仔猪大肠杆菌引发的黄痢的诊治研究

高艳梅

（延安市宝塔区柳林镇兽医站，陕西 延安 716000）

1 前言

本次试验主要是对延安市宝塔地区的仔猪大肠杆菌病的致病性大肠杆菌进行药敏实验，和根据药敏试验结果对患病猪进行治疗研究。

仔猪大肠杆菌病是猪场的常见病，许多学者都对此病进行过研究。国内外研究主要是针对不同血清型的大肠杆菌。大肠杆菌病的流行凝血研究中应用血清型分类法以来已经积累了大量的资料。不同年龄阶段的仔猪患病主要由不同血清型的大肠杆菌引起，致病性大肠杆菌主要是O型，其致病力与O抗原有关。此种血清型大肠杆菌主要侵入动物血液组织中。仔猪大肠杆菌病主要一类为肠道致病性大肠杆菌病，主要是仔猪黄痢。近年来在治疗预防方面还研究通过疫苗即人工免疫的方式进行预防治疗，但是由于致病性大肠杆菌的血清型很多，而且他们各自还有不同的K抗原，在疾病的发展过程中，现在又不断有新的致病性O和K抗原型的出现。一种致病性大肠杆菌的产毒素质粒还可以转移给其他血清型的大肠杆菌等，这些使人工免疫变得十分复杂。

仔猪大肠杆菌病在延安市宝塔地区发病的形式主要以仔猪黄痢、仔猪白痢两种出现，这两种病的主要临床症状是腹泻，病理特征为消化道损伤[1]。仔猪黄在当地发病率十分高，且发病后治愈率十分低。因此通过对仔猪大肠杆菌病的诊治研究，帮助我们正确地认识疾病，引导养殖户在治疗过程中正确的用药。

2 材料与方法

2.1 实验材料

实验动物：猪，主要为宝塔地区常见的三元杂交猪。患仔猪黄痢的猪3头；未患病1～40d的健康仔猪20头。

实验室解剖器械：手术刀、手术剪、手术台等。

培养基：培养大肠杆菌的液体培养基、琼脂培养基，各种生化培养基、培养皿、37℃恒温箱培养（中国艾测有限公司生产，型号DZX180DZX250DZX320）等。

药物：针对仔猪黄痢的药物：母仔内源康由（抚州市大华动物药业有限公司，兽药字（2005）140011506）、庆大霉素（抚州市大华动物药业有限公司兽药字（2005）140011616）、仔猪痢宝（抚州市大华动物药业有限公司，兽药字（2005）140011638）、保育灵（抚州市大华动物药业有限公司，兽药字（2005）140012074）、普痢美（抚州市大华动物药业有限公司，兽药字（2005）140011052）等；

其他材料：6mm打孔器、滤纸、一次性注射器。

2.2 实验方法

2.2.1 人工接种未患病的仔猪

首先进行致病性大肠杆菌的培养与提取。提取主要从患病猪中提取大肠杆菌，用琼脂培养基做划线培养。得到单个的菌落。然后在肉汤培养基中进行增菌培养：在琼脂培养基中挑取单个的菌落，再接种在肉汤培养基中。通过生化培养基进行大肠杆菌鉴定培养，主要鉴定是否得到的是大肠杆菌菌液。提取好的纯大肠杆菌菌液在2～6℃环境中保存备用[2]。用分离培养得到的纯大肠杆菌菌液通过人工接种未患病的健康猪群，人工感染。感染途径主要通过饮水对仔猪进行感染。

2.2.2 临床症状及病理解剖观察

首先对猪群分别观察患病仔猪的临床症状，并记录。主要观察患病猪粪便的颜色，气味，患病猪精神状况，皮毛的色泽，食欲，呼吸。观察完患病猪的临床症状后解剖患病猪，观察其病理特征，并记录。观察各个器官的病理变化并与健康的猪的各器官作对比[3]。

根据仔猪大肠杆菌病的临床症状和病理症状，挑选感染后具有典型临床症状的发病猪，进行治疗实验试验。

2.2.3 药敏实验

首先进行药物选择：宝塔地区的兽药很多，此次实验选取的药物主要为当地常见的一些药物，这些药物主要是针对不同类型的大肠杆菌病，包括当地养殖户常用的单方药与复方药，中药以及西药。可以进行实验的药物有：1针对仔猪黄痢的药物有母仔内源康（拌料用药）、普痢美（拌料用药）、庆大霉素、仔猪痢宝等、保育灵。然后进行药敏片的制备：选用质量较好的滤纸片（定量滤纸），用打孔器打成直径为6mm的圆片，每l00片放入一小瓶中，160℃干热灭菌1～2h或高压灭菌后，在60℃条件下烘干备用。计算抗菌用药的药物浓度并配置药液。计算方法：1.计算最小浓度值按药物使用说明上的配料或饮水比例换算成一个基本单位药量（以能准确称量药品的最小值为宜，如0.5g、lg、2g等），而需要配多少料或饮多少水，则相当于配制浸泡药片的药品浓度时所加蒸馏水的ml数。例如，药品使用说明上标明5g本品可拌50kg饲料，其换算方法为lg本品可拌10kg饲料，也就是1g本品拌l0000g饲料，相当于药品浓度为lg本品加l0000ml蒸馏水。2.浓度配制准确称取上述基本单位药量（片剂要研磨成粉末后再行称量），在无菌条件下，按下列分列项用蒸馏水进行倍比稀释。根据以上换算lg本品加10000ml蒸馏水，即lg本品加10×l0×10×l0ml蒸馏水。如出现lg本品拌320g饲料等情况，可改成1g本品拌320g饲料，即加l0×4×8ml蒸馏水。这样改动易形成分列项，并不影响实际效果。因为在配料时可按纸片浓度lg本品拌320g饲料进行拌料。如果所加蒸馏水量较少或现场蒸馏水充足，可不按上述倍比稀释法稀释，而直接按配料或饮水比例一次稀释而成[4]。制作好药物液体后进行药敏纸片的浸泡。取50ml已配制好的药液注入已经灭菌的干净平皿中，取30到50个药敏纸片，放入已经加入药液的平皿中。放入的纸片要单个分离，不能粘连在一起，这样能使每张纸片上的药物均匀。纸片放入后，把平皿放入冰箱，并且每隔30min翻动纸片一次，这样做保证纸片两面的药物均匀。3h后拿出药片，并在37℃的温箱中烘干。烘干后放入干净的灭菌瓶中，并再放入冰箱中冷冻保存。当药敏片制备好后进行药敏实验。用微量移液器移取200ux大肠杆菌24h营养肉汤培养物，滴于普通琼脂培养基上，使用灭菌L型棒涂布均匀，盖好平皿静置2～3min后，待培养基表面干燥后用无菌镊子取含有不同药物的药敏纸片贴在琼脂表面上，中药药敏纸片和西药药敏纸片分为两组，分别贴于不同的培养板，每组培养基的药敏片数量为4个。37℃培养24h后取出，测量抑菌环直径[5]。

2.2.4 药物治疗

药物治疗主要为用药敏实验得到的敏感性药物治疗患病猪。分别设定实验组和对照组。对照组为未感染的健康猪群，根据患病类型设用不同日龄的健康仔猪分三个对照猪，分别为初生1～10d仔猪，7～20d仔猪以及断奶后的仔猪。实验组分别设仔猪黄痢实验组、对照组。

给人工接种感染仔猪黄痢的发病猪分别用：给药方法为每天按每公斤体重0.1ml分别注射庆大霉素、保育灵、仔猪痢宝，1d两次连续用2d。母猪饲料中分别添加母仔内源康、普痢美每1000kg中添加100g。连续用药7d。

实验组和对照组（健康猪群）。7d后观察治愈猪与健康猪的临床表现与解剖特征。同时对比患病猪与治愈猪的临床表示和解剖特点。通过对比健康猪与曾患病猪在临床和解剖特征上的区别，得出每种药物的治愈率。

3 实验结果

3.1 宝塔地区常用药物药敏实验结果

仔猪大肠杆菌病引起的仔猪黄痢型其药敏实验如表1。注：抑菌圈直径大于15mm认为高度敏感，在10～15mm之间认为敏感，小于10mm认为不敏感[6]。

表1 针对仔猪黄痢的药物抑菌结果

表2 仔猪黄痢治愈率

表3 黄痢型患病猪，患病治愈猪和正常猪的临床表现对比

通过不同药物对引起仔猪黄痢的致病性大肠杆菌的抑菌圈大小可以看出，当地常见的治疗药物中，产生抑菌圈最大药物为仔猪痢宝，抑菌圈最小的为阿米卡星。

3.2 人工接种健康猪后进行药物治疗结果对比

实验主要是据仔猪大肠杆菌病的体外抑菌实验结果进行。

通过给人工接种的患仔猪黄痢的猪进行药物治疗实验，实验结果发现治疗效果最好的药物是仔猪痢宝。母仔内源康和普痢美是通过给哺乳母猪喂药，进行仔猪的治疗，其治疗效果分别达到85.6%和87.1%。通过治疗研究发现这些药物对仔猪黄痢的治疗率都超过80%。

3.3 治愈后对比患病猪，患病治愈猪和正常猪临床特点，解剖特点

通过对患病猪，患病后治愈猪以及正常猪对比它们的临床特点，解剖特点观察药物对患病猪的治疗效果。

3.3.1 黄痢型患病猪，患病后治愈猪和正常的猪临床和解剖特点对比

通过最仔猪黄痢患病猪和未患病猪以及患病后治愈猪的临床特点，剖检结果可以看出患病后用药猪均恢复正常，且预后良好。这个结果能够进一步说明这些药物对仔猪黄痢的治愈效果良好

4 结论

通过对延安市宝塔区的大肠杆菌病进行病原的药敏实验和治疗实验找出当地常用的治疗药物中，对仔猪大肠杆菌有效的治疗药物有针对仔猪黄痢的药物有母仔内源康（拌料用药）、普痢美（拌料用药）、仔猪痢宝等、保育灵。因此在当地治疗仔猪大肠杆菌病时推荐使用上述药物。