索斯诺夫独活对黄瓜尖孢镰刀菌的抑制作用及田间防效

柳春燕　马群飞　丛蕴喆　陈靠山

摘 要：目的：研究索斯诺夫独活对黄瓜枯萎病病原菌的抑制效果。方法：用乙醇提取获得独活提取物，采用生长速率法测定提取物对尖孢镰刀菌的抑制作用，用小区田间试验测定防治效果。结果：索斯诺夫独活的抑菌效果高于中国短毛独活的，其抑菌中浓度EC50为0.1175，而中国独活的EC50为0.3181。用索斯诺夫独活提取物进行田间防效试验，防治效果在84.1%～86.1%，优于叶枯唑的。结论：索斯诺夫独活具有很强的抑制病原菌的作用，有效浓度是中国短毛独活的3倍，可初步确定索斯诺夫独活比中国的短毛独活具有更高的抗菌杀菌活性成分。

关键词：索斯诺夫独活;尖孢镰刀菌;抑菌;防效

中图分类号 S435文献标识码 A文章编号 1007-7731（2019）15-0088-03

尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f.sp cucumerinum）是引起黄瓜枯萎病（Cucumber fusarium wilt）、影响黄瓜生产的毁灭性土传病原菌，可借助雨水、灌溉水等进行远距离传播，露地和保护地栽培连作地区发生尤为严重[1]。使用化学药剂防治，容易产生抗药性，也易引起土壤环境污染问题，因此，寻求无公害低残留的植物源杀菌剂已成为生物农药研究的热点之一[2]。

独活属在全世界的分布量约60种，多数分布于欧洲与亚洲地区，我国有23种。中药独活是伞形科重齿毛当归的干燥根（Angelica pubescens Maxim. f. biserrata），其性微温、味辛苦，具有祛风除湿、通痹的作用[3]，主产于四川、湖北、安徽等地，主要为栽培种[4]。独活在俄罗斯境内分布有40多个品种，主要为野生种，其中索斯诺夫独活（Heracleum sosnowskyi）的栽培面积最广，大约为100万hm2，在当地被称为无用的“毒草”。

独活在临床上是治疗风湿的首选药[5]，但临床应用数量有限。当前，独活提取物在农业生产上已有了一定的应用研究，例如，张知侠研究表明，短毛独活精油对小麦纹枯病菌（Rhizoctonia cerealis van der Hoeven）、油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum （Lib）de Bary）、辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici Leonian）均具有抑制作用[6];李敏敏等研究表明，独活乙醇提取物中含具有高效抑制柑橘炭疽菌的活性物质[7];加拿大独活（Heracleum maximum）含有抗细菌的香豆素[8]，伊朗独活（Heracleum persicum）挥发油中的化学成分1，8-桉叶和己酯对5种镰刀菌具有抑制作用、但不明显[9]。

目前，索斯诺夫独活对植物病原真菌的抑菌活性尚未见报道。为此，本研究以尖孢镰刀菌黄瓜专化型为模式病原菌，研究了索斯诺夫独活乙醇提取物（以下简称俄罗斯独活）和短毛独活乙醇提取物（以下简称中国独活）对病原真菌的抑制作用，并且对俄罗斯独活提取物进行了田间防效试验，为俄罗斯独活作为植物源杀菌剂在解决农业生产中的土传病害问题提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 供试植物 索斯诺夫独活，由俄罗斯医学技术科学院俄籍华侨司怀珠院士提供并鉴定。中国独活购自亳州中药材市场，由皖南医学院药学院年四辉副教授鉴定为短毛独活（Heracleum moellendorffii）。

1.1.2 供试菌种 尖孢镰刀菌黄瓜专化型，由山东省农业科学院植物保护研究所齐军山研究员分离鉴定并提供，在PDA培养基上继代培养。

1.2 试验方法

1.2.1 独活提取物的制备 参照王树桐的方法[10]，略有改进。取经粉碎的独活20g，加80%乙醇100mL，30℃、150r/min条件下恒温振荡提取24h，4层纱布过滤，5000r/min离心10min，取上清液，再经0.45μm膜二次过滤，取上清液，45℃旋转蒸发至干，乙醇回收。收集提取物称量，计算得率。

1.2.2 独活提取物对尖孢镰刀菌菌丝生长的抑制作用 取提取物2g溶于20mL的50%乙醇中作为母液，4℃下保存。取上述母液1mL与99mLPDA培养基混合均匀制成含1g/L的带药培养基，倒入8.5cm平板，冷却后在平板中央接直径0.6cm的尖孢镰刀菌菌片。重复4次。以纯PDA培养基平板作为空白对照，以含有0.5%乙醇的PDA培养基作本底对照。置于28℃恒温培养箱培养，接种后3d、5d、7d、10d分别测量菌落大小（用十字交叉法测量菌落直径），计算抑菌率。计算公式如下：

抑菌率（%）=（对照净生长量-处理净生长量）/对照净生长量×100[11]

在1g/L带药培养基基础上分别以2、1、0.5、0.125g/L浓度梯度的带药培养基接种尖孢镰刀菌后3d（72h），测量菌落大小，试验数据用DPS软件做毒力回归方程，计算EC50值。

1.2.3 田間防效试验 田间试验点分别设在莱阳市穴坊镇东富山村和照旺庄镇西淘章村2个农户的大棚里，大棚面积均为540m2（9m×60m）。棚内连续2年种植黄瓜，黄瓜品种均为青翠一号。小区实验设4个处理：（1）俄罗斯独活提取物1000倍喷施;（2）俄罗斯独活提取物2000倍喷施;（3）叶枯唑（湖北鑫农化工生产）600倍喷施;（4）清水对照。重复3次，小区面积24m2。东富山村大棚于2019年3月9号定植，西淘章村于2019年2月28日定植。2棚定植缓苗后每隔15d喷施1次，4月22日棚内已发生枯萎病，对各处理进行病情调查，计算病情指数和相对防效。病情分级标准为5级∶0级：全株无病;1级：全株25%以下叶片萎蔫;2级：全株25%～50%叶片萎蔫;3级：全株50%以上叶片萎蔫;4级：因病枯死。

2 结果与分析