驴粪中肠纤毛虫的初步分类鉴定

周 勇，刘利林

（1.新疆呼图壁县畜牧兽医局，新疆 呼图壁831200；2.塔里木大学 动物科学学院，新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室，新疆 阿拉尔843300）

纤毛虫在动物体内分布非常广泛，目前研究最多的是瘤胃纤毛虫［1］。Bonhomme等［2］认为，纤毛虫存在可以使胃肠道保持适宜的发酵水平、高水平氨氮，使纤维、有机物消化率提高，稳定p H等作用。盲肠纤毛虫作为驴盲肠微生物的重要组成，对维持盲肠内环境和消化吸收起着重要作用。有关驴的肠道纤毛虫的研究非常少，并且关于驴的营养消化的的研究报道也非常缺乏。目前马属动物肠道纤毛虫的研究方法主要还是依靠形态学法，国外的学者对马盲肠和结肠中的原虫进行了研究。如Kornilova［3］在雅库特马肠道中发现了57种纤毛虫，Moore and Dehority［4］在马的盲肠和结肠中发现了肠纤毛虫。Julliand［5］研究了15个土耳其马粪样中大肠纤毛虫的种群结构和分布，鉴定了22个属的36个种的纤毛虫。由于经济的发展变化，随着农村生产的机械化水平不断提高，驴的养殖数量大幅度下滑，而且，驴的研究价值也逐渐被忽视，驴的营养代谢相关的科研严重滞后甚至停滞，在驴的营养方面的研究投入明显少于其他家畜。近年来，由于人们的生活水平的提高，阿胶、驴肉、驴奶产业的兴起，驴养殖业也迅速发展［6］，但是，有关驴的营养特点和机理尚不健全，尤其对驴的盲肠微生物的研究更是缺乏。通过对驴肠道纤毛虫的研究可以全面揭示纤毛虫在驴营养消化中的作用，为进一步从肠道纤毛虫的角度研究驴的消化生理机能和进行肠道纤毛虫调控奠定基础。本文对驴粪中肠纤毛虫的进行了初步的分类鉴定和计数。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

新鲜驴粪，35%的甲醛，NaCL，甲基绿（上海蓝季科技发展有限公司），蒸馏水，石蜡油。

1.2 仪 器

电子天平，XB-K-25型血球计数板，OLYPUS DP70型生物显微系统（OLYPUS BX41），OLYPUS CX21型生物显微镜。盖玻片，载玻片，量筒，烧杯，玻璃棒，吸管。

1.3 MFS溶液配制

将35%的甲醛100 m L、NaCL8.0 g、甲基绿0.6 g和蒸馏水900 m L混合既得 MFS溶液，常温保存。

1.4 试验方法

1.4.1 染色固定 采集新鲜驴粪，立即用其体积两倍的MFS溶液进行固定和染色，静置数分钟后，用吸管吸取少许溶液滴在载玻片上，用盖玻片盖紧，再往盖玻片上滴入一滴石蜡油，然后放置在1000倍显微镜下观察纤毛的分布特点，虫体形状，细胞核的形状，胞口位置等［3］。

1.4.2 肠道纤毛虫计数 利用血球计数板在400倍生物显微镜下对驴粪中的纤毛虫进行计数［7］。随机抽取粪样，计数10次，根据计算公式：纤毛虫数量／m L＝80小格内的纤毛虫数／80×400×104×稀释倍数。通过计算得出驴的粪中纤毛虫的平均密度为（0.9±0.77）×105个／m L。

2.4.3 虫体大小测量 同时利用显微测量系统在1000倍下对虫体及细胞核进行测量，细胞核与虫体的大小用长轴表示，同种纤毛虫重复测量十个个体，计算平均值，单位为μm。

2 结 果

2.1 驴粪中肠纤毛虫的分类鉴定结果

图1 驴粪中肠纤毛虫的分类鉴定结果A、B、C、D、E为不能确定的纤毛虫种类Fig.1 Classification and identification of intestinal ciliate in faecalis of donkey

在1000倍显微镜下观察到的纤毛虫如图1所示。通过形态学方法比较鉴定，可以确定的肠纤毛虫种类有七种，分别为Bundleia elongata、Bundleia triangularis、Bundleia postciliata、Cycloposthium Edentatum m.edentatum、Cycloposthium Edentatum m.scutigerum、Ditoxum funinucleum以及Blepharocorys microcorys。其中：Bundleia elongata、Bundleia triangularis和Bundleia postciliata属于Buetschliidae纤毛虫属；Cycloposthium Edentatum m.edentatum 和Cycloposthium Edentatum m.scutigerum属于Cycloposthiidae纤毛虫属；Ditoxum funinucleum 属于Spirodiniidae纤毛虫属；Blepharocorys microcorys Blepharocorythidae纤毛虫属。另外，纤毛虫A、B、C、D、E在已有的文献中未见报道，暂不能确定其分类。

2.2 肠道纤毛虫计数

通过计算得出驴的粪中纤毛虫的平均密度为（0.9±0.77）×105个／m L。

2.3 肠道纤毛虫测量结果

对驴粪中10个纤毛虫虫体进行测量，测得其平均体长为（8.50±6.26）μm，平均体宽为（5.45±3.40）μm，纤毛虫核的平均大小为（1.70±1.33）μm。

3 讨 论

驴粪中所观察到的纤毛虫与Gurelli和Gocmen［8］在土耳其马粪中所观察到的纤毛虫有部分相同。本研究中，纤毛虫平均数量与Gurelli和Gocmen［8］在土耳其马的粪中检测到的数量有一定的差异，分析其原因可能是生理状况、季节、地域、日粮等的差异造成的。瘤胃纤毛的平均大小为20μm～30μm，驴肠道纤毛虫与瘤胃纤毛虫的大小存在较大差异，这与宿主物种的差异紧密相关。

本研究发现驴粪中肠道纤毛虫的种类有12种，其中7种纤毛虫已有文献报道，另外5种在已有文献没有报道过，有待进一步鉴定。与有人报道的土耳其马粪中的肠道纤毛虫36种存在较大的差别［8］，而试验中鉴别纤毛虫的种类是以文献中纤毛虫图片为依据，应用形态学分类法，进行分类鉴定，所以具有一定的局限性和差异性，很多纤毛虫的种类不能做出明确的鉴定，并且文献中所使用的15匹马来自土耳其伊兹密尔附近，存在一定的地域差异，还有饲料的因素，所以纤毛虫的种类较多，而试验中所使用的驴来自同一个地区，没有地域差异，饲喂的饲料都相同，所以体内产生的纤毛虫的种类比较少。

［1］ 冯仰廉.反刍动物营养学［M］.北京：科学出版社，2004：16-19.

［2］ Bonhomme A.Rumen ciliates：their metabolism and relationships with bacteria and their hosts［J］.Animal Feed Science and Technology，1990.

［3］ Kornilova O A.Ciliates from the intestine of Yakut horse（Equus caballus）［J］.Parazitologiia，2006，40（5）：472-478.

［4］ Moore B E，Dehority B A.Effects of diet and hindgut defaunation on diet digestibility and microbial concentrations in the cecum and colon of the horse［J］.J Anim Sci，1993，71（12）：3 350-3 358.

［5］ Julliand V，de Vaux A，Millet L，et al.Identification of Ruminococcus flavefaciens as the predominant cellulolytic bacterial species of the equine cecum［J］.Appl Environ Microbiol，1999，65（8）：3 738-3 7341.

［6］ 杨社珠.驴资源开发利用方向的探讨［J］.畜牧兽医杂志，2011（4）：39-40，42.

［7］ 郭向荣，孙宝琏.瘤胃纤毛虫的计数方法及其临床应用［J］.中国兽医杂志，1980（4）：31-33.

［8］ Gurelli G，Gocmen B.Intestinal ciliate composition found in the feces of the Turk rahvan horse Equus caballus，Linnaeus 1758［J］.Eur J Protistol，2011，47（4）：245-55.