同一猪只圆环病毒抗体水平与病原检出率之间的相关性分析

孙华伟，卢凤英，张敬峰，张晓曦，徐 凯，刘传敏，张小飞＊

(江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，江苏省农科院动物疫病诊断检测中心，江苏 南京 210014）

同一猪只圆环病毒抗体水平与病原检出率之间的相关性分析

孙华伟，卢凤英，张敬峰，张晓曦，徐 凯，刘传敏，张小飞＊

(江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，江苏省农科院动物疫病诊断检测中心，江苏 南京 210014）

为探索一种鉴别猪圆环病毒（PCV）疫苗抗体与野毒感染的ELISA检测方法，本研究通过对江苏省农业科学院动物疫病诊断检测中心临床门诊2017年1—4月接诊的接种过PCV疫苗的30头活猪同时进行PCV抗体和病原的检测，以分析抗体和病原之间的相关性。结果PCV抗体阳性率为100%，病原阳性率为30.0%（9/30)； 77.8%（7/9）病原阳性猪的PCV抗体S/P值大于1.8，70.0%（7/10）PCV抗体S/P值大于1.8的猪为PCV病原阳性；说明高PCV抗体猪与病原检出率之间的相关性较高。即通过对群体的抗体检测能较为准确地判断猪群是否感染了PCV野毒。由于检测抗体远比活体检测病原容易，本研究结果具有较高的实用价值，为江苏省乃至全国猪圆环病毒的诊断与防控提供了有效数据参考，具有推广价值。

猪圆环病毒；疫苗抗体；野毒感染；鉴别

猪圆环病毒 (porcine circoviru，PCV)是DNA病毒，属于圆环病毒科圆环病毒属，是当前已知的最小动物病毒之一[1]。1991年加拿大首次报道PMWS后，世界上许多国家相继报道；2001年我国首次报道PCV感染，之后该病在我国的流行呈逐年上升趋势[2]。PCV经常和猪细小病毒、伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染，造成猪免疫机能下降、生产性能降低，是规模化猪场重要的经济性疫病[3]。PCV又是其他疾病的基础疾病（“钥匙病”），成为影响规模化猪场发展的主要因素[4]。由于对同一头猪同时进行抗体和病原的检测，分析二者之间相关性的文献报道极少，遂对江苏省农业科学院动物疫病诊断检测中心临床门诊2017年1—4月接诊的接种过PCV疫苗的30头活猪同时进行PCV抗体和病原的检测，旨在通过对比分析检测猪只PCV的抗体水平和野毒感染之间的关系，进而为PCV的快速诊断提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

来自江苏省农科院动物疫病诊断检测中心临床门诊2017年1—4月份接诊的接种过圆环病毒疫苗的30头活猪，在剖杀前进行前腔静脉采血，在剖杀后无菌采集肺脏、脾脏、淋巴结和肝脏。上述检测于2017年5月在江苏省农科院兽医所动物疫病诊断检测中心实验室进行。

表1 引物序列信息

表2 PCV抗体检测结果

表3 病料PCV病原检测结果

图1 部分样品的PCR检测结果

1.2 主要试剂及仪器

PCV抗体检测试剂盒购自韩国JBT公司；基因组提取及PCR试剂盒等购自上海Sangon公司；酶标仪型号为宝特ExL808，美国宝特公司生产；冷冻离心机型号为Centrifuge5424R，产自德国；CAVOY型电泳仪；Tanon凝胶成像系统（2500）；其他化学试剂为进口产品或国产分析纯产品；各种规格移液器，购自德国Eppendorf公司；恒温箱水浴锅等。

1.3 方法

1.3.1 抗体检测

PCV抗体检测严格按照韩国JBT公司生产的PCV抗体检测试剂盒说明书进行相关操作。结果判定： PCV抗体检测试剂盒的判断标准为：被检样品 S/P值＜0.30，判为阴性；0.3≤ S/P值＜0.40，判为可疑；S/P值≥0.4，判为阳性。

1.3.2 病原检测

根据相关文献设计引物，引物由南京思普金生物科技有限公司合成，该对引物的扩增目的片段大小为569 bp，见表1。

2 结果与分析

2.1 血清PCV抗体检测结果

30头接种过猪圆环病毒疫苗现场剖杀活猪血清的PCV抗体结果见表2。

由表2可知：30头现场剖杀的接种过猪圆环病毒疫苗猪血清的PCV抗体检测结果均为阳性，抗体阳性率为100%，抗体S/P平均值为1.27。对上述猪只剖杀后采集病料，进行PCV的PCR检测，以分析抗体和病原之间的相关性。

2.2 病料PCV病原检测结果

30头现场剖杀的接种过猪圆环病毒疫苗的猪只病料病原检测结果见表3和图1。

由表2、表3可知：上述30头猪中有9头PCR检测结果为阳性，病原阳性率为30.0%（9/30)； 其中77.8%（7/9）病原阳性猪的PCV抗体S/P值大于1.8，70.0%（7/10）的PCV抗体S/P值大于1.8猪为PCV病原阳性；说明高PCV抗体猪与病原检出率之间的相关性较高。从本次的检测可以看出：仅仅根据抗体检测，虽不能精确地判定猪群是否感染了野毒，但通过对群体的检测能大概率地判断猪群是否感染了野毒。

3 讨论

江苏省农科院动物疫病诊断检测中心在日常的抗体检测和PCR检测中通过对同一头猪同时进行猪瘟、猪蓝耳病、PCV的抗体和病原的检测，以分析抗体和病原之间的相关性，结果发现PCV的相关性最好，即高抗体猪只对应病原的PCR检出率最高，具体原因可能是猪瘟疫苗和猪蓝耳病疫苗都是活疫苗，而猪圆环病毒是灭活疫苗，灭活疫苗产生抗体的能力弱于活疫苗。

通过对上述30头临床门诊接诊猪只同时进行PCV的抗体检测和病原检测发现，如果检测猪只抗体的S/P值大于1.8（韩国JBT公司生产的PCV抗体检测试剂盒），则检测猪只存在PCV野毒感染的可能性较大，该1.8的数值是根据本次检测得出的一个大概的值，如果检测的样本量足够大，该数值可能会小幅度的上下浮动。目前兽医临床上除猪伪狂犬病病毒 gpI 抗体(野毒)检测试剂盒外，其余抗体检测试剂盒尚不能区分检测到的抗体来自于疫苗免疫还是野毒感染，在本中心日常的临床检测中发现，健康状况正常或良好猪群的PCV抗体S/P值绝大部分小于1.8。因此，如果能够对常规的检测方法进行摸索、创新和改进，将会是对目前检测技术非常有益的补充[5]。

[1] 殷震，刘景华.动物病毒学[M].2版.北京：科学出版社，1997.

[2] 李玲，李国新，周艳君.等.2008-2011年中国部分地区猪圆环病毒2型的分子流行病学调查[J].中国动物传染病学报，2012，20（2）：1-10.

[3] 蔡高峰，李凯，张黎，等.猪圆环病毒2型江西株的全基因组克隆和序列分析[J].中国畜牧兽医，2017，44（3）：790-798.

[4] 邵萌，吕亚辉，杜谦，等.2010-2012年陕西地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查[J].西北农林科技大学学报：自然科学版，2013，41（10）：19-26.

[5] 孙华伟，张敬峰，赵永前，等.一种鉴别猪伪狂犬母源抗体与野毒感染的检测方法的建立[J].猪业科学，2016，33（7）：48-49.

2017-05-21）

江苏省科技成果转化与推广资金【编号：KF(17)1033】

孙华伟（1981- ），男，硕士，助理研究员，执业兽医师，主要从事猪病的临床诊断及重大疾病流行规律、诊断、监测和控制技术研究。E-mail：sunhuawei66@163.com

*通讯作者：张小飞