茄子种子携带真菌的检测

高 苇，杨利娟，刘亚全，王 勇，马建芳

（1.天津市农业科学院植物保护研究所，天津 300384；2.天津市西青区农业技术推广服务中心，天津 300381）

茄子（Solanum melongena L.）起源于亚洲南部热带地区，是一种以浆果为产品的1年或多年生草本植物。茄子是世界上第4大蔬菜作物，而我国是世界上最大的茄子生产国，全国各地均有种植，占世界总种植面积的42.14%。近年来，随着我国设施农业栽培面积的不断扩大，茄子已成为北方设施栽培的主要蔬菜种类之一。随着设施茄子种植面积的逐年扩大，其病害发生也日益严重。目前已报道的茄子上真菌性病原有33属56种，其中黄萎病、枯萎病、绵腐病、轮纹病等是茄子生产中的主要真菌病害，对我国茄子的产量和品种造成巨大的影响。

由于茄子生产中连作和果实容易腐烂等因素的影响，茄子制种中种子带菌现象非常严重。茄子枯萎病、黄萎病病原均可被种子携带，其在病害传播过程中担当了重要传播媒介。真菌可以吸附于种子表面或侵入种子组织内部，从而对种子萌发、幼苗生长、成株健康方面造成巨大的负面影响。目前，我国对于茄子种子携带真菌的研究属于空白阶段，鉴于近年来茄子种植中真菌病害，尤其是茄子枯萎病、黄萎病在我国逐年加重，对20个商品化茄子种子开展了种子带菌检测，以明确茄子种子携带病原真菌的情况，为茄子种植生产过程中的种子处理提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 试验材料

试验在天津市植物保护研究所种苗病害研究室进行。供试商品化茄子种子有20个品种（表1），分别来自陕西、山东、河北等繁种基地，均在通风干燥的条件下保存。

1.2 种子带菌检测

1.2.1 种子外部带菌检测

采用吸水纸法，将无菌滤纸置于培养皿底部，加入无菌水浸润滤纸保湿。在供试20个品种中，每品种随机挑选90粒种子进行种子外部带菌检测，每个培养皿中铺10粒种子，每个品种设3次重复，每个重复3皿。25 ℃黑暗培养24 h后，－20 ℃冻存24 h（抑制种子萌发），冻存后取出继续25 ℃黑暗培养7 d，每天观察各处理种子带菌情况，5 d后发现霉层并直接挑取于PDA平板中纯化培养，并在体视显微镜和光学显微镜下镜检，再根据形态进行种属分类。统计不同品种茄子种子的带菌数量，并计算其带菌率，种子带菌率＝（带菌种子数/检测种子总数）×100%。

1.2.2 种子内部带菌检测

将种子外部消毒处理后，置于PDA培养皿中分离培养，每个培养皿放入16粒种子（挑选籽粒不饱满的种子，因为其带菌率高），每个品种3个培养皿。当种子周围长出菌丝或表面有霉层时，移入PDA培养基上进行纯化培养，根据培养性状和显微形态特征进行分类鉴定。每个供试品种3次重复。计算种子的带菌率和分离频率，特定菌分离频率＝（带某类菌种子数/带菌种子总数）×100%。

1.3 数据统计

采用SAS软件对茄子种子外部带菌率进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 茄子种子表皮携带真菌检测

由表1可知：从不同茄子种子表皮上分离到7个种子常见属的真菌，其中曲霉菌、青霉菌、木霉菌、毛壳菌、根霉菌为腐生真菌，镰刀菌和链格孢菌为茄子疑似病原真菌。种子表皮镰刀菌、链格孢菌、毛壳菌的分离频率较低，木霉菌、根霉菌、曲霉菌和青霉菌分离频率较高，且不同来源茄子种子优势腐生菌也存在差异。不同茄子品种表皮携带真菌的带菌率具有差异，其中墨玉长茄和二苠茄的种子表皮带菌率显著高于其他商品种，黑龙长茄的带菌率最低；另外，在分离过程中还发现文献中未报道的其他病原真菌，但需经过进一步的分子试验鉴定。

表1 茄子种子外部携带真菌种类及分离频率 %

2.2 茄子种子内部携带真菌检测

由表2可知：从供试的20个茄子种子的内部分离到7类真菌，其中包括镰刀菌、链格孢菌2种病原真菌和青霉菌、木霉菌、毛壳菌、曲霉菌、根霉菌5种腐生真菌。种子内部携带真菌数量较少，腐生真菌的分离可能与试验操作污染有关，仅在天赐黑油亮长茄品种上分离到链格孢菌，其分离频率为40.00%；墨玉长茄上分离到镰刀菌，其分离频率为11.11%，而曾报道的茄子种子可能携带的黄萎病菌和绵疫病菌均未分离到。

表2 茄子种子内部携带真菌种类和分离频率 %

3 结论与讨论

种子带菌可导致病害的逐年发生和远距离传播。植物病原真菌寄藏于种子表面或内部后均可随种子萌发而侵染。种子表面带菌量显著高于种子内部带菌量，种子表面携带根霉、曲霉等腐生菌较多，不同来源的种子其腐生菌种类具有差异，内部带菌量较少，分离到的腐生菌很可能与试验操作中污染相关。耿立华等、刘韬等、卢志军等分别对西瓜、水稻和快菜不同品种进行种子带菌检测，发现不同种子外部带菌差异较大，而内部带菌差异不大，主要携带链格孢菌和镰刀菌2种疑似病原菌。

通过对供试的20个茄子品种的检测发现，其中13个茄子表皮携带镰刀菌，16个茄子品种表皮携带链格孢菌，且这2种疑似病原菌的带菌率较低，均在1.52%～13.64%。大多数情况下，镰刀菌和链格孢菌为腐生菌。目前已报道的可侵染茄子的链格孢菌有12种，其中有5种在中国发现，分别为Aspergillus alternantherae、A.alternata、A.longipes、A.melongenae和A.solani，其中以链格孢菌（A.solani）和茄链格孢菌（A.melongenae）为主。我国报道的可侵染茄子的镰刀菌有8种，分别为Fusarium anguioides、F.culmorum、F.graminearum、F.moniliforme、F.oxysporum、F.semitectum、F.solani和F.vasinfectum，其中以尖孢镰刀菌（F.oxysporum）为主，并且其致病力最强，腐皮镰刀菌（F.solani）多侵染嫁接茄子。本研究对茄子种子携带真菌进行的检测，结果发现：茄子种子带菌主要以腐生菌为主，未分离到报道的可通过种子传播的黄萎病菌和绵疫病菌，种子表面分离到可引起茄子枯萎病和叶斑病的镰刀菌和链格孢菌，但由于这2种病原菌不同菌株间存在显著的致病力差异，需要进一步试验判断其是否具有致病力。