六氢β-酸月桂酸酯在鸡体内的药动学研究

彭险峰，黄计军，叶晓岚，李俊健，任 阳，姜美华，区煜荣

（广州英赛特生物技术有限公司，广东广州 510663）

研究发现，六氢β-酸较适合于作为替代饲用抗生素的新型促生长剂的先导化合物开发，并且其分子酯化后，饲料加工过程中的稳定性大大提高。六氢β-酸月桂酸酯是其中的一种酯化物（彭险峰和覃宗华，2014）。目前该酯的口服药动学及生物利用度研究尚未见报道。本试验进行了六氢β-酸月桂酸酯在健康鸡体内的药动学及生物利用度研究，为其进一步研究和应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试药与试剂 六氢β-酸月桂酸酯，批号：20140910，含量：53.0%，广州英赛特生物技术有限公司研制。甲醇、乙酸、乙腈均为色谱级，其他试剂均为分析试剂。六氢β-酸月桂酸酯标准品，溶解于适量乙醇，配制成1000 μg/mL的标准储备液，置-20℃备用。

1.2 仪器设备 LC-15C岛津高效液相色谱仪（LC-15C二元泵，自动进样器，SPD-15C紫外检测器，LC solution色谱工作站），日本岛津公司；CT14RD台式离心机，上海天美科学仪器有限公司；氮吹仪，YSC-24型，成都雅源科技有限公司；FA2104型电子分析天平，上海民桥精密科学仪器有限公司；IKA-MS3旋涡混合仪，德国IKA公司；色谱柱为Hanbon&Science Benatach-NH2 C18（4.6×250 mm，5 μm）。

1.3 试验动物 体重为 （2.0±0.1）kg的岭南快大黄肉鸡（12只）、102型肉鸡饲料（不含抗生素），均由广东省农业科学院畜牧研究所提供。试验期间按常规饲养，自由饮水和采食。

1.4 给药及采样 试验前16 h禁食，自由饮水，给药后禁饲4 h。动物称重后随机分为2组，每组6只鸡，分别单剂量灌胃六氢β-酸月桂酸酯（40 mg/kg体重）和静脉注射六氢β-酸月桂酸酯（1 mg/kg体重）。鸡侧卧保定，给药前采一次空白血样。分别于给药后 0.083 （仅静注）、0.17、0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12 h 采血约 2 mL， 立即移入加有抗凝剂的离心管中，4000 r/min离心10 min，分离血浆，置于-20℃冰箱保存，待测。

1.5 血浆样品处理 精密吸取0.75 mL待测血浆于离心管中，加入80%正己烷0.75 mL，漩涡混匀 30 s，8000 r/min离心 10 min， 取上清液 0.60 mL，氮气吹干，残渣用 60 μL正己烷复溶，12000 r/min离心10 min后进行HPLC分析。

1.6 检测色谱条件 流动相为正己烷-异丙醇（60∶40，V/V）；检测波长为 315 nm，流速 0.8 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。

1.7 标准曲线 分别取一定量的六氢β-酸月桂酸酯储备液添加到6个10 mL具塞离心管中，分别加入适量空白血浆，配制成含一定浓度的六氢β-酸月桂酸酯血浆标准工作液（0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 μg/mL），按 1.5 方法进行处理后测定，记录色谱图与峰面积，采用峰面积外标法定量。

1.8 数据处理 血液药时数据采用药动学软件WinNonLin 5.2.1的非房室模型统计矩分析方法处理，药动学参数用“平均值±标准差”表示。

2 结果

2.1 标准曲线和线性范围 空白血浆中添加六氢β-酸月桂酸酯后，按本试验方法进行检测，六氢β-酸月桂酸酯添加量为0.05～2 μg/mL，线性关系良好（Y=5562X+1008，R2=0.999）。在本试验条件下，最低检测量为1 ng，最低检测浓度为0.05 μg/mL。

2.2 精密度与回收率 分别配制含六氢β-酸月桂酸酯0.05、0.2、1 μg/mL的标准血样，各浓度每批5个重复，连续3批，分别测定精密度及回收率。测得的回收率分别为 （101.25±4.25）%、（99.73±3.16）%、（99.85±3.41）%，测得各浓度日内相对标准差 （RSD）小于5%，日间的RSD小于10%，满足药动学试验检测要求。

2.3 口服或静脉注射六氢β-酸月桂酸酯在鸡体内的药动学特征 健康鸡单剂量灌胃或静脉注射给药六氢β-酸月桂酸酯后，六氢β-酸月桂酸酯的血浆药物浓度-时间曲线如图1所示。药时数据经药动学软件 WinNonLin 5.2.1的非房室模型统计矩分析方法处理后的药动学参数见表1。

图1 六氢β-酸月桂酸酯在鸡体内的药时曲线

由表1可见，鸡灌胃六氢β-酸月桂酸酯（40 mg/kg体重）后，吸收缓慢，给药后1.0 h血药浓度达峰值，平均Cmax为0.04 μg/mL，说明六氢β-酸月桂酸酯在鸡体内吸收量较少；血浆中平均消除半衰期（T1/2）为 2.35 h，平均滞留时间（MRT）为3.55 h，提示其在鸡体内消除较快；曲线下面积（AUC）为 0.13 μg·h/mL，生物利用度为 0.4%，表明其吸收极少。静脉注射六氢β-酸月桂酸酯（1 mg/kg体重）后，5 min的血药浓度平均值为0.99 μg/mL，显著高于灌胃给药；血浆中平均消除半衰期（T1/2）为 1.10 h，平均滞留时间（MRT）为 1.27 h，消除较快；曲线下面积（AUC）为 0.82 μg·h/mL。

表1 鸡单剂量给药后的六氢β-酸月桂酸酯体内药动学参数（n=6）

3 结论

研究结果表明，鸡口服六氢β-酸月桂酸酯后吸收量极少，生物利用度仅为0.4%；静脉注射后血药浓度较高，消除半衰期均较短。因此动物肠道内能维持很高的活性分子浓度，有利于肠道抗菌。

本试验建立的血浆中六氢β-酸月桂酸酯检测方法，灵敏度高，操作简便，所得的药代动力学参数为该产品的应用和残留研究提供了基础数据。

[1]彭险峰，覃宗华.六氢β-酸单酯、内络盐或单酯盐及其作为动物饲料添加剂的应用[P]. 中国专利 ：103739487，A 30-17，2014-04-23.2013107456773.■