翻堆频次对奶牛粪污异位发酵床中抗生素抗性基因及细菌群落的影响

时间：2024-05-24

郜道玉，崔华威，周源，龚萍，陈洁，万平民，邵志勇，华娟，李鹏，金尔光*

（1.武汉市农业科学院畜牧兽医研究所，武汉430208；2.长江大学动物科学学院，湖北荆州434025；3.华中农业大学动物医学院，武汉430070）

中国是世界上最大的抗生素生产国和消费国，每年畜牧业抗生素使用量占全球用量的一半左右[1]。然而进入畜禽体内的抗生素仅有少部分被吸收利用，绝大部分以原药或代谢产物形式随粪尿排出体外[2-3]。抗生素的选择压力会诱导肠道微生物和环境微生物产生抗生素抗性基因（Antibiotic resistance genes，ARGs）和耐药菌（Antibiotic resistant bacteria，ARB），导致畜禽粪污中残存大量的ARGs 和ARB。粪污中的ARGs 和ARB 可随空气逸散、地表径流、土壤渗滤及还田利用等进入生态环境，进而进入食物链对人类和动物健康构成潜在危害。

异位发酵床是以微生物好氧发酵为基础，结合原位发酵床和好氧堆肥形成的一种新型粪污处理技术，其以锯末、秸秆和砻糠等为垫料，通过接种复合微生物菌剂以及连续添加粪污，实现异地高效同步处理粪污[4-5]。翻堆是异位发酵床动态堆肥的保障，通过翻堆补充粪污、增加通气量，为微生物增殖提供养分和氧气，调节温度的变化及微生物群落结构，促进物料的分解，提高ARGs 等污染物的消减效果。研究表明，堆肥过程中产生的高温可杀灭不耐热的ARGs 宿主菌、调整微生物群落结构，显著降低畜禽粪便中ARGs 和可移动遗传因子（MGEs）的多样性和丰度[6-7]。钱勋[8]指出，不充分堆肥、普通高温堆肥、连续高温堆肥均可降低奶牛粪便中大部分ARGs 的丰度，其中连续高温堆肥效果最佳。由此可见，堆肥是去除粪污中ARGs的有效途径之一。

近年来，异位发酵床堆肥技术的研究主要集中在不同垫料对微生物菌落多样性和纤维素降解的影响方面[4，9]，关于不同翻堆频次对异位发酵床中ARGs 和整合子基因（intI1）的相对丰度的变化与微生物菌落丰度变化关系的报道较少，仅见张锦[10]报道实验室堆肥2 d 翻堆1 次可显著降低猪粪中ermB、ermC、tetQ、tetW、qnrS、qnrD的相对丰度。本研究以谷壳、锯末和砻糠等为垫料，辅以接种复合微生物菌剂，探讨翻堆频次对异位发酵床堆肥过程中ARGs、intI1和细菌群落变化的影响，分析ARGs 相对丰度变化与微生物菌落和intI1之间的关系，为阐明粪污异位发酵床堆肥过程中ARGs变化的主要影响因素提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

堆肥材料包括奶牛粪污（粪便、尿液及生产污水，含水量约90%）和异位发酵床垫料（谷壳、锯末、砻糠），其均来自湖北某奶牛场。复合微生物菌剂（含芽孢杆菌、粪球菌、乳酸菌和酵母菌等，总菌量≥1×1010CFU·g-1）由武汉旭润环保科技有限公司提供。

土壤基因组DNA 提取试剂盒（Fast DNA Spin kit for soil）购自TIANGEN公司；TaqDNA聚合酶购自大连宝生物公司（TAKARA），Agarose 琼脂糖（每瓶100 g）购自北京索莱宝科技有限公司；iTaq Universal SYBR Green Supermix购自上海根生生物科技有限公司；抗生素抗性基因引物由北京擎科生物科技有限公司合成。

1.2 试验设计

根据奶牛场异位发酵床生产方式，于2020年7月29 日至9 月27 日采用无盖塑料盒在奶牛场雨棚内开展试验。塑料盒总容积0.7 m3（高765 mm、上外径1 060 mm、下外径950 mm），底部留有12 个直径1 cm小孔。垫料总体积0.5 m3，谷壳、锯末、砻糠按体积比2∶1∶1 添加，根据各自质量和含水量计算出垫料总质量为60 kg，含水量12%。然后添加60 kg 粪污、150 g菌剂和1 500 g 尿素，调整物料C/N 为30∶1，含水率为60%左右，充分混合均匀后装入塑料盒。试验期间，第1 天添加粪污30 kg，第2～47 天根据含水量变化调整粪污添加量（约4～8 kg·d-1）。

按翻堆频次分为两组，T1组：1 d翻堆1次；T2组：2 d翻堆1次。

试验期间含水量控制在60%左右。采用微波炉加热法监测含水量，并根据含水量变化调整粪污添加量，粪污添加量（kg）=（60%-发酵床含水量）×60÷90%。

用实时数显温度仪垂直插入物料中心20～30 cm处监测温度，每天9：00 记录实时数显温度仪温度及空气温湿度测定器的温度和湿度。

用四分法取5 g 样品，加45 mL 无菌水，室温下振荡器振荡30 min，然后静置30 min，用pH 计测定上清液pH，每份样品3个重复。

1.3 样品采集

分别于堆肥第0、5、12、33、47、61天（T1组记为T1-0、T1-5、T1-12、T1-33、T1-47、T1-61，T2组记为T2-0、T2-5、T2-12、T2-33、T2-47、T2-61）收集样品。采用五点采样法从每个处理的上、中、下层（距离表面10、20、30 cm）采样，样品充分混合均匀，用四分法收集约500 g，然后分成两等份，密封于自封袋，其中一份储存在4 ℃冰箱中用于理化性质分析，另一份冷冻干燥后，研磨成1 mm，储存在-80 ℃冰箱，用于后续生物分析。

1.4 DNA提取

根据TIANGEN 土壤基因组DNA 提取试剂盒操作手册，分别提取上述样品DNA，使用分光光度计（NANoDROP ONEC，Thermo Fisher Scientific，美国）检测DNA 纯度和浓度，所有提取的DNA 样品在测序之前，均密封在-80 ℃的冰箱保存备用。

1.5 定量PCR检测

根据课题组的前期研究，选择包括四环素类抗性基因（tetG、tetW）、磺胺类抗性基因（sul1、sul2）、b-内酰胺类抗性基因（blaTEM-1）、大环内酯类抗性基因（ermQ）和整合子基因（intI1）7 种目标基因在ABI ViiA 7 Real Time PCR System 荧光定量PCR 仪上进行荧光定量PCR 检测。目标基因的引物设计参照文献[11] ，引物序列、片段大小及退火温度见表1。反应体系为基因组DNA 1 µL，iTaq Universal SYBR Green Supermix（2x）10µL，10µmol·L-1的上下游引物各0.25µL，双蒸水8.5 µL，总体积20 µL。反应条件：95 ℃3 min；95 ℃5 s、60 ℃30 s、72 ℃30 s，共40 个循环；65 ℃延伸5 s。每个样品3个重复。运行过程中，通过溶解曲线来检查非特异扩增，根据标准曲线的相关系数≥0.99计算ARGs拷贝数。

表1 PCR和qPCR引物序列、片段大小及退火温度Table 1 PCR and qPCR primer sequence，fragment size and annealing temperature

1.6 16S rRNA高通量测序

使用上海派森诺生物科技有限公司Illumina HiSeq平台进行16S rRNA 基因测序，确定堆肥样品中的细菌群落。使用PCR 通用引物806R（GGACTACHVGGGTWTCTAAT）和338F（ACTCCTACGGGAGGCAGCAG）扩增V3～V4 区域。按照DADA2 方法进行去引物、质量过滤、拼接和去嵌合体等步骤。使用Vsearch（v2.13.4_linux_x8_64）对97%相似度水平高质量序列进行聚类，输出代表序列和OTU 表。采用RDP分类器对OTU的代表性序列进行分类。

1.7 统计分析

采用IBM SPSS Statistics（25.0 版）对各处理样品之间的显著差异进行相关分析。使用Graphpadprism 8.0.2 软件对目标基因进行分析和绘图。使用派森诺基因云中的热图，绘制Top35 细菌群落的热图。采用CANOCO（5.1版）进行冗余分析，探究影响ARGs丰度变化的主要因素。基于ARGs、MGEs 和细胞菌属之间的Pearson 相关关系（P＜0.05，R＞0.6），使用Gephi 0.9.2进行网络分析。

2 结果与讨论

2.1 粪污降解过程中温度和pH的变化

堆肥过程中的温度影响微生物的活动和有机质的降解速率，低分子物质（有机物、蛋白质和糖类等）被微生物利用产生大量的热量，进而可升高堆肥的温度。本研究根据温度的变化趋势将堆肥过程分为4个阶段，即升温期、高温期、降温期及腐熟期，堆肥过程中两处理组的温度整体呈先上升后下降的变化趋势（图1A）。从图1A 可看出，T1、T2 组堆肥前期温度快速上升，分别在第5 天和第12 天达到最高温度（59.9 ℃、64.5 ℃），第2 天至第40 天均保持在50 ℃以上，第40 天后逐步降低，堆肥结束时接近环境温度。《畜禽粪便无害化处理技术规范》（GB/T 36195—2018）要求堆肥温度≥50 ℃的时间不少于7 d，本研究中50 ℃以上温度超过7 d，满足粪污无害化处理要求。Chang 等[12]的研究表明，堆肥过程中添加功能性菌剂、调理剂、翻堆等有利于增强微生物活性，促进微生物繁殖，提高堆肥温度，延长高温持续时间。本研究T1 和T2 组50 ℃以上温度维持了39 d，可能与发酵床垫料、添加复合微生物菌剂、动态补充粪浆等有利于促进微生物活动有关；40 d 后温度逐步降低，可能与可利用养分减少、微生物活动减弱等有关。高温期T2 组温度高于T1 组，可能与2 d 翻堆1 次有利于减少热量散失等因素有关。可见，2 d 翻堆1 次更有利于提高堆肥温度和延长高温期。

图1 粪污降解过程中温度和pH的变化Figure 1 Variation of temperature and pH during degradation of manure and sewage

T1、T2 组pH 值变化趋势见图1B。从图1B 可以看出，第0天时pH值最大（9.16），随后逐步降低，试验结束时T1、T2 组pH 值分别降至6.69 和6.48。堆肥过程中pH 值的变化对微生物活动有较大的影响，当pH值为6.7～9.0 时，微生物更加活跃，有利于其生长及最大限度地分解堆肥物料[13]。本研究堆肥初始物料pH值为9.16，与上述报道中pH 值范围接近，可为微生物的快速增殖和堆肥物料的分解提供良好生境。试验结束时堆肥产物中pH 值较初始物料明显降低（6.69和6.48），这可能与堆肥过程中的氨挥发、微生物代谢产生有机酸及其硝化作用产生无机酸的积累等有关[14-15] 。

2.2 粪污降解过程中ARGs和intI1的相对丰度变化

2.2.1 目标基因总相对丰度变化

采用qPCR 技术检测了6 种ARGs（sul1、sul2、tetG、tetW、blaTEM-1、ermQ）和intI1的相对丰度。T1 和T2 组目标基因总相对丰度整体上呈现先降低后升高再降低的变化趋势（图2）。从图2可看出，T1和T2组总相对丰度在0～33 d逐步降低，33～47 d小幅度增加，47～61 d 逐步降低，其中第33 天较第0 天分别降低了74.05%、78.35%，相对而言T2 组高温期的效果较好。试验结束时T1、T2 组目标基因总相对丰度较第0 天分别降低82.33%、80.46%。研究表明，堆肥过程中保持相对较高的温度可杀灭/去除ARGs 宿主菌、降解ARGs，从而降低目标基因丰度[8]。Wang 等[16]报道，堆肥高温期可明显降低ARGs 的丰度；Lin 等[17]研究发现，高温（50～60 ℃）堆肥可有效降低猪粪中ARGs 的总相对丰度。本研究高温阶段目标基因的丰度变化与上述报道一致，说明堆肥过程中持续保持较高温度可能有利于降低ARGs 的丰度。Qian 等[18]研究发现，牛粪好氧堆肥初期到高温期物料中部分目标ARGs丰度逐渐降低，而高温期到腐熟期升高。本研究第47 天也出现类似情况，这可能与物料逐步腐熟，温度逐渐下降，高温环境下被抑制的微生物恢复活性及后续添加粪浆带入ARGs等有关[19]。

图2 粪污降解过程中T1和T2组目标基因总相对丰度变化Figure 2 Changes of the total relative abundance of target genes in group T1 and T2 during degradation of manure and sewage

2.2.2 目标基因相对丰度变化

从图3 可以看出，T1 和T2 组tetG、tetW、sul1、blaTEM-1、ermQ的丰度整体上逐步降低，堆肥结束时较第0 天分别降低了16.70%（P＞0.05）、87.88%（P＜0.01）、54.60%（P＜0.05）、＞99.99%（P＜0.01）、97.80%（P＜0.01）和61.33%（P＜0.01）、99.46%（P＜0.01）、50.91%（P＞0.05）、99.29%（P＜0.01）、82.23%（P＜0.01）；而T1组sul2丰度先降低后逐步升高，T2 组呈降低-升高-降低的波动性变化，堆肥结束时T1 组增加了32.62%（P＞0.05）、T2 组降低了30.90%（P＞0.05）。相对而言，T2 组对6 种目标基因有较好的消除效果。堆肥后两处理组tetW、blaTEM-1和ermQ的相对丰度显著降低，与Li 等[11]报道的猪粪锯末共堆肥可降低tetW、blaTEM、ermQ的相对丰度的结果一致，说明异位发酵床堆肥可有效去除tetW、blaTEM、ermQ。本研究中，T1 组tetG、sul1和T2 组tetG、sul1、sul2的相对丰度较第0 天有不同程度降低，与武晋萍等[20]和Selvam 等[21]的报道类似，T1 组sul2富集与Chang 等[12]的结果一致。Chen等[22]报道猪粪锯末共堆肥产物中残留的主要是tetG、sul1、sul2，本研究结果与其一致，可能与这些抗性基因对高温有较强耐受性，或携带这些基因的宿主菌耐高温难以被除去[23]，不同条件下相同抗性基因的变化也不一样[24]等有关。尽管两处理均可较好地降低tetG、tetW、sul1、sul2、blaTEM-1、ermQ的相对丰度，但并不能有效去除tetG、sul1、sul2，这些ARGs 仍然可能有扩散传播的风险，因此堆肥过程中高效去除tetG、sul1、sul2的技术还有待于进一步研究。

图3 粪污降解过程中T1和T2组ARGs相对丰度的变化Figure 3 Changes of the relative abundance of ARGs in group T1 and T2 during degradation of manure and sewage

2.2.3intI1相对丰度变化

堆肥过程中intI1的相对丰度整体上呈下降趋势（图4）。从图4 可知，堆肥结束时T1、T2 组intI1相对丰度较第0 天分别降低了59.33%（P＜0.05）、99.91%（P＜0.01）。intI1是ARGs 水平转移的一个重要MGEs，ARGs 可通过MGEs 在不同的微生物之间传播，降低intI1的丰度可抑制ARGs 的扩散和传播[25]。Duan等[26]报道指出，添加复合微生物菌剂可降低牛粪堆肥产物中intI1的相对丰度，抑制ARGs 的传播。Fan等[27]发现堆肥可有效降低奶牛粪便中intI1的丰度。本研究结果与上述报道类似，说明两处理均可较好去除intI1，其中T2 组的效果优于T1 组。堆肥后intI1相对丰度降低可能是由于intI1不耐高温、或高温条件下某些不耐热宿主菌被去除[28]，T1 和T2 组间的差别可能与连续添加粪污中的intI1含量、翻堆次数、细菌群落结构等有关。

图4 粪污降解过程中T1和T2组intI1相对丰度的变化Figure 4 Changes of the relative abundance of intI1 in group T1 and T2 during degradation of manure and sewage

2.3 粪污降解过程中细菌群落的变化

取第0、5、12、33、47、61 天样品，每个样品3 个重复，计36 个样品，经组装、质量控制和过滤后，共获得2 247 318 条序列，鉴定出3 441 个相似度≥97%的OTUs。基于加权Weight-UniFace 距离的主坐标分析（PCoA）显示，PCoA1 和PCoA2 解释了细菌群落变化的57.5%（图5）。同一时间点3 份重复样品聚集在一起，说明各重复样品间差异较小，实验精确度高，取样方法合理。第0 天样品与堆肥其他时期样品明显分开，按照堆肥不同时期聚集在一起，表明堆肥过程对细菌群落结构变化有重要影响。

图5 基于发酵床堆肥过程中的加权快速UniFrace的主坐标分析（PCoA）Figure 5 Principal coordinate analysis（PCoA）based on weighted fast UniFrace during composting in a fermented bed

选取相对丰度Top10 的物种构建柱状堆叠图（图6A）。本研究第0天的样品中门水平的优势菌群依次是厚壁菌门（Firmicutes，79.57%～84.36%）、变形菌门（Proteobacteria，5.66%～7.94%）、放线菌门（Actinobacteria，5.84%～6.98%）和拟杆菌门（Bacteroidetes，0.94%～1.21%），这与Zhang 等[29]报道的奶牛粪便中微生物群落优势菌门的结果基本一致。堆肥不同时期，细菌群落结构发生了明显变化，Firmicutes 在0～12 d是最主要优势菌门，相对丰度占比为79.58%～87.57%，主要是由于属于Firmicutes 的大部分菌属耐高温[30]。第33 天和第47 天，Firmicutes 的丰度占比下降到 5.58%～15.16%，而 Bacteroidetes（13.09%～26.18%）、Proteobacteria（23.93%～30.81%）、绿湾菌门（Chloroflexi， 8.70%～21.20%）和 Actinobacteria（14.25%～20.00%）的丰度逐渐增加，取代Firmicutes成为优势菌门。试验结束时，与第0 天相比，Firmicutes 和Actinobacteria 的丰度T1 组分别降低了40.13%和2.68%，T2 组分别降低了43.71%和3.02%，Bacteroidetes 和Chloroflexi 的丰度T1 组分别增加了40.15%和1.94%，T2 组分别增加了41.69%和3.05%。Li 等[11]报道指出，猪粪锯末共堆肥腐熟期Firmicutes的相对丰度降低，而Bacteroidetes、Proteobacteria、Actinobacteria 相对丰度增加，本研究堆肥后Firmicutes相对丰度降低，Bacteroidetes 相对丰度增加与上述报道一致，Actinobacteria 相对丰度降低及Chloroflexi 相对丰度增加与上述报道不一致，这可能与堆肥物料和工艺、添加微生物菌剂、连续添加粪污、降温腐熟期某些细菌增殖等有关[12，31]。

图6 粪污降解过程中细菌群落Top10门和Top35属水平相对丰度Figure 6 Relative abundance of bacterial community top10 phylum and top35 genus levels during manure degradation

本研究选取相对丰度Top35 的菌属为细菌群落的代表作热图，进行进一步分析。根据堆肥过程中菌属水平丰度变化，将其分为两大类（H、G）。如图6B所示，Top35 菌属主要分布在Firmicutes、Proteobacteria、Actinobacteria 和Bacteroidetes 门中。G 类除Aquabacterium和Shigella外，其余菌属均属于Firmicutes，这些菌属在堆肥初期和高温期丰度最大，第12 天后逐渐降低。Clostridium、Mogibacterium、Turicibacter和Bacillaceae_Bacillus等菌属属于Firmicutes，堆肥初期和高温阶段丰度较高主要是由于这些菌属耐高温，这与Chang 等[12]的研究结果一致。试验结束时除Succiniclasticum的丰度明显增加外，Ruminococcus、Coprococcus、Butyrivibrio的丰度变化不明显，其他菌属丰度均下降至最低。Shigella和Turicibacter为人类致病菌[32]，堆肥结束时Shigella丰度由0.65%～1.05%下降到0.15%～0.16%，Turicibacter丰度由4.70%～4.90%下降为0.11%～0.17%，可见两处理均能有效降低其丰度。H 类分别属于Proteobacteria、Actinobacteria 和Bacteroidetes，这类菌属相对丰度随着堆肥进行逐渐升高，高温期相对丰度最高，然后逐渐降低，试验结束时除属于Proteobacteria 的Steroidobacter和Dyella、Actinobacteria 的Demequina和Acinetobacter、Bacteroidetes 的Ruminofilibacter和Prevotella菌属相对丰度较第0 天有不同程度增加外，其他菌属丰度均不同程度降低。Zhou 等[33]指出Corynebacterium是人类致病菌，初始物料中的丰度占比为1.04%～1.39%，堆肥结束时被完全去除。可见，堆肥过程可明显影响细菌群落的结构，尤其是对人类致病菌具有较好的抑制作用。

2.4 ARGs变化的影响因素分析

冗余分析（RDA）用于研究细菌群落、环境因子和MGEs 与ARGs 之间的关系，本研究对堆肥温度、pH、细菌群落（基于门的分类）及intI1进行冗余分析。由图7 可知，RDA 解释了ARGs 丰度变化的99.27%，其中RDA1 解释了69.38%、RDA2 解释了29.89%。选择变量中，细菌群落可解释ARGs 变化的70.07%、intI1解释25.10%、温度和pH 解释4.10%，表明堆肥过程中细菌群落、intI1的丰度、温度及pH 均可影响ARGs 的丰度变化。Wang 等[34]和胡婷[35]研究发现ARGs 与细菌群落之间存在较强的相关性。如表2 所示，本研究中Firmicutes 与intI1（P＜0.01）、tetW（P＜0.01）、tetG、blaTEM-1、ermQ呈正相关，堆肥后Firmicutes相对丰度降低可解释intI1、tetW、tetG、blaTEM-1、ermQ丰度的减少。Bacteroidetes、Chloroflexi 与sul1、sul2呈正相关，堆肥结束时Bacteroidetes、Chloroflexi 的丰度较第0 天显著增加，可解释sul1、sul2削减效果较差。可见，细菌群落是影响堆肥过程中ARGs 丰度变化的主要因素[36]。Zhang 等[37]的研究表明，堆肥过程中可通过降低intI1的丰度抑制其介导的水平基因转移，从而影响堆肥中ARGs 丰度的变化。本研究中，intI1与tetW（P＜0.01）、blaTEM-1（P＜0.05）、ermQ（P＜0.05）呈显著正相关，堆肥后T1 和T2 组intI1相对丰度分别降低59.33% 和99.91%，说明异位发酵床堆肥可能是通过降低intI1的丰度抑制水平基因转移进而降低ARGs的丰度。

图7 ARGs、细菌群落、intI1、温度和pH的冗余分析Figure 7 Redundancy analysis ARGs，bacterial communities，intI1，temperature and pH

表2 基于相对丰度的ARGs、MGEs和细菌菌门之间的Pearson′s相关系数Table 2 Pearson′s correlation coefficients between ARGs，MGEs and bacteriophages based on their relative abundance

2.5 异位发酵床降解过程中ARGs和intI1的潜在宿主菌分析

为进一步探讨ARGs变化的影响因素，基于Pearson相关系数，进行网络分析。从图8 可以看出，网络中42 个节点（包括6 种ARG、intI1和35 个细菌属）间存在显著相关性（P＜0.05）。Facklamia、Clostridiaceae_Clostridium和Turicibacter是tetW、ermQ、blaTEM-1的共同潜在宿主菌，Li 等[38]和Zhou 等[33]研究发现Facklamia、Clostridiaceae_Clostridium和Turicibacter是tetW、ermQ、blaTEM-1的潜在宿主菌，与本研究结果一致，堆肥后这些菌属相对丰度显著降低可解释tetW、ermQ和blaTEM-1相对丰度降低。Epulopiscium、Aquabacterium和Clostridum等菌属分别为intI1和sul1、tetG、tetW、blaTEM-1、ermQ共同潜在宿主菌，这与Wang 等[39]报道的ARG 和intI1可同时共存在同一细菌中的结果一致，说明intI1和ARGs 可能同时存在于同一细菌中，并可通过同一个细菌传播。Prevotella是tetG和sul2的潜在宿主菌，Dyella是tetG、sul1、sul2的潜在宿主菌，Hyphomicrobium、Ruminofilibacter和Steroidobacter是sul1和sul2独有的潜在宿主菌，这与张鑫[40]报道的Ruminofilibacter是sul1和sul2独有的潜在宿主菌的结果一致，堆肥后这些菌属的丰度增加，可解释tetG、sul1和sul2消除效果不理想。Clostridium、Clostridiaceae_Clostridium、Shigella是tetG、tetW和intI1的潜在宿主菌，堆肥结束时T1 和T2 组中这3 种菌属相对丰度较第0 天分别降低了11.05%、3.00%、0.64%和11.35%、3.23%、1.03%，可解释T2组tetG、tetW和intI1相对丰度降幅更大。本研究中intI1的潜在宿主菌达22 个，且与多个目标基因有共同潜在宿主菌，如Aquabaterium是sul1、tetG、tetW、blaTEM-1、ermQ和intI1的共同潜在宿主菌，Butyrivbrio是sul2、tetG、tetW、ermQ和intI1的共同潜在宿主菌，说明ARGs 可能通过intI1介导的水平基因转移在不同宿主菌间转移和传播[41]。综上，粪污异位发酵床降解过程中可能主要是通过降低ARGs 潜在宿主菌丰度及抑制intI1介导的ARGs 水平基因转移，从而降低多数ARGs的丰度。