光照对喹乙醇检测结果的影响

孔凡科，刘东，郭吉原

（1.中国石油大学化学工程学院，山东青岛266580；2.新希望六和股份有限公司，山东青岛266555）

光照对喹乙醇检测结果的影响

孔凡科1，2*，刘东1，郭吉原2

（1.中国石油大学化学工程学院，山东青岛266580；2.新希望六和股份有限公司，山东青岛266555）

分别在阳光直射、室内光照射两种条件下对喹乙醇溶液进行了不避光、简单避光及严格避光三种处理方式的损失率测定实验，采用严格避光的标准溶液做标准工作曲线（外标校正），并用超高效液相色谱仪进行快速分析，以比较不同条件下喹乙醇损失率。结果显示，与严格避光组相比，阳光直射组与室内光照射组喹乙醇的损失率显著偏高（P＜0.05）；在相同光照强度下，不避光组的损失率显著高于简单避光组（P＜0.05）。因此，光照对喹乙醇分解变质影响很大，为了在喹乙醇的检测中得到较高准确度，整个检测过程中要做到严格避光。

喹乙醇；光照；损失率

喹乙醇是一种抗菌促生长剂（Kamphues，1999），主要用于防止仔猪腹泻（胡新岗等，2001）。中国兽药典兽药使用指南规定，喹乙醇预混剂只允许在35 kg以下的小猪饲料中使用，其添加量上限为100 mg/kg。不允许在禽料中使用喹乙醇预混剂，不允许在出口的畜产品中检测到喹乙醇及其代谢物（中国兽药典委员会，2011）。我国饲料行业中大部分企业使用的是混合生产线，即同一条生产线既生产小猪料也生产大猪料及禽料，虽然生产小猪料后需要进行洗仓，但是后续的饲料生产由于洗仓效果的原因也可能含有微量的喹乙醇。为了确保在禽饲料和大猪饲料中不含喹乙醇，评估洗仓效果时需要对洗仓料进行喹乙醇含量检测，检测结果准确性决定洗仓效率和食品安全。

在实际检测过程中光照对喹乙醇检测结果影响较大。原因是喹乙醇是光敏性试剂，倘若在进行检测时避光操作不严，会对喹乙醇检测的准确度造成严重影响。炽昌（1995）分别用254 nm和365 nm的紫外灯照射喹乙醇，结果表明，喹乙醇对紫外光敏感，但关于可见光对喹乙醇的影响并没有给出明确的结论。本实验主要对自然光照对喹乙醇溶液的影响及检测过程中应采取的避光措施进行了研究以期为提高喹乙醇检测结果的准确度提供指导。

1　材料和方法

1.1试验设计

1.1.1光照条件本实验所指自然光照是天然光源（太阳）发出的光，包括阳光直射光（DS，direct sunlight）和室内自然光（IL，internal light）。这两种实验条件均是选择在天气晴朗、室内采光良好的情况下。光照强度采用光学强度测定仪测定。阳光直射光照强度范围是40000～70000 lx，室内自然光光照强度范围是300～500 lx，严格避光条件下光照强度为0.1 lx。

1.1.2避光条件不避光（A）：没有任何避光保护措施，实验中使用无色玻璃器皿。

简单避光（B）：实验中使用棕色玻璃器皿。

严格避光（C）：实验中使用棕色玻璃器皿，避光放置，不进行光照处理，该处理组为对照组。

1.1.3实验分组实验具体分组见表1。

表1　喹乙醇光照损失率实验处理方案

1.1.4实验温度室内温度为（20±5）℃。

1.1.5实验结果要求每个处理组的每个时间点样品重复进样3次，取平均值报告结果。

1.2试剂与溶液

1.2.1喹乙醇标准品购自德国Dr.Ehrenstorfer，有标准品证书，产品标识含量为99%。

1.2.2喹乙醇标准溶液称取10.00 mg于10 mL棕色容量瓶中，用40%（V/V）甲醇-水溶解并定容至刻度，该溶液的浓度为1.0 mg/mL。

1.2.3喹乙醇工作溶液以40%的甲醇-水溶液作为稀释剂，采用梯度稀释法配制0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、50.0 μg/mL 7个不同浓度标准工作溶液。标准工作溶液配制完成后立即放入密闭控温的自动进样器中上机测定，该标准溶液仅用于实验样品的定量计算，不参与光照实验处理。

1.3仪器与设备超高效液相色谱仪（Waters UPLC H-Class）配紫外检测器（e-λ PDA）；无色进样瓶、棕色进样瓶。光学强度测定仪（德国SAUTER）：型号SN100K，测量范围0～100000lx。

1.4色谱条件色谱柱，BEH-C18色谱柱，内经2.1 mm，柱长100 mm，粒径1.7 μm；进样量：2 μL；流速：0.2 mL/min；检测波长：260 nm；流动相：甲醇、超纯水，梯度洗脱。梯度洗脱程序见表2。

表2　梯度洗脱程序

1.5实验步骤

1.5.1标准工作溶液的检测将配制好的标准工作溶液按照1.4的色谱条件进行上机测定。

1.5.2实验溶液的检测配制50份10 μg/mL的喹乙醇实验溶液，按照表1规定的处理方法进行处理。共有5个处理组，分别为：阳光直射不避光（DS-A）、阳光直射简单避光（DS-B）、室内光照射不避光（IL-A）、室内光照射简单避光（IL-B）、严格避光（C）。每个处理组有10个处理水平。处理完毕后进行上机测定。

1.6结果计算

1.6.1喹乙醇浓度表示喹乙醇溶液的浓度以质量分数（μg/mL）表示。

1.6.2喹乙醇溶液损失率计算

式中：C为根据标准工作曲线计算得到的试验溶液中喹乙醇含量，μg/mL。

1.6.3喹乙醇标准溶液的色谱图及标准曲线根据本实验色谱条件进行上机检测。喹乙醇标准溶液色谱图见图1；喹乙醇标准溶液标准曲线方程及浓度范围见表3。

图1　喹乙醇标准溶液色谱图

表3　喹乙醇曲线方程、相关系数及浓度范围

1.7实验数据处理所有数据以“平均值±标准误”表示，采用SPSS 20.0软件进行方差分析，Tukey HSDa’s法进行方差检验。

2　结果与分析

2.1喹乙醇溶液光照损失率结果分析通过表4可以看出，喹乙醇溶液经阳光直射不避光处理，20 min后，损失率达到94%左右，且处理20～200 min差异不显著（P＞0.05）；喹乙醇溶液经室内光照射不避光处理，80 min后损失率达到90%以上，再行照射损失率变化差异不显著（P＞0.05）；喹乙醇溶液经阳光直射简单避光处理，180 min后损失率可达78%左右；喹乙醇溶液经室内光照射简单避光处理，200 min后损失率为15%；喹乙醇溶液经严格避光处理，200 min后损失率在2%左右，且处理20～200 min差异不显著（P＞0.05）。

2.2自然光照对喹乙醇溶液的影响通过表4可知，在相同避光条件下，阳光直射处理组的损失率显著大于室内光照射处理组的损失率（P＜0.05）。说明光照强度是造成喹乙醇标准溶液分解变质的主要因素。

表4　喹乙醇光照损失率实验结果%

2.3避光处理方式对喹乙醇溶液的影响通过表4可知，在相同光照条件下，不避光处理组比简单避光处理组的损失率显著偏高（P＜0.05），但两者与严格避光处理组相比，损失率均显著偏高（P＜0.05）。说明简单避光可以有效缓解光照对喹乙醇的分解作用，但简单避光处理只能减缓喹乙醇的分解速度，只有在严格避光的条件下，才可以将喹乙醇的分解程度降到最低。

2.4实际样品不同避光方式下回收率检测结果为了验证上述结论的准确性，进行了不同饲料样品提取过程中严格避光（C）与不避光（A）的加标回收比对试验。加标回收比对结果见表5。由表5可知，在饲料样品前处理过程中，严格避光处理的样品加标回收率平均在91%左右，而不做避光处理的样品加标回收率平均仅有55%。可见，与不避光处理组相比，严格避光处理组的加标回收率提高了65%，大大提高了饲料中喹乙醇检测结果的准确度。

表5　饲料中喹乙醇加标回收率比对结果

3　结论

实验结果表明，光照是造成喹乙醇标准溶液分解变质的主要因素。在光照条件下，会造成喹乙醇检测结果偏低甚至不能检出。通过简单避光可以在一定程度上减缓光照对喹乙醇的分解速度。为了在喹乙醇的检测中尽可能提高检测结果的准确度，需要在整个检测过程中做到严格避光。

喹乙醇检测过程中需要严格避光的关键点主要包括：（1）喹乙醇标准储备溶液从冰箱内取出放在室内回温过程中，一定要将其放在严格避光的位置。（2）样品提取时要用能避光的实验器皿或器具，比如不透光的离心管或棕色的具塞三角瓶。（3）SPE固相萃取柱的过程中也需要严格避光，一般的SPE固相萃取柱不具有避光作用，可以在SPE固相萃取柱萃取外面包裹一层锡箔纸，或者包裹一层黑色不透明胶带，以起到避光作用。（4）接取洗脱液的玻璃试管需要用棕色的，如果没有，可以外面包裹锡箔纸和黑色不透明胶带等做简单避光处理。（5）上机液要装在棕色进样瓶中。（6）最好选择有避光作用的自动进样器进行分析。

［1］胡新岗，方希修，黄银云，等.喹乙醇饲料添加剂应用研究进展［J］.动物科学与动物医学，2001，19（5）：64～65.

［2］中国兽药典委员会，中华人民共和国兽药典兽药使用指南化学品卷（2010版）［M］.北京：中国农业出版社.2011.105.

［3］沈炽昌.哇乙醇稳定性的初步研究［J］.中国兽药杂志，1995，29（3）：25.

［4］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB/T 8381.7-2009［S］.饲料中喹乙醇的测定高效液相色谱法.北京：中国标准出版社，2009.

［5］Kamphues J.Antibiotic growth promoters for the view of animal nutrition［J］.Ber Munch Tierarztl Wochenschr，1999，112（10～11）：370～379.■

This test studied the loss rate of olaquindox solution processed in three ways including simply avoiding light，being in the light and strictly avoiding light，respectively，under two different conditions of direct sunlight and internal light.The processed samples was determined by the ultra high performance liquid chromatograph.External standard calibration was used with the olaquindox solution which was strictly avoiding light.Results showed that the loss rate of olaquindox solution of the direct sunlight and internal light group were significantly higher than that of the strictly avoiding light group（P＜0.05）.Under the same light conditions，the loss rate of being in the light group was significantly higher than that of simple light group（P＜0.05）.The results was indicated that light was the main factor on olaquindox decomposition.In order to get the high accuracy in the detection of olaquindox，we must strictly avoid light in the testing process.

olaquindox；light；loss rate

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161504

S816.17

A

1004-3314（2016）15-0016-03