利用维生素B2含量的变异系数考察预混合饲料混合均匀度

施杏芬，朱聪英

（浙江省兽药饲料监察所，浙江杭州311000）

复合预混合饲料是配合饲料的核心，其混合均匀度的好坏直接影响配合饲料的品质。饲料混合均匀度测定的现行标准有GB/T 5918和GB/T 10649，然而这两种标准均不适用于复合预混合饲料和维生素预混合饲料。本实验旨在选择合适的方法开展预混合饲料中混合均匀度的测定。考虑到脂溶性维生素相对不稳定，而维生素B2不仅比较稳定，而且在预混合饲料产品中添加量比较适中，因此依据GB/T 14701-2002标准，采用高效液相色谱法测定维生素B2含量，用其含量的变异系数来衡量复合预混合饲料的混合均匀度。方法简便易行，企业可以结合定期检验同时进行混合均匀度验证。

1 采样和试样制备

从同一批产品中抽取10个有代表性的原始样品，每个样品在一点集中采集，每个样品的采样量为50～100 g，试样制备按GB/T 20195执行。

2 试剂与材料

2.1 试剂与溶液 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、庚烷磺酸钠（优级纯）、冰乙酸（优级纯）、三乙胺（色谱纯）、甲醇（色谱纯）。提取液：称取50 mg EDTA于1000 mL容量瓶，加纯水溶解后，加入25 mL冰乙酸和5 mL三乙胺，并用纯水定容至刻度摇匀。流动相：称取50 mg EDTA和1.1 g庚烷磺酸钠于1000 mL容量瓶，加纯水溶解，加入25 mL冰乙酸和5 mL三乙胺，并用纯水定容至刻度摇匀，再用冰乙酸或三乙胺调pH至3.40±0.02，过0.45 μm滤膜。取该溶液860 mL与甲醇140 mL混合，超声脱气，待用。

2.2 主要仪器 高液相色谱仪（配紫外检测器）、超声波清洗器、pH计。

2.3 标准溶液配制 准确称取维生素B2标准品（含量≥98.0%）0.0100 g于200 mL棕色容量瓶，加1 mL冰乙酸和100 mL纯水，置50℃超声波清洗器中超声溶解，冷却至室温后用纯水定容至刻度，摇匀，此溶液浓度为50 μg/mL，4℃冰箱避光保存6个月。准确吸取该溶液3.0 mL于10 mL棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀。该标准溶液浓度为 15 μg/mL，过 0.45 μm 滤膜，上机测定。

3 测定

3.1 试样提取 称取试样0.25～3 g（视维生素B2标示值称量，精确至0.0001 g）于100 mL棕色容量瓶，加入80 mL左右的提取液，置于50℃超声波清洗器中超声30 min溶解，期间摇动若干次，冷却至室温加入14 mL甲醇，用提取液定容至刻度，摇匀，维生素预混合饲料可用提取液适当进行稀释。过0.45 μm滤膜，上机测定。

3.2 色谱条件 NoVa-pak色谱柱：150mm×3.9mm，粒度4 μm的C18柱或相当者；流速：1.0 mL/min；进样体积：10 μL；柱温：30 ℃；检测波长 280 nm。

4 结果计算

4.1 各试样中维生素B2含量计算公式

式中：X为试样中维生素B2的含量，mg/kg；m为试样质量，g；Vi为试样溶液进样体积，μL；Pi为试样溶液峰面积值；V为试样定容体积，mL；ci为标准溶液浓度，μg/mL；Vst为标准溶液进样体积，μL；Psti为标准溶液峰面积值。

4.2 混合均匀度变异系数计算 通过10个维生素B2试样含量的平均值（X-）和标准差（S）计算得到混合均匀度变异系数，结果见表1。

维生素B2含量的平均值按下式计算：

5 结果与讨论

随机抽取5个不同预混合饲料产品，用上述方法测定了混合均匀度变异系数，结果见表1。结果显示这5种预混合饲料产品的混合均匀度均小于5%，符合《饲料生产企业许可条件》中规定的设备混合均匀度变异系数的要求。

表1 5种不同预混合饲料产品混合均匀度变异系数测定结果

该方法可以为预混合饲料生产企业提供混合机的混合性能验证、最佳混合时间确定的方法依据。对于配合饲料生产企业，也可以用该方法考察、验证小料混合机的混合性能、确定最佳混合时间.