复合益生菌对白羽肉鸡消化器官、免疫器官及血清指标的影响

叶思霖，李竺芸，李寒梅，张祥胤，范尚瑞，李新平，丛日华

(西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌 712100)

限制饲料中添加抗生素是一个全球性的问题，每年全球生产的抗生素总量的90%用在了食源动物身上，致使细菌耐药性和药物残留等问题日益突出。自20世纪80年代以来，已有多个国家地区禁止或限制了在饲料中添加抗生素，2006年欧盟全面“饲料禁抗”，2019年7月我国发布饲料全面“禁抗”令(第194号公告)。当前在全球范围内禁用饲用促生长抗生素是共识，无抗或少抗的健康养殖也越来越受到重视[1]。因此，开发安全、有效的饲用抗生素替代品是目前动物生产领域的重要课题[2]。但目前还没有找到任何一款替代品能够完全替代饲料中的抗生素功效且得到公认。

益生菌是微生物培养物、培养物提取物、酶制剂或其混合物的统称，因其能维持和调整肠道内微生物菌群的平衡，提高饲料利用率、生产性能和免疫能力，成为饲用抗生素替代品开发的重要资源[3-4]。乳酸杆菌(Lactobacillus)可通过产生抗菌物质或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌，并通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能[5]。粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)是人和动物肠道内主要菌群之一，能产生天然抗生素，有利于机体健康[6]；同时还能产生细菌素等抑菌物质，抑制大肠杆菌和沙门菌等病原菌的生长，改善肠道微环境[7]；还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖，减少肠道尿素酶和内毒素的含量，使血液中氨和内毒素的含量下降[8]。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)是一种好氧性益生菌，能通过消耗掉肠道内大量的氧来抑制肠道有害菌并促进有益菌的增殖，改善饲料效率和肠道黏膜结构，对防控疾病产生、促进动物生长具有积极作用[9]。

张春杨等[10]报道益生菌剂显著增加了消化道指数，但具体是哪个消化器官变化没有统计说明。研究报道，AA肉鸡日粮中单独添加乳酸菌、枯草芽孢杆菌和粪肠球菌，与对照组相比均显著提高42日龄肉鸡的免疫器官指数，但免疫器官的时间发育变化报道较少[11-13]。

本研究旨在通过在肉鸡日粮中添加由乳酸杆菌、粪肠球菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌，按白羽肉鸡实际生产方式养殖，研究该复合益生菌替代抗生素对处于育雏期(1～21日龄)和育肥期(22～42日龄)白羽肉鸡消化器官、免疫器官以及血清生化指标的影响，为促进益生菌在肉鸡无抗养殖的推广应用提供相应的理论和实践依据。

1 材料与方法

1.1 材料

60 000羽1日龄白羽肉雏鸡，购自陕西质诚生物科技有限公司；复合益生菌(乳酸杆菌、粪肠球菌和枯草芽孢杆菌)均由西北农林科技大学动物医学院菌种保藏中心保存，3种菌以乳酸杆菌∶粪肠球菌∶枯草芽孢杆菌 =5∶2∶3的比例按着特定的工艺流程制作，活菌数 ≥1.0×109CFU/g；抗生素，市售七日开口素。

1.2 试验设计与饲养管理

将体重均匀、健康状况基本相同的60 000羽1日龄白羽肉雏鸡随机分为3组，每组8个重复，每重复2 500羽，对照组饲喂基础日粮添加抗生素，试验组以湿拌料的方式分别饲喂基础日粮添加1‰(低剂量组)、1.5‰(高剂量组)的复合益生菌。试验在陕西质诚生物科技有限公司临潼养殖场展开，饲养管理参照白羽肉鸡的饲养管理手册进行，按管理要求严格控制光照、温度和湿度，保持良好的通风，定期消毒和打扫鸡舍，并按免疫程序对肉雏鸡进行免疫，保证饲料充足，自由采食、饮水。试验期42 d。

1.3 试验日粮

基础日粮配方参考美国NRC(1994)肉鸡的营养标准并结合陕西省当地白羽肉鸡的生产经验配制，具体配方如表1所示。

1.4 样品采集及指标测定

1.4.1 血液生化指标的测定

分别于21 d、42 d从每重复中随机取1羽肉鸡，即每次每组各取8羽肉鸡，进行活体称重，颈静脉采集血液2管，置于4 ℃低温保存运输，其中1管血液样品通过离心(3 500 r/min，10 min)制成血清，置于-80 ℃保存，随后送至陕西省杨凌示范区医院进行血清生化检测；另一管血液样品保存在4 ℃冰箱，于次日送至西北农林科技大学校医院进行血常规检测，结束后将其制成血浆，-80 ℃保存备用。

1.4.2 消化器官、免疫器官指数计算

将1.4.1中随机选取的肉鸡，颈静脉放血处死，立即解剖并分离消化器官(肝脏、肌胃、腺胃、肠道)和免疫器官(脾脏和盲肠)，其中肠道以十二指肠、空肠、回肠和盲肠肠段分别进行称重，称重前用生理盐水洗去内容物，计算消化器官、免疫器官指数。

器官指数(g/kg)=器官重量(g)/体重(kg)。

表1 基础日粮配方组成及营养水平

1.5 数据统计与分析

试验数据采用软件SPSS 13.0进行统计分析，采用Duncan’s 法进行探索性分析和One-way ANOVA进行方差分析，结果以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 复合益生菌对肉鸡消化器官生长的影响

试验鸡消化器官外观均未见异常，具体生长变化见表2。

表2 复合益生菌对肉鸡体重、消化器官重量及其指数的影响(n=8)

21 d时，与对照组相比，高剂量组肌胃指数极显著降低(P<0.01)，高剂量组空肠指数显著增加(P<0.05)。42 d时，与对照组相比，低剂量组、高剂量组肝脏重及其指数、十二指肠重及其指数、空肠重及其指数和总肠道重及其指数表现均为极显著增加(P<0.01)；低剂量组回肠重显著增加(P<0.05)，而高剂量组回肠重及其指数均极显著升高(P<0.01)。

2.2 复合益生菌对肉鸡免疫器官生长的影响

试验鸡免疫器官外观均未见异常，具体生长变化见表3。21 d时，与对照组相比，低剂量组脾脏重及脾脏指数均极显著低于对照组(P<0.01)，高剂量组脾脏重显著低于对照组(P<0.05)。42 d时，与对照组相比，低剂量组盲肠重及其指数均极显著高于对照组(P<0.01)。

表3 复合益生菌对肉鸡免疫器官重量及其指数的影响

2.3 复合益生菌对肉鸡血常规的影响

肉鸡血常规的变化见表4。21 d时，与对照组相比，高剂量组嗜碱性粒细胞比率和红细胞总数均显著降低(P<0.05)，但高剂量组平均红细胞体积极显著增加(P<0.01)。42 d时，与对照组相比，低剂量组红细胞总数、血红蛋白含量和血细胞比容均显著降低(P<0.05)。

表4 复合益生菌对肉鸡血常规的影响

续表4

2.4 复合益生菌对肉鸡血浆生化指标的影响

肉鸡血浆生化指标的变化见表5。21 d时，与对照组相比，低剂量组谷丙转氨酶(ALT)显著增加(P<0.05)，高剂量组极显著增加(P<0.01)；低剂量组血尿素氮(BUN)显著降低(P<0.05)；高剂量组甘油三酯(TG)显著增加(P<0.05)。42 d时，与对照组相比，低剂量组谷草转氨酶(AST)显著降低(P<0.05)；低剂量组胆碱酯酶(CHE)显著降低(P<0.05)；高剂量组血糖(GLU)显著增加(P<0.05)；高剂量组TG极显著增加(P<0.01)；低剂量组低密度脂蛋白(LDL-C)含量显著降低(P<0.05)；高密度脂蛋白(HDL-C)含量无显著变化(P>0.05)。

表5 复合益生菌对肉鸡血浆生化指标的影响

3 讨论

3.1 复合益生菌对肉鸡体重、消化器官的影响

在动物试验中，畜禽体重是衡量试验变量有效与否最直接的证据之一。李宗凯等[14]报道益生菌显著提高了育肥猪生长期平均日增重。Hossain等[15]研究表明，在基础日粮中添加益生菌，肉鸡体重显著增加。但也有Bai等[16]研究表明益生菌对育肥后期肉鸡体重无显著影响。本研究表明，日粮中添加该复合益生菌，对肉鸡育雏期和育肥期的体重均无显著影响。

通常认为以消化器官重量及其指数来衡量肉鸡的消化吸收功能是最直观的。张春杨等[10]研究表明益生菌剂显著增加了消化道指数。本试验显示，复合益生菌能极显著增加42日龄肉鸡肝脏、十二指肠、空肠和总肠道重量及其指数，说明使用该复合益生菌可以促进消化器官生长，从而增强肉鸡消化吸收。此外，高剂量组肌胃生长在21日龄受到了极显著抑制，但这种抑制状况在育肥期消失，这可能与育雏期肉鸡机体还处于适应高剂量复合益生菌定植中有关，其原因有待进一步研究。

3.2 复合益生菌对肉鸡免疫器官的影响

饲养过程中，肉鸡的健康是重中之重，因此肉鸡免疫抗病能力是肉鸡养殖业关注的焦点问题。免疫器官的生长发育是判断肉鸡免疫力强弱的重要依据，其重量和器官指数变化能一定程度上反应机体免疫功能的强弱以及其淋巴细胞增殖的程度，可粗略估计免疫功能的强弱[17]。脾脏是肉鸡体内最大的外周免疫器官，参与全身的细胞免疫和体液免疫，而盲肠内含有大量淋巴组织，可以帮助刺激肠道中良好细菌的生长，对机体免疫起正面作用，两者都与肉鸡机体免疫功能密切相关。李龙等[18]研究结果表明益生菌显著提高了育肥期肉鸡的脾脏指数，而谢文恵等[19]研究表明益生菌对育雏期和育肥期肉鸡脾脏的生长没有显著影响。本研究表明，复合益生菌对21日龄肉鸡脾脏的生长产生了抑制作用，且低剂量组肉鸡脾脏受抑制更明显，但到了42日龄，这种抑制作用消失，3个组之间无显著差异。出现脾脏生长先受到抑制后抑制解除这一现象，可能是育雏期肉鸡还在适应复合益生菌的定植，其原因还需进一步研究。

3.3 复合益生菌对肉鸡血常规的影响

血常规检验的是血液的细胞部分。通过观察血细胞数量变化及形态分布，可以更好地了解畜禽身体状况并进行疾病的早期检测与预防。Cetin等[20]研究显示血细胞数目、血红蛋白含量在高剂量组显著增高，而在Alkhalf等[21]研究中则显示其他2个试验组与对照组无显著差异。本研究表明，复合益生菌显著降低21日龄嗜碱性粒细胞数目，但对42日龄的作用不明显。对红细胞比容在21日龄作用不明显，这与Alkhalf等[21]的研究一致，而在42日龄高剂量组显著降低，这说明红细胞在全血中所占的容积百分比偏低。综合总血红蛋白含量及血细胞数目偏低(降低幅度均在10%左右)，说明该复合益生菌可能产生红细胞下降趋势。目前对饲料添加益生菌改变血细胞的研究较少，其原因还需进一步研究。

3.4 复合益生菌对肉鸡血浆生化指标的影响

血浆生化指标是检测血浆中特定物质含量的一种手段。这些特定物质含量的变化往往能反映机体的生长状态，对畜禽的饲养管理具有重大意义。

AST和ALT活性变化是判断机体肝细胞是否受损的最特异性指标[22]。肝细胞受损、细胞膜通透性增加，AST和ALT就会从肝细胞胞浆中释放出来。Sharma等[23]研究表明益生菌显著增加了消化道指数。研究表明，益生菌对某些肝脏疾病(如脂肪肝)有一定疗效。郝雅蓉等[24]研究表明，使用益生菌能缓解细菌脂多糖导致的ALT升高。本研究结果表明，在21日龄时高低剂量组血液中ALT均显著增加，且高剂量组比低剂量组增加更显著，与已有研究相反。但是在42日龄高低剂量组和对照组血液中ALT没有显著差异，低剂量组AST降低，与已有研究相符。该结果表明使用该复合益生菌替代抗生素可能导致育雏期一定程度的肝损伤，但在育肥期该差异已经消除，这可能与肉鸡早期发育不全，适应复合益生菌的定植有关，其原因还需进一步研究。

CHE也是主要由肝脏合成释放的，当肝脏损伤时CHE的合成减少，所以肝脏损伤的严重程度和血清CHE的含量成反比[25]。42日龄时，低剂量组CHE显著低于对照组，高剂量组有降低趋势但差异不显著。结合ALT变化说明该复合益生菌组替代抗生素可能导致一定程度的肝损伤，其原因还需进一步研究。

BUN通常是作为反映机体蛋白质和氨基酸代谢水平的指标，其含量下降表明机体蛋白质合成增加，氮素利用提高和尿素合成的降低[26]。本试验结果表明，21日龄低剂量组BUN显著降低，这与唐志刚等[27]的研究相符，说明该复合益生菌对蛋白质合成有促进作用。

TG是反映机体脂肪代谢水平的重要指标，与脂类代谢水平成正比。本试验结果表明，高剂量组TG含量在21日龄时显著增加，而42日龄TG极显著增加，这与唐志刚等[27]的研究相反。这说明该复合益生菌对脂类物质代谢有促进作用，其作用机理还有待进一步研究。

4 结论

本研究中日粮添加不同浓度的复合益生菌可以促进白羽肉鸡消化器官，特别是肝脏、十二指肠、空肠的生长，促进脂类合成以及蛋白质和氨基酸的代谢，但对21日龄肉鸡脾脏具有抑制作用。与抗生素组相比体重变化差异不大，说明可以部分或全部替代促生长抗生素进而促进肉鸡生长发育。