武汉市周边发病鳜体内硝基呋喃类和氯霉素残留分析

喻运珍，邓平，张立强，周伟东，罗杨志，郑青，李勤，余少梅

（1．武汉市农业科学院，湖北 武汉430207；2．武汉中博水产生物技术有限公司，湖北 武汉430070）

鳜（Sinipercachuatsi）隶属于硬骨鱼纲（Osteichthyes），鲈形目（Perciformes），鮨科（Serranidae），鳜属（Siniperca），是我国特有的淡水名贵经济鱼类。因其肉味鲜美、营养丰富，已成为国内极为重要的水产养殖品种[1]，也是武汉市周边主养的重要经济鱼类。

随着鳜养殖面积和养殖密度逐渐增加，导致疾病暴发越来越严重，包括传染性脾肾坏死病毒病、细菌性烂鳃病及原生动物的车轮虫病等是危害养殖鳜的主要疾病[2-3]。养殖户在鳜发生疾病的过程中常常根据经验判断给药，甚至在治疗效果不佳时使用违禁药物，对食品安全和环境造成了潜在的威胁。

目前对水产品抗生素残留的检测主要发生在销售环节[4-5]，而对养殖环节特别是疾病爆发阶段是否添加违禁抗生素的检测鲜有报道。硝基呋喃类和氯霉素为水产养殖上禁用药物，但仍有不少文献报道在水产养殖过程中被普遍使用[6-7]。因此作者收集了武汉市周边地区送检的各个阶段的患病鳜，对其水质、病因进行分析，并检测了硝基呋喃类和氯霉素残留情况，旨在为水产品养殖环节特别是病害发生阶段硝基呋喃类和氯霉素的非法添加状况提供基础数据，并对指导养殖户安全用药，减少滥用抗生素的风险具有重要的指导意义。

1 材料与方法

1.1 样品收集

2019年5—9月收集送往武汉市农科院水产所患病鳜（主要来源为武汉市周边的养殖池塘）共计14批42条。部分养殖户在送检患病鳜前已凭经验用药，甚至使用了违禁药。对发病塘水质按《水和废水监测分析方法》进行测定[8]。病原先通过解剖及显微观察确定病因，对具有细菌性烂鳃典型症状的患病鳜进行病原菌的分离纯化及鉴定[9]，并对疑似传染性脾肾坏死病毒病的患病鳜进行病毒检测[10]。用于硝基呋喃类和氯霉素检测的样品置于－80℃条件下冷冻保存待测定。

1.2 样品处理与分析

将冷冻的样品置于4℃下解冻12 h后，去皮，取肌肉部分匀浆后于-18℃冷冻保存备用。

硝基呋喃类药物（NFs）主要检测4种常见的代谢物，3-氨基-2-恶唑烷酮（AOZ）、氨基脲（SEM）、1-氨基-乙内酰脲（AHD）和5-吗啉基甲基-3-氨基-2-恶唑烷（AMOZ）。按照国家标准农业部783号公告-1-2006《水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》[11]，并适当优化后进行测定。

氯霉素（CAP）依据GB/T 22338—2008《动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》[12]，并适当优化后进行测定。

2 结果分析

2.1 发病塘水质分析

由表1可知，送检的14份水样，pH值变化范围为7.37~8.13，属于偏碱性水体。总氮、氨氮和亚硝态氮浓度变化范围分别为5.03~7.53 mg/L、0.605~2.99 mg/L和0.001~0.779 mg/L。其中有3份水样亚硝态氮浓度低于0.1 mg/L。总磷和活性磷浓度变化范围分别为0.341~1.057 mg/L和0.009~0.74 mg/L。

2.2 患病鳜病因分析

由表2可知，对送检的14批次患病鳜进行实验室解剖，疑似病毒病共计9例，通过PCR检测仅发现1例为鳜传染性脾肾坏死病毒病感染。显微镜下对患病鳜的鳃及体表粘液进行观察，发现3例为车轮虫病。对疑似烂鳃病病原进行细菌培养及鉴定，确定为柱状黄杆菌引起的细菌性烂鳃病。

表1 发病塘水质参数

表2 患病鳜病因分析结果

表3 患病鳜体内硝基呋喃类和氯霉素残留情况

2.3 患病鳜体内硝基呋喃类和氯霉素残留分析

患病鳜体内硝基呋喃类和氯霉素残留情况的检测结果见表3。对14批次患病鳜肌肉中硝基呋喃类残留进行检测发现，14批次样品均未检出硝基呋喃类。对14批次患病鳜肌肉中氯霉素残留进行检测发现，有1例使用了禁用药物氯霉素，检出率为7.14%。

3 讨论

与其他养殖鱼类不同，鳜为肉食性鱼类，主要以活的饵料鱼为食。5—9月是鳜快速生长阶段，摄食旺盛，排泄物较多，水质容易恶化。对14批次患病鳜养殖池塘水质指标分析表明，除3份水样亚硝态氮含量较低外，其他池塘总氮、氨氮及亚硝态氮明显偏高。已有研究表明，较高的氨氮及亚硝态氮可造成鱼类免疫力下降，诱发鳜疾病发生[13-14]。

患病鳜病原检测结果表明，9例疑似病例，通过PCR检测仅发现1例确诊为鳜传染性脾肾坏死病毒病。推测可能是由水环境不良导致鳜产生了应激反应或其他疾病引起，需提高诊断技能。原生动物车轮虫病也是与水环境特别是亚硝态氮密切相关的疾病，车轮虫感染鱼体鳃部后，造成继发性细菌感染，会引发细菌性烂鳃[15]。结合水质指标数据，鳜养殖过程中应注意水质特别是氨氮及亚硝态氮的调控，把水质管理和疾病诊断治疗结合起来，可降低疾病的爆发几率，减少用药风险。

硝基呋喃类药物是一类重要的广谱抗菌药物，在生物体内分别代谢产生AOZ、SEM、AHD和AMOZ。因具有致癌、致突变等不良反应，我国在2002年将硝基呋喃类药物列入《食用动物禁用的兽药及其它化合物清单》[16]。该次调查的武汉市周边发病塘14批次患病鳜样品中，均未检测到硝基呋喃类残余（检出限为0.25μg/kg）。董峰光等对烟台辖区内水产品养殖环节、运输环节、流通环节和餐饮环节硝基呋喃的污染状况调查发现，仅流通环节样品存在硝基呋喃代谢物检出[17]。康海宁等发现广东省市售鳜体内硝基呋喃及其代谢物检出率为4%[18]。王志芳等对广西罗非鱼主产区养殖池塘抗生素残留状况调查发现，在养殖水体、底泥及罗非鱼体内均未检测到硝基呋喃类抗生素[19]。根据已有研究和作者的检测结果推测，硝基呋喃类抗生素在流通环节使用可能更普遍。

氯霉素为广谱抗菌药物，但具有一定的毒副作用。我国在2002年将氯霉素列入《食用动物禁用的兽药及其它化合物清单》[16]。氯霉素作为水产养殖违禁药物，在养殖环节、运输环节、流通环节和餐饮环节仍存在违规添加的情况。邱文倩等对福建省养殖场、批发市场、农贸市场、餐馆、超市和运输车辆的鱼养殖用水调查发现，氯霉素检出率在5.6%～15.6%[7]。华娟等对福建市售动物源性食品中氯霉素类药物的残留水平调查发现，养殖鱼的检出率为82.1%[20]。林佩玲等检测发现大亚湾网箱养殖的虎龙斑和黑鲷中存在氯霉素残留量[21]。该调查的武汉市周边患病鳜样品中1例检测氯霉素，残留量达5.86μg/kg（检出限为0.1μg/kg）。与已有研究相似，氯霉素在鳜养殖环节特别是疾病爆发阶段有添加的可能性。虽然该调查的氯霉素药物检出率不高，但却有较高的检出浓度，对食用者健康仍具有较大的威胁。

因此，在鳜养殖环节要指导养殖户安全用药，强调改善养殖水环境对减少鱼类病害发生的重要作用，并在鳜易爆发疾病阶段加强监管，减少使用违禁药物的可能性。