连钱草总多酚提取及其抗氧化性分析

贤景春+谢婷婷

摘要：以连钱草（Glechoma longituba）为原料，乙醇为溶剂，采用浸提法提取连钱草中总多酚含量并对其抗氧化性进行分析，研究乙醇体积分数、温度、时间和料液比对总多酚含量的影响，通过正交试验对浸提条件进行了优化。结果表明，最佳浸提条件为50%乙醇，温度80 ℃，时间2.0 h，料液比1∶25（g∶mL）。在此条件下浸提，得到的总多酚含量为4.275 mg/g，且连钱草提取物对自由基具有一定的清除能力。

关键词：连钱草（Glechoma longituba）；多酚；抗氧化性

中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）17-4139-03

Extraction of Total Polyphenol in Glechoma longituba

and Its Anti-oxidation

XIAN Jing-chun，XIE Ting-ting

（The College of Chemistry and Life Science， Quanzhou Normal College， Quanzhou 362000， Fujian， China）

Abstract： Using Glechoma longituba as materials and ethanol as extractant， total polyphenol was extracted from Glechoma longituba with soaking method and its anti-oxidation was studied. The effects of volume fraction of ethanol， temperature， time，ratio of material to liquid on total quantity polyphenol were investigated. The results showed that the optimal conditions of extraction were 50% ethanol， temperature 80 ℃ ，extraction time 2.0 h， ratio of material to liquid on 1∶25（g∶mL）. Under these conditions， the rate of extraction reached up to 4.275 mg/g. The Glechoma longituba had strong anti-oxidation.

Key words： Glechoma longituba；polyphenol；anti-oxidation stability

连钱草（Glechoma longituba）又名金钱草、活血丹，为唇形科多年生草本植物。味辛、微苦、性微寒。主要用于利小便，治疗膀胱结石、肾结石、输尿管结石、肾炎水肿、湿热黄疸等病症[1]。有关研究表明，连钱草有降糖作用[2]。植物多酚具有降血脂和降血糖的双重作用[3]。目前，对于连钱草的研究主要以化学成分、挥发油成分居多，有关连钱草多酚提取的系统性研究尚未见报道。本试验用乙醇浸取法对连钱草的多酚进行提取并对其抗氧化性进行研究，以期为连钱草的进一步开发利用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料、药剂和仪器

供试材料：连钱草（购于泉州药店）。

药剂：无水乙醇（恒隆化工服份有限公司），七水合硫酸亚铁、焦性没食子酸（国药集团化学试剂有限公司），酒石酸钾钠（天津基准化学试剂有限公司），磷酸二氢钾（广东汕头西陇化工公司），磷酸氢二钾（汕头市西陇化工有限公司）。

仪器：电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），循环水真空泵（河南省予华仪器有限公司），离心机（上海安亭科学仪器厂制造），料理机（山东九阳家电有限公司）。

1.2 连钱草总多酚含量的测定

根据Folin-Ciocalten法，以焦性没食子酸为标准品，采用可见分光光度法测定连钱草的多酚含量。取0.25 mg/mL焦性没食子酸标准液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于25 mL的容量瓶中，加去离子水5 mL，酒石酸铁溶液5 mL，用pH 7.5的磷酸盐缓冲溶液定容。振荡混匀静置后，在波长为540 nm下测其吸光度[4]。以焦性没食子酸标准液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

1.3 连钱草总多酚提取条件的确定

将连钱草清洗干净，60 ℃烘干，烘干后粉碎过40目筛。称取1.000 g连钱草粉末，放入小烧杯中，控制单因素条件浸提总多酚。①乙醇体积分数。分别用不同体积分数（30%、40%、50%、60%、70%）的乙醇为提取剂，料液比1∶25，在60 ℃下提取2 h；②料液比。分别用不同的料液比（连钱草∶乙醇）（1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35）（g∶mL，下同），乙醇体积分数60%，温度60 ℃提取2 h；③时间。乙醇体积分数60%，料液比1∶30，在60 ℃下不同时间（1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h）下提取；④温度。乙醇体积分数60%，料液比1∶30，分别用不同的温度（40、50、60、70、80 ℃），提取2 h。

将提取液趁热抽滤，并将其转移至50 mL容量瓶中，用同体积分数乙醇溶剂定容。从中量取1 mL置于10 mL的容量瓶中，加入1 mL酒石酸亚铁溶液，用pH 7.5的磷酸盐缓冲溶液定容，混匀、静置、离心后在540 nm波长下测定其吸光度，参照标准曲线计算出连钱草中多酚的含量[5]。endprint

1.4 正交试验

在单因素试验的基础上，以乙醇体积分数、温度、时间和料液比4个因素进行L9（34）正交试验[7]，确定浸提连钱草中总多酚的最佳条件。正交试验因素和水平如表1所示。

1.5 抗氧化性

依次取9 mmol/L FeSO4、8.82 mmol/L双氧水、9 mmol/L水杨酸溶液各2.0 mL于25 mL容量瓶中，向反应体系中分别加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL浸提液，用去离子水定容，摇匀，恒温37 ℃下，在波长510 nm处测其吸光度值（AX），按此方法不加浸提液测定吸光度值（A0）[6]。 按照公式：清除率=（A0-AX）/A0×100%，计算连钱草中总多酚的抗氧化性。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

以焦性没食子酸标准液浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，得到的标准曲线如图1所示。回归线方程为Y=-0.011 86+16.474 29×X。

2.2 乙醇体积分数对连钱草总多酚浸提效果的影响

从图2可以看出，随着乙醇体积分数的升高，连钱草总多酚含量呈上升趋势。当乙醇体积分数为60%时，连钱草总多酚含量达到最高，含量为2.515 mg/g，而后随着乙醇体积分数的升高，连钱草总多酚含量开始下降。因此，选择乙醇体积分数为60%为宜。

2.3 料液比对连钱草总多酚浸提效果的影响

由图3可知，在溶剂用量较小时，连钱草总多酚含量较低，加大溶剂用量，总多酚溶出率增大。当料液比为1∶30时，连钱草总多酚含量最高。如果继续加大溶剂量，连钱草总多酚含量反而下降。因此，选择料液比1∶30为宜。

2.3 时间对连钱草总多酚浸提效果的影响

由图4可知，时间较短时，浸提得到的连钱草总多酚含量较低，随着时间的延长，其总多酚不断溶出，当浸提时间为2.0 h时，溶出达到平衡，连钱草总多酚含量达到峰值。再继续延长时间，提取效果呈下降趋势。因此，选择2.0 h为浸提时间。

2.5 温度对连钱草总多酚浸提效果的影响

由图5可知，随浸提温度的升高，连钱草总多酚含量呈上升趋势，当温度达到70 ℃时，浸提效果最好，连钱草总多酚含量最高。温度继续升高，浸提效果明显下降。因此，选择温度为70 ℃浸提连钱草中总多酚。

2.6 正交试验结果

由表2结果可知，4个因素对连钱草总多酚浸提效果影响最大的是浸提温度，其次是时间，影响最小的是料液比。浸提连钱草中总多酚的最佳条件组合为A1B3C2D1，即50%乙醇、温度80 ℃，时间2.0 h、料液比1∶25（g∶mL）。在此条件下进行浸提，连钱草总多酚含量为4.275 mg/g。

2.7 对羟基自由基的清除作用

由图6可知，连钱草浸提液中总多酚对羟基自由基有一定的清除作用，且清除率与浸提液的浓度呈线性相关。

3 结论

通过单因素试验与正交试验确定了连钱草总多酚浸提的最佳工艺。结果表明，影响连钱草总多酚提取效果的因素大小顺序为浸提温度、时间、乙醇体积分数、料液比。最佳浸提条件为50%乙醇、料液比1∶25，时间2.0 h，温度80 ℃。在此浸提条件下，浸提得到的连钱草总多酚含量达到4.275 mg/g，且连钱草提取物对羟基自由基有一定的清除作用。

参考文献：

[1] 宋 锐，张 云，丛晓东，等.连钱草的化学成分及生物活性研究进展[J].中华中医药学刊，2010，28（12）：2511-2514.

[2] 袁春玲，王佩琪，郭伟英.连钱草的降血糖作用及其机制研究[J].中药药理与临床，2008，24（3）：57-58.

[3] 翟清波，李 诚，王 静，等.植物多酚降血糖和降血脂作用研究进展[J].中国药房，2012，23（3）：279-281.

[4] 牛春艳，姜晓坤.葡萄皮渣中多酚物质提取工艺的研究[J].辽宁化工，2011，40（9）：917-919.

[5] 贤景春，郑鑫源，陈明真.少花龙葵多酚超声提取工艺及其抗氧化性研究[J].江苏农业科学，2012，40（8）：275-277.

[6] 金 鸣，蔡亚欣，李金荣，等.邻二氮菲-Fe2+氧化法检测H2O2/Fe2+产生的羟自由基[J].生物化学与生物物理进展，1996，23（6）：553-555.

[7] 贾冬英，姚 开，谭 薇，等.石榴皮中多酚提取条件的优化[J]，林产化学与工业，2006，26（3）：123-126.endprint

1.4 正交试验

在单因素试验的基础上，以乙醇体积分数、温度、时间和料液比4个因素进行L9（34）正交试验[7]，确定浸提连钱草中总多酚的最佳条件。正交试验因素和水平如表1所示。

1.5 抗氧化性

依次取9 mmol/L FeSO4、8.82 mmol/L双氧水、9 mmol/L水杨酸溶液各2.0 mL于25 mL容量瓶中，向反应体系中分别加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL浸提液，用去离子水定容，摇匀，恒温37 ℃下，在波长510 nm处测其吸光度值（AX），按此方法不加浸提液测定吸光度值（A0）[6]。 按照公式：清除率=（A0-AX）/A0×100%，计算连钱草中总多酚的抗氧化性。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

以焦性没食子酸标准液浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，得到的标准曲线如图1所示。回归线方程为Y=-0.011 86+16.474 29×X。

2.2 乙醇体积分数对连钱草总多酚浸提效果的影响

从图2可以看出，随着乙醇体积分数的升高，连钱草总多酚含量呈上升趋势。当乙醇体积分数为60%时，连钱草总多酚含量达到最高，含量为2.515 mg/g，而后随着乙醇体积分数的升高，连钱草总多酚含量开始下降。因此，选择乙醇体积分数为60%为宜。

2.3 料液比对连钱草总多酚浸提效果的影响

由图3可知，在溶剂用量较小时，连钱草总多酚含量较低，加大溶剂用量，总多酚溶出率增大。当料液比为1∶30时，连钱草总多酚含量最高。如果继续加大溶剂量，连钱草总多酚含量反而下降。因此，选择料液比1∶30为宜。

2.3 时间对连钱草总多酚浸提效果的影响

由图4可知，时间较短时，浸提得到的连钱草总多酚含量较低，随着时间的延长，其总多酚不断溶出，当浸提时间为2.0 h时，溶出达到平衡，连钱草总多酚含量达到峰值。再继续延长时间，提取效果呈下降趋势。因此，选择2.0 h为浸提时间。

2.5 温度对连钱草总多酚浸提效果的影响

由图5可知，随浸提温度的升高，连钱草总多酚含量呈上升趋势，当温度达到70 ℃时，浸提效果最好，连钱草总多酚含量最高。温度继续升高，浸提效果明显下降。因此，选择温度为70 ℃浸提连钱草中总多酚。

2.6 正交试验结果

由表2结果可知，4个因素对连钱草总多酚浸提效果影响最大的是浸提温度，其次是时间，影响最小的是料液比。浸提连钱草中总多酚的最佳条件组合为A1B3C2D1，即50%乙醇、温度80 ℃，时间2.0 h、料液比1∶25（g∶mL）。在此条件下进行浸提，连钱草总多酚含量为4.275 mg/g。

2.7 对羟基自由基的清除作用

由图6可知，连钱草浸提液中总多酚对羟基自由基有一定的清除作用，且清除率与浸提液的浓度呈线性相关。

3 结论

通过单因素试验与正交试验确定了连钱草总多酚浸提的最佳工艺。结果表明，影响连钱草总多酚提取效果的因素大小顺序为浸提温度、时间、乙醇体积分数、料液比。最佳浸提条件为50%乙醇、料液比1∶25，时间2.0 h，温度80 ℃。在此浸提条件下，浸提得到的连钱草总多酚含量达到4.275 mg/g，且连钱草提取物对羟基自由基有一定的清除作用。

参考文献：

[1] 宋 锐，张 云，丛晓东，等.连钱草的化学成分及生物活性研究进展[J].中华中医药学刊，2010，28（12）：2511-2514.

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[3] 翟清波，李 诚，王 静，等.植物多酚降血糖和降血脂作用研究进展[J].中国药房，2012，23（3）：279-281.

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[5] 贤景春，郑鑫源，陈明真.少花龙葵多酚超声提取工艺及其抗氧化性研究[J].江苏农业科学，2012，40（8）：275-277.

[6] 金 鸣，蔡亚欣，李金荣，等.邻二氮菲-Fe2+氧化法检测H2O2/Fe2+产生的羟自由基[J].生物化学与生物物理进展，1996，23（6）：553-555.

[7] 贾冬英，姚 开，谭 薇，等.石榴皮中多酚提取条件的优化[J]，林产化学与工业，2006，26（3）：123-126.endprint

1.4 正交试验

在单因素试验的基础上，以乙醇体积分数、温度、时间和料液比4个因素进行L9（34）正交试验[7]，确定浸提连钱草中总多酚的最佳条件。正交试验因素和水平如表1所示。

1.5 抗氧化性

依次取9 mmol/L FeSO4、8.82 mmol/L双氧水、9 mmol/L水杨酸溶液各2.0 mL于25 mL容量瓶中，向反应体系中分别加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL浸提液，用去离子水定容，摇匀，恒温37 ℃下，在波长510 nm处测其吸光度值（AX），按此方法不加浸提液测定吸光度值（A0）[6]。 按照公式：清除率=（A0-AX）/A0×100%，计算连钱草中总多酚的抗氧化性。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

以焦性没食子酸标准液浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，得到的标准曲线如图1所示。回归线方程为Y=-0.011 86+16.474 29×X。

2.2 乙醇体积分数对连钱草总多酚浸提效果的影响

从图2可以看出，随着乙醇体积分数的升高，连钱草总多酚含量呈上升趋势。当乙醇体积分数为60%时，连钱草总多酚含量达到最高，含量为2.515 mg/g，而后随着乙醇体积分数的升高，连钱草总多酚含量开始下降。因此，选择乙醇体积分数为60%为宜。

2.3 料液比对连钱草总多酚浸提效果的影响

由图3可知，在溶剂用量较小时，连钱草总多酚含量较低，加大溶剂用量，总多酚溶出率增大。当料液比为1∶30时，连钱草总多酚含量最高。如果继续加大溶剂量，连钱草总多酚含量反而下降。因此，选择料液比1∶30为宜。

2.3 时间对连钱草总多酚浸提效果的影响

由图4可知，时间较短时，浸提得到的连钱草总多酚含量较低，随着时间的延长，其总多酚不断溶出，当浸提时间为2.0 h时，溶出达到平衡，连钱草总多酚含量达到峰值。再继续延长时间，提取效果呈下降趋势。因此，选择2.0 h为浸提时间。

2.5 温度对连钱草总多酚浸提效果的影响

由图5可知，随浸提温度的升高，连钱草总多酚含量呈上升趋势，当温度达到70 ℃时，浸提效果最好，连钱草总多酚含量最高。温度继续升高，浸提效果明显下降。因此，选择温度为70 ℃浸提连钱草中总多酚。

2.6 正交试验结果

由表2结果可知，4个因素对连钱草总多酚浸提效果影响最大的是浸提温度，其次是时间，影响最小的是料液比。浸提连钱草中总多酚的最佳条件组合为A1B3C2D1，即50%乙醇、温度80 ℃，时间2.0 h、料液比1∶25（g∶mL）。在此条件下进行浸提，连钱草总多酚含量为4.275 mg/g。

2.7 对羟基自由基的清除作用

由图6可知，连钱草浸提液中总多酚对羟基自由基有一定的清除作用，且清除率与浸提液的浓度呈线性相关。

3 结论

通过单因素试验与正交试验确定了连钱草总多酚浸提的最佳工艺。结果表明，影响连钱草总多酚提取效果的因素大小顺序为浸提温度、时间、乙醇体积分数、料液比。最佳浸提条件为50%乙醇、料液比1∶25，时间2.0 h，温度80 ℃。在此浸提条件下，浸提得到的连钱草总多酚含量达到4.275 mg/g，且连钱草提取物对羟基自由基有一定的清除作用。

参考文献：

[1] 宋 锐，张 云，丛晓东，等.连钱草的化学成分及生物活性研究进展[J].中华中医药学刊，2010，28（12）：2511-2514.

[2] 袁春玲，王佩琪，郭伟英.连钱草的降血糖作用及其机制研究[J].中药药理与临床，2008，24（3）：57-58.

[3] 翟清波，李 诚，王 静，等.植物多酚降血糖和降血脂作用研究进展[J].中国药房，2012，23（3）：279-281.

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[5] 贤景春，郑鑫源，陈明真.少花龙葵多酚超声提取工艺及其抗氧化性研究[J].江苏农业科学，2012，40（8）：275-277.

[6] 金 鸣，蔡亚欣，李金荣，等.邻二氮菲-Fe2+氧化法检测H2O2/Fe2+产生的羟自由基[J].生物化学与生物物理进展，1996，23（6）：553-555.

[7] 贾冬英，姚 开，谭 薇，等.石榴皮中多酚提取条件的优化[J]，林产化学与工业，2006，26（3）：123-126.endprint