日粮中添加微生物制剂对哺乳期马驹生长性能、血浆激素水平和免疫指标的影响

杨 帆 ， 李海英 *， 陈贤婷 ， 李晓斌 ， 马 军 程 元 ， 何周瑞

（1.新疆农业大学动物科学学院，新疆乌鲁木齐830052；2.新疆肉乳用草食动物营养实验室，新疆乌鲁木齐 830052）

哺乳期的马驹有采食母马粪便的习性，这是马驹摄取肠内有益细菌的重要行为，为马驹的消化道能够消化粗饲料创造条件。但食入大量的粪会在消化道内停滞，严重时会导致马驹死亡，另外，粪便中常常含有大量的寄生虫，这会引起马驹患寄生虫病。此外，马驹经历了从食乳到食料，再到食草的过程，其消化生理发生较大的变化，机体本身生长发育机能尚不完善，是一个重要的生理转折期，在此期间，马驹后肠道微生物发挥着重要作用。因此，建立早期正常的微生物区系，对促进马驹肠道对营养物质的消化吸收，减少肠道疾病的发生具有重要作用。

微生物制剂又称益生菌，其能够改善宿主肠道中微生物菌群平衡，为马驹的健康成长和提高粗饲料的消化率提供良好的肠道微生物基础。Losada和Olleros（2002）发现，益生菌的代谢产物可以促进宿主对营养物质的消化吸收。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）均属于益生菌，在其繁殖和自身代谢过程中会产生多种消化酶，这些酶能够分解日粮中的营养物质，提高动物肠道中消化酶的活性，从而提高动物对营养物质的吸收效率，使得动物能够更快更好地生长（Signorini等，2012；王苇等，2013）。本试验在饲喂相同基础日粮的条件下，添加不同剂量的枯草芽孢杆菌与植物乳杆菌所组成的复合菌，探究不同剂量的复合菌对哺乳期伊犁马驹生长性能、血浆激素水平和免疫指标的影响，为微生物制剂在马驹生产中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验时间及地点 本试验于2014年7月5日至10月15日在新疆伊犁哈萨克自治州昭苏军马场进行。

1.2 材料 枯草芽孢杆菌制剂和植物乳杆菌制剂购自河北沧州中信生物科技公司，其中枯草芽孢杆菌活菌数为2×1011cfu/g，植物乳杆菌活菌数为 3×1010cfu/g。

1.3 试验动物与设计 试验选取1月龄、体重相近的20匹马驹，随机分为4组，每组5匹。预饲期为10 d，正式试验期为90 d（补饲试验）。

1.4 饲养管理 马驹的饲养采用当地牧民的饲养方式，试验马驹在母马挤乳、自由饮水的同时，每天按体重的0.6%补喂精料补充料，分别在北京时间9:00、l3:00、l7:00进行补喂。在北京时间9:00，将复合微生物制剂按照不同剂量分别放入胶囊与精料混合进行饲喂。使用料兜进行补饲（料兜的大小根据马驹脸型的大小制作，达到马驹既不会将饲料倒出，又不会导致马驹呼吸困难）。马驹的基础日粮配方参照美国国家研究委员会（NRC）马饲养标准中的马驹营养需要量，结合地方现有饲料条件制定并制成颗粒饲料，试验日粮组成及营养水平见表1。

表1 试验日粮组成及营养水平（以干物质计）%

1.5 测定指标

1.5.1 生长性能测定 在试验开始后0、15、30、45、60、75、90 d对所有试验马驹进行空腹称重。

1.5.2 血液指标测定 在试验开始后0、10、20、30、40、50、60、70、80、90 d 对所有试验马驹进行空腹颈静脉采血，并于3500 r/min离心15 min后收集血浆，再分别装入1.5 mL Eppendorf管中，做好标记后放入-20℃箱中保存待测。测定血浆中的神经肽Y （NPY）、生长抑素 （SS）、生长激素（GH）、胰岛素（INS）、免疫球蛋白 A（IgA）和免疫球蛋白G（IgG），所有指标均由北京华英生物研究所检测。

1.6 数据处理 数据采用SPSS 19.0统计软件进行单因素方差分析，采用Duncan’s法进行各组之间的多重比较。试验结果均以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 微生物制剂对哺乳马驹体重的影响 从表2可知，各组之间初始重差异不显著（P＞0.05）。在试验的1～30 d和30～60 d，与对照组相比，各试验组体增重均无显著差异 （P＞0.05）；60～90 d，试验Ⅱ组与对照组相比体增重提高了39.47%（P＜0.05），但试验Ⅰ、Ⅲ组与对照组相比，体增重差异均不显著（P＞0.05）；整个试验期，各试验组总增重和平均日增重均显著高于对照组，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组总增重分别提高了17.50%、15.33%、11.37%（P ＜ 0.05），试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组平均日增重分别比对照组提高了16.44%、15.07%、13.70%（P ＜ 0.05）。

表2 微生物制剂对哺乳马驹体重的影响（n=5）kg

2.2 微生物制剂对哺乳马驹血浆激素水平的影响 由表3可知，在NPY方面，试验Ⅱ组在试验的 30、60 d时，均极显著高于对照组（P＜0.01）；试验Ⅰ组在试验的30 d显著高于对照组 （P＜0.05）；在试验的90 d，试验Ⅱ、Ⅲ组均极显著低于对照组（P＜0.01），试验Ⅰ组显著低于对照组（P＜0.05），而各试验组之间均无显著差异（P＞0.05）。

表3 微生物制剂对哺乳马驹血浆激素水平的影响（n=5）

在SS方面，试验Ⅰ组在试验的60 d显著低于对照组（P＜0.05）；试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在试验的30 d均低于对照组，而在90 d时，均高于对照组，但差异均不显著（P＞0.05）；在整个试验期，各试验组之间均无显著差异（P＞0.05）。

在HGH方面，30 d时，各试验组与对照组相比，差异均不显著（P ＞ 0.05）；60 d时，各试验组均高于对照组，而在90 d时，各试验组均低于对照组，但差异均不显著（P＞0.05）；各试验组之间在试验的各个阶段均无显著差异（P＞0.05）。

在INS方面，在试验的0～30 d，各组血浆INS含量均无显著差异（P＞0.05）；随着马驹的生长，到试验的第60天，试验Ⅱ组显著低于对照组（P＜0.05），其他各组均无显著差异；第90天，各组间差异均不显著（P＞0.05）。

2.3 微生物制剂对哺乳马驹免疫指标的影响

由表4可知，从血浆中IgA含量可以看出，各试验组马驹血浆中的IgA含量均随着年龄的增长呈现先降低后升高的趋势，各组间差异均不显著（P＞0.05）；补喂低、中、高剂量的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌复合菌的马驹血浆中的IgG含量在整个试验期均无显著变化（P＞0.05）。

表4 微生物制剂对哺乳马驹免疫指标的影响（n=5） g/L

3 讨论

3.1 微生物制剂对哺乳马驹体重的影响 体重是衡量马驹生长发育的直观指标，体重的增长需要大量的营养物质供给，然而，哺乳期马驹胃肠道发育不完全，对饲草料的消化吸收率低，不能满足体重快速增长的需求。研究表明，枯草芽孢杆菌进入动物肠道后，能迅速在肠道中复活并分泌高活性的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶，有助于降解植物性饲料中复杂的碳水化合物，提高动物对饲料的利用率，从而促进动物生长发育（江国忠，2010；肖发沂，2008）。植物乳杆菌能够合成多种酶，能够促进动物机体对营养物质（淀粉、脂肪、蛋白质）的消化吸收，同时也能提高机体对纤维素、木质素、果胶等的分解转化和新物质的合成（杨艳等，2013）。大量研究表明，枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌具有提高畜禽体增重，促生长的作用（刘晓琳等，2011；郑春芳和于桂阳，2008）。在本试验中，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的平均日增重比对照组分别显著提高了16.44%、15.07%、13.70%。本试验研究结果与以上研究结果相似，可能是因为枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌进入肠道后，会快速占据肠道的结合位点，利用营养物质增殖，其代谢产物（如消化酶、有机酸等）被机体所利用，进而提高机体对营养物质的消化吸收率，促进体重增加。

3.2 微生物制剂对哺乳马驹血浆激素水平的影响 NPY是一种神经递质，与其受体结合后具有调节动物的采食和机体内分泌等功能 （胡春燕和李文英，2011）。郭锡熔等（2002）研究发现，阻断大鼠体内NPY Y5受体结合可使脂肪组织的mRNA表达量显著下降以及血清胰岛素明显降低。Lavebratt等（2006）研究发现NPY能够促进NPY Y2的释放，并促进机体脂肪组织的生长，从而使得动物体重增加。本试验研究结果表明，在哺乳前期（试验的30 d和60 d），补喂中剂量的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的马驹，血浆中NPY含量均极显著高于对照组，补喂低剂量的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的马驹，血浆中NPY含量显著高于对照组，而在哺乳后期（试验的90 d），补喂枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的组合物后，均显著降低了马驹血浆中NPY含量，表明补喂低、中剂量的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌可提高哺乳前期马驹血浆中的NPY含量，促进马驹采食，提高马驹的体增重，从而促进马驹生长。对于哺乳后期，补喂不同剂量枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌均显著降低了马驹血浆中NPY含量，可能是由于马驹肠道微生物已基本建立，马驹日粮、肠道中的微生物达到动态平衡，使得马驹机体生长调节也出现了相应的改变。

SS是一种下丘脑分泌的神经内多肽（雷姗，2014），其具有抑制垂体生长激素分泌和参与调节机体生长发育、新陈代谢和免疫等生理功能（李文笙和王滨，2013）。本试验结果表明，在试验的30 d和60 d，补喂枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的复合菌的马驹血浆中的SS均低于对照组，其中在试验的60 d，补喂低剂量的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的复合菌能够显著降低马驹血浆中的SS的含量，而哺乳后期马驹血浆中SS的含量没有显著变化，具体作用机制尚不明确，有待进一步研究。

GH是一种非糖化蛋白类激素，通过促进生长因子或胰岛素样生长因子分泌，抑制机体利用葡萄糖从而使血糖含量升高并促进蛋白质的合成（Junnila，2013；Pekic 和 Popovic，2013），进而促进机体的生长发育。INS是重要的激素之一，不仅能够调节机体血糖浓度，而且能够促进脂肪和蛋白的合成（李永光，2014）。林谦等（2012）给雏鸡在基础日粮中补喂益生菌制剂25 g/t（枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，活菌数5×1010cfu/g），结果表明，益生菌制剂组的雏鸡血浆中的GH含量与对照组相比，无显著变化；对照组血浆中的INS含量最高，但各组差异均不显著。在本试验中，在整个试验期，各组之间的GH均无显著性的变化，说明枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的复合菌对马驹体内的GH的代谢调节无显著影响；在哺乳前期（试验的0～60 d），补喂枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的复合菌能够不同程度降低血浆中INS的含量，其中在试验的60 d，补喂中剂量的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的复合菌显著降低了马驹血浆中的INS含量，而在哺乳后期，补喂枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的马驹血浆中INS含量无显著变化，说明在哺乳前期补喂中剂量的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌能提高机体的合成代谢，而哺乳后期的作用效果没有前期明显。

3.3 微生物制剂对马驹免疫指标的影响 免疫球蛋白是机体特异性体液免疫中重要的免疫分子，具有免疫防御、免疫监视和免疫自稳的功能（郭孟琦，2013）。IgG是人和动物血液中含量最高的免疫球蛋白，同时也是机体再次免疫应答产生的主要抗体。IgA具有抗菌、抗病毒等作用，是机体黏膜防御感染的重要因素，也是防止病原体入侵机体的第一道防线（王虎伟，2012）。研究表明，枯草芽孢杆菌的分泌物可通过免疫调节来保护肠道，乳酸杆菌中的多糖类成分能够分泌细胞因子，激活吞噬细胞等，从而抵抗病原菌的感染 （任大勇，2013；Okamoto 等，2012）。 王喜明（2008）研究发现，犊牛补喂0.2%益生素 （总活菌数＞9.6×109cfu/g），结果表明，各组血清 IgG、IgM、IgA 含量差异均不显著。徐基利和许丽（2011）给肉仔鸡饲喂0.2%的乳酸菌制剂，结果表明，添加0.2%的乳酸菌制剂组与对照组相比，血清IgA含量差异不显著。本试验结果表明，在整个试验期，各组血浆中的IgA和IgG含量，均无显著差异。本试验结果与以上研究结果相似。

本试验中植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌组合对马驹的增重和激素的调节作用表明，补喂枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的组合菌对马驹的生长发育的影响不仅与饲喂的剂量有关，也和马驹的月龄有关。其对马驹具有调节内分泌的功能，能够迅速提高哺乳前期（100日龄以内）马驹的生长代谢水平，补喂低、中剂量的植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌组合菌能够促进马驹生长，并且对哺乳前期马驹的作用效果要优于哺乳后期。

4 结论

4.1 马驹补喂枯草芽孢杆菌0.025 g和植物乳杆菌0.033 g能够显著提高日增重。

4.2 马驹补喂枯草芽孢杆菌0.025 g和植物乳杆菌0.033 g与补喂枯草芽孢杆菌0.050 g和植物乳杆菌0.066 g对哺乳前期（100日龄）马驹血浆激素水平有不同程度的改善作用，但对哺乳后期的马驹作用效果不明显。

4.3 马驹补喂枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌对哺乳马驹免疫指标无显著影响。

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