乙型脑炎和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的诊断

冯贤巧，陈锦成，陈志科，苏丹萍，贺东生*

（1．阳江市畜牧科学研究与技术推广中心，广东 阳江 529500；2．广州市南沙区大岗镇畜牧兽医站， 广州 511470；3．华南农业大学，广州510640）

乙型脑炎和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的诊断

冯贤巧1，陈锦成2，陈志科1，苏丹萍3，贺东生3*

（1．阳江市畜牧科学研究与技术推广中心，广东 阳江 529500；2．广州市南沙区大岗镇畜牧兽医站， 广州 511470；3．华南农业大学，广州510640）

目前，猪场疫病混合感染的现象普遍存在，给我国养猪业造成了巨大损失。2015年4月广东省某猪场母猪群发生以发热、返情、流产、产死胎为主要特征的传染病，根据发病情况、临床症状、剖检变化并结合实验室诊断方法进行综合诊断，最终结果显示：导致该猪场母猪群繁殖障碍的主要病原为乙型脑炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染。

乙型脑炎；猪繁殖与呼吸综合征；繁殖障碍；混合感染

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的猪急性传染病，造成母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸症状，具有发病快、死亡率高等特点。乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒（JEV）引起的一种主要侵害宿主中枢神经系统的急性人兽共患自然疫源性传染病，主要通过蚊虫传播，可造成妊娠母猪流产、死胎、繁殖障碍，及少数猪的神经症状。由于猪只机体抵抗力下降、病原微生物抗逆性增强、病原种类的日趋复杂、毒株发生变异及饲养管理不当等因素的影响，猪场疫病混合感染的情况普遍存在，这使猪群临床症状更加复杂，同时使死亡率大大提高。2015年4月广东省某猪场母猪群出现以发热、返情、流产、产死胎为主要特征的传染病案例，经临床及实验室综合诊断确诊为猪繁殖与呼吸综合征和乙型脑炎混合感染。现将此次疫情介绍如下。

1 临床症状及剖检病变

2015年4月，广东省某存栏900头母猪的猪场妊娠母猪部分发病，病猪主要为一胎和二胎母猪，占70%左右。妊娠母猪主要表现为怀孕前期返情，中后期流产，临床母猪产死胎和弱仔，部分母猪发热，部分弱仔体温升高，呼吸困难，部分仔猪震颤、神经症状，最后都归于死亡，见图1。

图1 死胎与弱仔

图2 肺部及腹股沟淋巴结病变

剖检死胎可见皮下水肿，胸腹腔积液，肝、肺肿大出血，脾肾有坏死点，脑充血水肿，积液。剖检死亡弱仔可见间质性肺炎，出血，腹股沟淋巴结出血水肿，见图2。

2 实验室诊断

2.1 细菌检测

无菌采集病猪脑、肝、肺及胸腹腔积液，接种于鲜血培养基、麦康凯培养基（MAC）、胰蛋白大豆琼脂培养基（TSA）上，37 ℃温箱中培养24 h以上。同时将病变病料涂片进行革兰氏染色和瑞氏染色镜检。

2.2 病毒核酸检测

选取部分死胎和病死仔猪的具有典型病变特征的脑、肺脏、淋巴结、脾脏等脏器进行研磨处理后，利用TAKARA MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver．5．0试剂盒进行病毒DNA和RNA的抽提，设计合成特异性的检测引物，采用PCR和RT-PCR方法对猪2型圆环病毒（PCV2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、乙型脑炎病毒（JEV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）进行检测。

3 结果

3.1 细菌检测结果

经接种培养，在各培养基上无细菌菌落生长，病料涂片经革兰氏染色和瑞氏染色，未见病原菌，说明引起该次疫情不是由细菌引起，并且无细菌的混合感染或继发感染。

3.2 病毒核酸检测结果

图3 PRRSV RT-PCR检测结果

图4 JEV RT-PCR检测结果

以提取的病料中的总病毒DNA或RNA为模板，使用PCV2、PRRSV、CSFV、JEV、PRV、PPV特异性检测引物进行PCR或RT-PCR反应，结果显示，PRRSV引物的RT-PCR扩增出278 bp的阳性条带（图3），JEV引物的RT-PCR扩增出480 bp的阳性条带（图4），均与预期的片段大小相符；而PCV2、PRV、CSFV、PPV检测无阳性条带出现，为阴性。

4 讨论

随着我国养猪业集约化、规模化程度的不断提高，猪场各种混合感染疫情已屡见不鲜，加上疫病非典型化、病原变异、新发疫病等多方面的原因，给兽医临床的确诊和防治工作增加了一定的难度，并影响着我国现代养猪业健康快速发展。实验室检测诊断及病原基因检测为疫病的确诊提供了技术支持和捷径，尤其是猪繁殖障碍性疫病的临床表现及剖检病变有很大的相似之处，临床的初步诊断不一定完全可靠，需要经实验室诊断才能确诊。

乙型脑炎是一种自然疫源性人兽共患传染病，主要通过蚊虫传播，而广东地处亚热带地区，一年四季均有蚊子存在，是乙型脑炎的高发地区，疫苗是预防本病最有效的方法，免疫不确实极易引起本病的发生。猪繁殖与呼吸综合征给我国养猪业造成了重大的损失，由此引起的猪群免疫力低下、免疫抑制，极易造成猪群的混合感染和继发感染。本次疫情就是在结合发病情况、临床症状、剖检病变的基础上，根据实验室PCR诊断结果，确诊为猪乙型脑炎和猪繁殖与呼吸综合征混合感染。

针对以上结果，我们建议猪场对后备猪和经产猪群全群紧急免疫接种猪乙型脑炎疫苗，2周后接种猪蓝耳病疫苗，疫情在2周后逐步得到控制。这提示我们平时要制定全面、科学合理的免疫程序，在每年的4月份，对猪场进行乙型脑炎疫苗的全群免疫，尤其是后备公母猪；做好猪繁殖与呼吸综合征的免疫，一年免3次。同时定期进行免疫抗体水平监测，提高免疫效果和猪群对疫病的抵抗力。采取一定的综合防治措施，加强卫生和饲养管理，严格控制引种和确保“全进全出”，这是有效防控混合感染发生的重要手段。

2016-02-08）

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*通讯作者