野生大草乌中总黄酮的提取与抗氧化性分析

李泉+王宝森+刘贵阳+闫勇+唐明宇+李德

摘要：以石油醚脱脂、乙醇回流提取云南个旧野生大草乌（Aconitum vilmorinianum）中总黄酮，以芦丁为对照用紫外分光光度法测定了大草乌中总黄酮含量，研究了不同乙醇体积分数、回流时间对总黄酮提取的影响，采用邻苯三酚自氧化测定其抗氧化性。结果表明，用70%乙醇回流提取3 h，大草乌总黄酮含量最高，为1.457%。大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率为34.49%。

关键词：野生大草乌（Aconitum vilmorinianum）；总黄酮；乙醇回流提取；紫外分光光度法；抗氧化性

中图分类号：R282；S188 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）17-4142-03

Extraction of Total Flavonoids in Aconitum vilmorinianum

and Its Anti-Oxidation

LI Quan1，WANG Bao-sen2， LIU Gui-yang2， YAN Yong2， TANG Ming-yu1， LI De1

（1.Yunnan Tin Vocational & Technical College， Gejiu 661000， Yunnan， China；

2.School of Science， Honghe University， Mengzi 661100， Yunnan， China）

Abstract： Total flavonoids of wild Aconitum vilmorinianum in Gejiu city， Yunnan province were extracted with petroleum ether derosination and ethanol circumfluence. The content of total flavonoids in Aconitum vilmorinianum were detected with ultraviolet spectrophotometry using rutin as reference. The effects of ethanol concentrations and circumfluence times on the extraction of total flavonoids were studied. The anti-oxidation of total flavonoids was investigated by spontaneous oxidation of pyrogallol. Results showed that， the content of total flavonoids in Aconitum vilmorinianum was about 1.457% when it was extracted by 70% ethanol circumfluence for 3 hours. The total flavonoids in Aconitum vilmorinianum had obviously eliminating action to superoxide anion free radicals， with a clearance of 34.49%.

Key words： Aconitum vilmorinianum； total flavonoids； ethanol circumfluence extraction； ultraviolet spectrophotometry； oxidation resistance

大草乌（Aconitum vilmorinianum）为毛茛科植物黄草乌和膝瓣乌头的块根，主要分布于四川会理、贵州西部和云南中部，具有祛风散寒、活血止痛、解毒消肿的功效，主治风寒湿痹、手足厥冷、跌打损伤和疮毒[1]。大草乌有毒且苦，在云南种植及应用广泛，属于菜药兼用植物。

黄酮类化合物是自然界中一类重要的天然有机化合物，广泛存在于药用植物、水果和蔬菜中，特别是在高等植物的花、叶、根中较多[2]。黄酮类化合物具有多种生物活性，有抗溃疡、抗过敏、抗菌、抗炎、抗氧化、降血脂、治疗心脑血管疾病等功能。随着研究方法的不断更新和改进，新的黄酮类化合物不断被发现，其应用更加广泛[3]。目前，对大草乌的分析研究报道较少，为进一步开发大草乌的药用价值，本研究对野生大草乌中总黄酮的提取与抗氧化性进行分析，旨在为大草乌的研究与推广应用，以及推进药用植物的发展提供科学的依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

野生大草乌购于云南省红河州个旧市集市，产地为个旧市老厂镇。大草乌样品先用去离子水冲洗干净，在105 ℃烘干，然后研细备用。

1.2 仪器与试剂

UV-4802S型紫外-可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；BS224S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；OSB-2100型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；TDL80-2B型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；SHZ-Ⅲ型循环水真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；恒温烘箱；恒温水浴锅；索氏提取器；粉粹机。

芦丁对照品、无水乙醇、石油醚（60～90 ℃）、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、邻苯三酚、Tris等试剂均为分析纯；盐酸为优级纯；试验用水为去离子水。

1.3 大草乌总黄酮的提取

1.3.1 不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮提取的影响 分别准确称取4.000 0 g干燥的大草乌粉末6份，用滤纸包好后置于索氏提取器中，用100 mL石油醚在80 ℃条件下回流5 h，取除脂后的大草乌在60 ℃下烘干，分别用100 mL 40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇溶液在85 ℃条件下回流2次，每次3 h，合并滤液后抽滤，55 ℃减压蒸馏至无醇味，4 800 r/min离心15 min，将上清液转移至100 mL容量瓶中，分别用相应体积分数的乙醇定容，得到大草乌总黄酮提取液[4-9]。endprint

1.3.2 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响 分别准确称取4.000 0 g干燥的大草乌粉末5份，用滤纸包好后置于索氏提取器中，用100 mL石油醚在80 ℃条件下回流5 h，取除脂后的大草乌在60 ℃下烘干，用100 mL 70%乙醇溶液在85 ℃条件下回流2次，回流时间分别为1、2、3、4、5 h，合并滤液后抽滤，55 ℃减压蒸馏至无醇味，在4 800 r/min离心15 min，将上清液转移至100 mL容量瓶中，用70%乙醇定容，得到大草乌总黄酮提取液。

1.4 分析方法

1.4.1 波长的选择 将标准溶液和样品溶液以乙醇为空白对照，在波长200～800 nm进行扫描，结果显示标准溶液和样品溶液在波长510 nm处有最大吸收，故选定510 nm为测定波长。

1.4.2 标准曲线的绘制 精确称取芦丁对照品5 mg，用60%乙醇溶解，并转移至50 mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，得到浓度为0.100 0 mg/mL的标准溶液。精确吸取芦丁标准溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL，分别置于10 mL比色管（此处试验所用仪器为比色管，用分光光度计测定时用比色皿）中，各加60%乙醇至5 mL，再分别加入5%（质量分数，下同）的NaNO2溶液0.50 mL，摇匀，室温放置6 min，加10%的Al（NO3）3溶液0.50 mL摇匀，室温放置6 min，加4%的NaOH溶液 4.00 mL摇匀，室温放置15 min，用紫外-可见分光光度计在510 nm波长下测定吸光度，同时以试剂空白作参比。以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C为横坐标，绘制标准曲线。

1.4.3 总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取液1.00 mL，置于10 mL比色管（此处试验所用仪器为比色管，用分光光度计测定时用比色皿）中，补加相应体积分数的乙醇至5 mL，其他步骤按“1.4.2”的方法操作，在510 nm波长下平行测定3次。根据回归方程，计算总黄酮浓度。根据公式：总黄酮含量=[提取液浓度（mg/mL）×稀释倍数×体积（mL）/样品干重（g）×1 000]×100%，计算大草乌总黄酮含量。

1.5 清除超氧阴离子自由基能力的测定

取4.5 mL 50 mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液，加4.2 mL去离子水混匀后在25 ℃水浴中保温20 min，取出后立即加入在25 ℃预热过的3 mmol/L邻苯三酚0.3 mL，迅速摇匀后倒入比色皿，420 nm波长下每隔30 s测定吸光度，以10 mmol/L的HCl代替邻苯三酚作为空白对照。

按照上述操作步骤在加入邻苯三酚前先加入0.1 mL的总黄酮提取液，同样用10 mmol/L的HCl作空白对照，测定吸光度，并按以下公式计算清除率：

超氧阴离子自由基清除率=（A1-A2）/A1×100%

式中，A1为邻苯三酚自氧化平均吸光度；A2为加入样品后邻苯三酚自氧化平均吸光度。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C为横坐标， 绘制标准曲线，所得标准曲线如图1所示。所得回归方程为A=7.714 3C+0.004 3，R2=0.997 4。

2.2 不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮提取的影响

由表1可知，不同体积分数的乙醇提取得到的大草乌总黄酮的含量不同，乙醇体积分数从40%升高到70%时，随着乙醇体积分数的增大，大草乌总黄酮的含量也逐渐增大；乙醇体积分数从70%升高到90%时，随着乙醇体积分数的增大，大草乌总黄酮的含量稍有减小，70%乙醇提取的大草乌总黄酮含量最高，达1.456%。说明，大草乌中的总黄酮一部分为脂溶性，部分为水溶性（大草乌水提取液能与氯化铁反应显示出较深的颜色）。

2.3 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响

由表2可知，不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响不同。回流1～3 h时，随着回流时间的增长，大草乌总黄酮的含量逐渐增大；回流时间3～5 h，随着回流时间延长，大草乌总黄酮的含量有所减小，3 h时大草乌总黄酮含量最高，达1.457%。可能是回流时间过长会提取出其他成分与黄酮相互作用，使提取的总黄酮含量降低。

以上分析结果可知，用70%乙醇回流提取3 h，大草乌总黄酮含量最高。在此条件下，通过3次平行试验测定得到大草乌总黄酮含量为1.457%。

2.4 大草乌黄酮对超氧阴离子自由基的清除作用

通过测定，大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率达到34.49%。说明大草乌总黄酮具有一定的抗氧化作用。由此可见，大草乌具有较高的药用价值。

3 小结与讨论

采用不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮进行提取，大草乌中的总黄酮一部分为脂溶性，部分为水溶性，这与罗晶[10]对红景天分析的结果一致。本试验结果中测定的大草乌总黄酮含量为1.457%，与毕和平等[11]分析的穿心莲结果比较，大草乌中总黄酮含量比穿心莲的高，与刘伟玲[12]分析的刺五加叶中总黄酮的结果比较，大草乌中总黄酮含量则比刺五加叶中的低。说明不同药用植物中总黄酮含量不同。

本试验结果表明，以石油醚脱脂、乙醇回流可提取野生大草乌中总黄酮，提取的最佳条件为乙醇体积分数70%，回流提取时间3 h，此条件下提取的野生大草乌中总黄酮含量最高，达到1.457%。大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率为34.49%，说明大草乌总黄酮具有一定的抗氧化作用，且具有较高的药用价值。

参考文献：

[1] 昆明军区勤部卫生部.云南中草药选[M].天津：天津人民出版社，1970.

[2] 刘玉芬，夏海涛，杨树平.紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮的含量[J].食品科学，2005，26（9）：418-419.

[3] 李 静，王成永，张婷婷，等.木瓜中总黄酮成分的提取和含量测定[J]. 中医药临床杂志，2008，20（6）：617-619.

[4] 梁新红，赵功玲，赵瑞香.分光光度法测定仙人掌酒中总黄酮含量[J].中国酿造，2007（6）：67-69.

[5] 苗 方，侯刚健，安 芸，等.分光光度法对银杏茶中总黄酮的含量测定[J].医学理论与实践，2009，22（3）：359-360.

[6] 朱 红，钮福祥，张爱君，等.甘薯叶中黄酮类化合物提取工艺研究[J].江苏农业科学，2006（5）：154-156.

[7] 郑津辉，王 威，黄 辉.苦参提取液中黄酮类化合物的抑菌作用[J].武汉大学学报（理学版），2008，54（4）：439-442.

[8] 唐 敏，刘 耀，王 渝，等.金银花总黄酮粗提物体外抑菌作用研究[J].中国药房，2008，19（30）：2321-2323.

[9] 董 捷，张红城，秦 健，等.十种蜂花粉醇提物中总多酚和总黄酮含量测定[J].食品科学，2008，29（12）：246-249.

[10] 罗 晶.蔷薇红景天总黄酮的提取及分析[J].安徽农业科学，2008，36（35）：15546-15547.

[11] 毕和平，韩长日，廖家旺，等.穿心莲中总黄酮含量的测定[J]. 光谱实验室，2006，23（2）：356-359.

[12] 刘伟玲.刺五加叶中的主要活性成分分析[J].中医药导报，2009，15（7）：87-88.endprint

1.3.2 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响 分别准确称取4.000 0 g干燥的大草乌粉末5份，用滤纸包好后置于索氏提取器中，用100 mL石油醚在80 ℃条件下回流5 h，取除脂后的大草乌在60 ℃下烘干，用100 mL 70%乙醇溶液在85 ℃条件下回流2次，回流时间分别为1、2、3、4、5 h，合并滤液后抽滤，55 ℃减压蒸馏至无醇味，在4 800 r/min离心15 min，将上清液转移至100 mL容量瓶中，用70%乙醇定容，得到大草乌总黄酮提取液。

1.4 分析方法

1.4.1 波长的选择 将标准溶液和样品溶液以乙醇为空白对照，在波长200～800 nm进行扫描，结果显示标准溶液和样品溶液在波长510 nm处有最大吸收，故选定510 nm为测定波长。

1.4.2 标准曲线的绘制 精确称取芦丁对照品5 mg，用60%乙醇溶解，并转移至50 mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，得到浓度为0.100 0 mg/mL的标准溶液。精确吸取芦丁标准溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL，分别置于10 mL比色管（此处试验所用仪器为比色管，用分光光度计测定时用比色皿）中，各加60%乙醇至5 mL，再分别加入5%（质量分数，下同）的NaNO2溶液0.50 mL，摇匀，室温放置6 min，加10%的Al（NO3）3溶液0.50 mL摇匀，室温放置6 min，加4%的NaOH溶液 4.00 mL摇匀，室温放置15 min，用紫外-可见分光光度计在510 nm波长下测定吸光度，同时以试剂空白作参比。以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C为横坐标，绘制标准曲线。

1.4.3 总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取液1.00 mL，置于10 mL比色管（此处试验所用仪器为比色管，用分光光度计测定时用比色皿）中，补加相应体积分数的乙醇至5 mL，其他步骤按“1.4.2”的方法操作，在510 nm波长下平行测定3次。根据回归方程，计算总黄酮浓度。根据公式：总黄酮含量=[提取液浓度（mg/mL）×稀释倍数×体积（mL）/样品干重（g）×1 000]×100%，计算大草乌总黄酮含量。

1.5 清除超氧阴离子自由基能力的测定

取4.5 mL 50 mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液，加4.2 mL去离子水混匀后在25 ℃水浴中保温20 min，取出后立即加入在25 ℃预热过的3 mmol/L邻苯三酚0.3 mL，迅速摇匀后倒入比色皿，420 nm波长下每隔30 s测定吸光度，以10 mmol/L的HCl代替邻苯三酚作为空白对照。

按照上述操作步骤在加入邻苯三酚前先加入0.1 mL的总黄酮提取液，同样用10 mmol/L的HCl作空白对照，测定吸光度，并按以下公式计算清除率：

超氧阴离子自由基清除率=（A1-A2）/A1×100%

式中，A1为邻苯三酚自氧化平均吸光度；A2为加入样品后邻苯三酚自氧化平均吸光度。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C为横坐标， 绘制标准曲线，所得标准曲线如图1所示。所得回归方程为A=7.714 3C+0.004 3，R2=0.997 4。

2.2 不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮提取的影响

由表1可知，不同体积分数的乙醇提取得到的大草乌总黄酮的含量不同，乙醇体积分数从40%升高到70%时，随着乙醇体积分数的增大，大草乌总黄酮的含量也逐渐增大；乙醇体积分数从70%升高到90%时，随着乙醇体积分数的增大，大草乌总黄酮的含量稍有减小，70%乙醇提取的大草乌总黄酮含量最高，达1.456%。说明，大草乌中的总黄酮一部分为脂溶性，部分为水溶性（大草乌水提取液能与氯化铁反应显示出较深的颜色）。

2.3 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响

由表2可知，不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响不同。回流1～3 h时，随着回流时间的增长，大草乌总黄酮的含量逐渐增大；回流时间3～5 h，随着回流时间延长，大草乌总黄酮的含量有所减小，3 h时大草乌总黄酮含量最高，达1.457%。可能是回流时间过长会提取出其他成分与黄酮相互作用，使提取的总黄酮含量降低。

以上分析结果可知，用70%乙醇回流提取3 h，大草乌总黄酮含量最高。在此条件下，通过3次平行试验测定得到大草乌总黄酮含量为1.457%。

2.4 大草乌黄酮对超氧阴离子自由基的清除作用

通过测定，大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率达到34.49%。说明大草乌总黄酮具有一定的抗氧化作用。由此可见，大草乌具有较高的药用价值。

3 小结与讨论

采用不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮进行提取，大草乌中的总黄酮一部分为脂溶性，部分为水溶性，这与罗晶[10]对红景天分析的结果一致。本试验结果中测定的大草乌总黄酮含量为1.457%，与毕和平等[11]分析的穿心莲结果比较，大草乌中总黄酮含量比穿心莲的高，与刘伟玲[12]分析的刺五加叶中总黄酮的结果比较，大草乌中总黄酮含量则比刺五加叶中的低。说明不同药用植物中总黄酮含量不同。

本试验结果表明，以石油醚脱脂、乙醇回流可提取野生大草乌中总黄酮，提取的最佳条件为乙醇体积分数70%，回流提取时间3 h，此条件下提取的野生大草乌中总黄酮含量最高，达到1.457%。大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率为34.49%，说明大草乌总黄酮具有一定的抗氧化作用，且具有较高的药用价值。

参考文献：

[1] 昆明军区勤部卫生部.云南中草药选[M].天津：天津人民出版社，1970.

[2] 刘玉芬，夏海涛，杨树平.紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮的含量[J].食品科学，2005，26（9）：418-419.

[3] 李 静，王成永，张婷婷，等.木瓜中总黄酮成分的提取和含量测定[J]. 中医药临床杂志，2008，20（6）：617-619.

[4] 梁新红，赵功玲，赵瑞香.分光光度法测定仙人掌酒中总黄酮含量[J].中国酿造，2007（6）：67-69.

[5] 苗 方，侯刚健，安 芸，等.分光光度法对银杏茶中总黄酮的含量测定[J].医学理论与实践，2009，22（3）：359-360.

[6] 朱 红，钮福祥，张爱君，等.甘薯叶中黄酮类化合物提取工艺研究[J].江苏农业科学，2006（5）：154-156.

[7] 郑津辉，王 威，黄 辉.苦参提取液中黄酮类化合物的抑菌作用[J].武汉大学学报（理学版），2008，54（4）：439-442.

[8] 唐 敏，刘 耀，王 渝，等.金银花总黄酮粗提物体外抑菌作用研究[J].中国药房，2008，19（30）：2321-2323.

[9] 董 捷，张红城，秦 健，等.十种蜂花粉醇提物中总多酚和总黄酮含量测定[J].食品科学，2008，29（12）：246-249.

[10] 罗 晶.蔷薇红景天总黄酮的提取及分析[J].安徽农业科学，2008，36（35）：15546-15547.

[11] 毕和平，韩长日，廖家旺，等.穿心莲中总黄酮含量的测定[J]. 光谱实验室，2006，23（2）：356-359.

[12] 刘伟玲.刺五加叶中的主要活性成分分析[J].中医药导报，2009，15（7）：87-88.endprint

1.3.2 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响 分别准确称取4.000 0 g干燥的大草乌粉末5份，用滤纸包好后置于索氏提取器中，用100 mL石油醚在80 ℃条件下回流5 h，取除脂后的大草乌在60 ℃下烘干，用100 mL 70%乙醇溶液在85 ℃条件下回流2次，回流时间分别为1、2、3、4、5 h，合并滤液后抽滤，55 ℃减压蒸馏至无醇味，在4 800 r/min离心15 min，将上清液转移至100 mL容量瓶中，用70%乙醇定容，得到大草乌总黄酮提取液。

1.4 分析方法

1.4.1 波长的选择 将标准溶液和样品溶液以乙醇为空白对照，在波长200～800 nm进行扫描，结果显示标准溶液和样品溶液在波长510 nm处有最大吸收，故选定510 nm为测定波长。

1.4.2 标准曲线的绘制 精确称取芦丁对照品5 mg，用60%乙醇溶解，并转移至50 mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，得到浓度为0.100 0 mg/mL的标准溶液。精确吸取芦丁标准溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL，分别置于10 mL比色管（此处试验所用仪器为比色管，用分光光度计测定时用比色皿）中，各加60%乙醇至5 mL，再分别加入5%（质量分数，下同）的NaNO2溶液0.50 mL，摇匀，室温放置6 min，加10%的Al（NO3）3溶液0.50 mL摇匀，室温放置6 min，加4%的NaOH溶液 4.00 mL摇匀，室温放置15 min，用紫外-可见分光光度计在510 nm波长下测定吸光度，同时以试剂空白作参比。以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C为横坐标，绘制标准曲线。

1.4.3 总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取液1.00 mL，置于10 mL比色管（此处试验所用仪器为比色管，用分光光度计测定时用比色皿）中，补加相应体积分数的乙醇至5 mL，其他步骤按“1.4.2”的方法操作，在510 nm波长下平行测定3次。根据回归方程，计算总黄酮浓度。根据公式：总黄酮含量=[提取液浓度（mg/mL）×稀释倍数×体积（mL）/样品干重（g）×1 000]×100%，计算大草乌总黄酮含量。

1.5 清除超氧阴离子自由基能力的测定

取4.5 mL 50 mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液，加4.2 mL去离子水混匀后在25 ℃水浴中保温20 min，取出后立即加入在25 ℃预热过的3 mmol/L邻苯三酚0.3 mL，迅速摇匀后倒入比色皿，420 nm波长下每隔30 s测定吸光度，以10 mmol/L的HCl代替邻苯三酚作为空白对照。

按照上述操作步骤在加入邻苯三酚前先加入0.1 mL的总黄酮提取液，同样用10 mmol/L的HCl作空白对照，测定吸光度，并按以下公式计算清除率：

超氧阴离子自由基清除率=（A1-A2）/A1×100%

式中，A1为邻苯三酚自氧化平均吸光度；A2为加入样品后邻苯三酚自氧化平均吸光度。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C为横坐标， 绘制标准曲线，所得标准曲线如图1所示。所得回归方程为A=7.714 3C+0.004 3，R2=0.997 4。

2.2 不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮提取的影响

由表1可知，不同体积分数的乙醇提取得到的大草乌总黄酮的含量不同，乙醇体积分数从40%升高到70%时，随着乙醇体积分数的增大，大草乌总黄酮的含量也逐渐增大；乙醇体积分数从70%升高到90%时，随着乙醇体积分数的增大，大草乌总黄酮的含量稍有减小，70%乙醇提取的大草乌总黄酮含量最高，达1.456%。说明，大草乌中的总黄酮一部分为脂溶性，部分为水溶性（大草乌水提取液能与氯化铁反应显示出较深的颜色）。

2.3 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响

由表2可知，不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响不同。回流1～3 h时，随着回流时间的增长，大草乌总黄酮的含量逐渐增大；回流时间3～5 h，随着回流时间延长，大草乌总黄酮的含量有所减小，3 h时大草乌总黄酮含量最高，达1.457%。可能是回流时间过长会提取出其他成分与黄酮相互作用，使提取的总黄酮含量降低。

以上分析结果可知，用70%乙醇回流提取3 h，大草乌总黄酮含量最高。在此条件下，通过3次平行试验测定得到大草乌总黄酮含量为1.457%。

2.4 大草乌黄酮对超氧阴离子自由基的清除作用

通过测定，大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率达到34.49%。说明大草乌总黄酮具有一定的抗氧化作用。由此可见，大草乌具有较高的药用价值。

3 小结与讨论

采用不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮进行提取，大草乌中的总黄酮一部分为脂溶性，部分为水溶性，这与罗晶[10]对红景天分析的结果一致。本试验结果中测定的大草乌总黄酮含量为1.457%，与毕和平等[11]分析的穿心莲结果比较，大草乌中总黄酮含量比穿心莲的高，与刘伟玲[12]分析的刺五加叶中总黄酮的结果比较，大草乌中总黄酮含量则比刺五加叶中的低。说明不同药用植物中总黄酮含量不同。

本试验结果表明，以石油醚脱脂、乙醇回流可提取野生大草乌中总黄酮，提取的最佳条件为乙醇体积分数70%，回流提取时间3 h，此条件下提取的野生大草乌中总黄酮含量最高，达到1.457%。大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率为34.49%，说明大草乌总黄酮具有一定的抗氧化作用，且具有较高的药用价值。

参考文献：

[1] 昆明军区勤部卫生部.云南中草药选[M].天津：天津人民出版社，1970.

[2] 刘玉芬，夏海涛，杨树平.紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮的含量[J].食品科学，2005，26（9）：418-419.

[3] 李 静，王成永，张婷婷，等.木瓜中总黄酮成分的提取和含量测定[J]. 中医药临床杂志，2008，20（6）：617-619.

[4] 梁新红，赵功玲，赵瑞香.分光光度法测定仙人掌酒中总黄酮含量[J].中国酿造，2007（6）：67-69.

[5] 苗 方，侯刚健，安 芸，等.分光光度法对银杏茶中总黄酮的含量测定[J].医学理论与实践，2009，22（3）：359-360.

[6] 朱 红，钮福祥，张爱君，等.甘薯叶中黄酮类化合物提取工艺研究[J].江苏农业科学，2006（5）：154-156.

[7] 郑津辉，王 威，黄 辉.苦参提取液中黄酮类化合物的抑菌作用[J].武汉大学学报（理学版），2008，54（4）：439-442.

[8] 唐 敏，刘 耀，王 渝，等.金银花总黄酮粗提物体外抑菌作用研究[J].中国药房，2008，19（30）：2321-2323.

[9] 董 捷，张红城，秦 健，等.十种蜂花粉醇提物中总多酚和总黄酮含量测定[J].食品科学，2008，29（12）：246-249.

[10] 罗 晶.蔷薇红景天总黄酮的提取及分析[J].安徽农业科学，2008，36（35）：15546-15547.

[11] 毕和平，韩长日，廖家旺，等.穿心莲中总黄酮含量的测定[J]. 光谱实验室，2006，23（2）：356-359.

[12] 刘伟玲.刺五加叶中的主要活性成分分析[J].中医药导报，2009，15（7）：87-88.endprint