对硫磷 水胺

硫磷 乙酰

甲胺磷 乐果 甲基

对硫磷 毒死蜱 杀螟

硫磷 甲基

异柳磷 丙溴磷

空白/（mg/kg） 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

A-1/（mg/kg） 8.0 9.0 9.3 10.7 11.2 12.1 11.0 6.2 7.1 8.9 8.9 8.8 9.0 8.8

A-2/（mg/kg） 7.0 9.5 9.7 10.7 11.4 11.3 11.6 7.4 7.6 8.9 8.9 8.2 9.4 7.9

A-3/（mg/kg） 8.2 9.5 9.8 11.1 10.4 10.7 11.1 7.0 7.5 8.3 8.9 9.8 8.8 10.5

A/（mg/kg） 7.7 9.3 9.6 10.8 11.0 11.3 11.2 6.9 7.4 8.7 8.9 8.9 9.1 9.1

编号 甲拌磷 甲胺磷 氧化

乐果 地虫

硫磷 马拉

硫磷 对硫磷 水胺

硫磷 乙酰

甲胺磷 乐果 甲基

对硫磷 毒死蜱 杀螟

硫磷 甲基

异柳磷 丙溴磷

RSD/% 8.3 6 3.1 2.1 4.8 6.2 2.9 8.9 3.6 3.7 0 9.0 3.4 14.6

B-1/（mg/kg） 7.5 7.4 7.6 10.8 11.0 10.7 10.0 6.4 8.8 8.1 8.4 8.0 8.8 9.0

B-2/（mg/kg） 7.6 7.7 8.4 11.2 9.8 10.3 11.0 6.8 8.9 7.8 8.7 8.0 8.5 8.5

B-3/（mg/kg） 7.4 7.8 6.7 10.8 10.4 11.5 10.2 6.9 8.3 9.6 8.7 8.8 93 9.4

B/（mg/kg） 7.4 7.6 7.6 10.9 10.4 10.8 10.4 6.7 7.3 8.5 8.6 8.3 8.9 9.0

RSD/% 2.8 2.8 11.2 2.1 5.8 5.6 5.1 3.9 11.2 11.3 2.0 5.6 4.6 5

C-1/（mg/kg） 6.7 6.6 5.1 10.5 8.9 10.0 11.0 5.4 6.8 7.7 8.7 7.7 9.2 8.1

C-2/（mg/kg） 6.4 7.0 5.5 10.4 9.5 10.5 9.4 6.8 7.1 9.0 7.9 8.2 8.0 7.6

C-3/（mg/kg） 6.7 6.4 6.1 10.2 9.4 10.2 9.9 6.4 7.4 8.3 9.0 8.2 8.8 9.5

C/（mg/kg） 6.6 6.7 5.6 10.4 9.3 10.2 10.1 6.2 7.1 8.3 8.5 8.0 8.7 8.4

RSD/% 2.5 4.6 9.0 1.5 3.5 2.5 8.1 11.6 4.2 7.8 6.7 3.6 7.0 11.7

表2 有机磷类农药三组结果的比较（×10-2）

序列 甲拌磷 甲胺磷 氧化

乐果 地虫

硫磷 马拉

硫磷 对硫磷 水胺

硫磷 乙酰

甲胺磷 乐果 甲基

对硫磷 毒死蜱 杀螟

硫磷 甲基

异柳磷 丙溴磷

A/（mg/kg） 7.7 9.3 9.6 10.8 11.0 11.3 11.2 6.9 7.4 8.7 8.9 8.9 9.1 9.1

B/（mg/kg） 7.4 7.6 7.6 10.9 10.4 10.8 10.4 6.7 7.3 8.5 8.6 8.3 8.9 9.0

C/（mg/kg） 6.6 6.7 5.6 10.4 9.3 10.2 10.1 6.2 7.1 8.3 8.5 8.0 8.7 8.4

RSD/% 8 16.7 26.3 4.0 8.4 3.9 5.4 4.4 5.5 2.1 1.1 5.4 2.1 4.3

表3 有机氯、拟虫菊酯类农药在不同解冻温度下的添加回收结果（×10-2）

序列 百菌清 三唑酮 甲氰

菊酯 氟虫腈 氯氰

菊酯 氰戊

菊酯 溴氰

菊酯 乙烯

菌核利 腐霉利 异菌脲 联苯

菊酯 氯氟

氰菊酯 哒螨灵 氟氯氰菊酯 氟氰戊菊酯 氟胺氰菊酯

空白/（mg/kg） 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

A-1/（mg/kg） 8.0 8.4 10.0 10.2 10.0 10.6 10.0 8.0 8.4 8.9 9.0 9.8 9.0 9.9 10.0 11.0

A-2/（mg/kg） 8.0 8.5 11.0 9.7 11.0 10.3 10.5 8.6 7.8 8.6 8.2 9.8 8.8 9.6 10.0 11.0

A-3/（mg/kg） 8.6 9.0 12.0 9.5 10.0 10.5 10.4 8.5 7.9 8.4 8.6 10.0 8.9 9.8 10.0 11.0

A/（mg/kg） 8.2 8.6 11.0 9.8 10.3 10.5 10.4 8.4 8.0 8.6 8.6 9.9 8.9 9.8 10.0 11.0

RSD/% 4.2 3.7 9.1 3.7 5.6 1.5 2.6 3.8 4.0 2.9 4.7 6.0 1.1 1.6 0 0

B-1/（mg/kg） 7.2 8.6 10.0 9.0 10.1 10.5 10.0 7.7 8.7 9.4 8.8 9.3 8.4 9.5 8.9 8.8

B-2/（mg/kg） 7.7 8.1 11.0 7.2 10.3 10.0 10.1 8.4 8.4 8.6 8.6 8.9 8.3 8.3 9.5 10.0

B-3/（mg/kg） 7.8 8.0 11.0 7.8 10.4 9.8 9.9 8.0 8.4 8.7 8.7 9.1 8.5 8.9 9.8 10.0

B/（mg/kg） 7.6 8.2 10.7 8.0 10.3 10.1 10.0 8.0 8.5 8.7 8.7 9.1 8.4 8.9 9.4 9.6

RSD/% 4.2 3.9 5.4 11.5 1.5 3.4 1.0 4.4 2.0 1.1 1.1 2.2 1.2 6.7 4.9 7.2

C-1/（mg/kg） 5.6 4.9 10.5 6.8 10.0 10.2 9.9 8.0 8.1 8.1 8.8 9.5 8.7 8.6 9.1 10.0

C-2/（mg/kg） 5.8 4.2 10.2 7.2 10.0 9.8 9.8 7.1 7.0 8.7 7.9 8.2 7.9 8.6 7.9 9.0

C-3/（mg/kg） 5.0 4.9 10.4 5.8 10.3 9.9 10.0 7.4 7.7 8.7 8.4 8.9 8.4 8.9 9.0 10.0

C/（mg/kg） 5.5 4.7 10.4 6.6 10.1 10.0 9.9 7.5 7.6 8.5 8.3 8.8 8.3 8.7 7.7 9.7

RSD/% 7.6 8.7 1.5 10.9 1.7 2.1 1.0 6.1 7.3 4.1 5.5 7.3 4.9 2.0 7.7 6.0

表4 有机氯、拟虫菊酯类农药三组结果的比较（×10-2）

序列 百菌清 三唑酮 氟虫腈 甲氰

菊酯 氯氰

菊酯 氰戊

菊酯 溴氰

菊酯 乙烯

菌核利 腐霉利 异菌脲 联苯

菊酯 氯氟氰菊酯 哒螨灵 氟氯氰菊酯 氟氰戊菊酯 氟胺氰菊酯

A/（mg/kg） 8.2 8.6 9.8 11.0 10.3 10.5 10.4 8.4 8.0 8.6 8.6 9.9 8.9 9.8 10.0 11.0

B/（mg/kg） 7.6 8.2 8.0 10.7 10.3 10.1 10.0 8.0 8.5 8.7 8.7 9.1 8.4 8.9 9.4 9.6

C/（mg/kg） 5.3 4.7 6.6 10.4 10.1 10.0 9.9 7.5 7.6 8.5 8.3 8.8 8.3 8.7 8.7 9.7

RSD/% 21.8 29.9 19.7 2.8 1.1 2.6 2.6 7.1 5.6 1.2 2.4 1.7 3.8 6.4 7.1 7.7

2 结果与分析

2.1 有机磷的结果分析

根据GB/T27404-2008 《实验室质量控制规范 食品理化检测》，添加值在0.1～1mg/kg时，平行样的RSD小于15%，则说明3个样的差异较小，结果可信。由此，可以认定3组值的RSD小于15%时说明解冻温度对其无影响，若大于15%时，则说明解冻温度对检测结果有影响。从表2可以看出，3组结果差异最小的是毒死蜱，相对标准偏差（RSD）为1.1%；差异最大的为氧化乐果，为26.3%。相对标准偏差超过15%的参数有甲胺磷、氧化乐果，说明解冻问题对其检测结果有影响。

2.2 有机氯、拟虫菊酯类的结果分析

从表4中可以看出，3组中结果差异最小的是氯氟氰菊酯，相对标准偏差为1.1%；差异最大的为三唑酮，相对标准偏差（RSD）为29.9%。相对标准偏差（RSD）超过15%的参数有百菌清、三唑酮、氟虫腈，说明解冻温度对其检测结果有影响；对其他参数则无明显影响。

2.3 影响的规律分析

通过表1、表3可以看出，对于被影响的参数（百菌清、三唑酮、氟虫腈、甲胺磷、氧化乐果），发现有一规律，3组回收率均小于100%且A组>B组>C组，即在80℃条件下解冻，回收率较低，最不好；50℃次之；常温下，回收率最高，结果最理想。

3 讨论

从上面数据中可以发现，解冻温度对有机磷、有机氯拟虫菊酯类的农药均有负向影响。所以在实际工作中不可仅仅为了提高解冻速率，对样品直接加热。要具体情况具体分析，如果仅测其他不受影响的参数，可以对样品进行适当加热；而所测的参数中有易受影响的参数，则不可对样品进行加热。主要是因为，当温度升高时，有些熔沸点低的农药容易挥发，不稳定的农药极容易分解，导致回收率低。进一步可以推出，在前处理的提取、蒸发步骤，水浴锅的温度可以调至低于标准中的“80℃”，有助于提高农药的回收率。

参考文献

[1] NY/T761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟虫菊酯类和氨基甲酸酯类农药残留的测定[S].

[2] GB/T27404-2008实验室质量控制规范 食品理化检测[S].