HPLC-MS/MS法检测葡萄中嘧菌酯的残留量

马新刚，张爱娟，梁 林，左伯军

（山东省农药科学研究院山东省化学农药重点实验室，济南 250033）

嘧菌酯（azoxystrobin），别名阿米西达（amistar），化学名称为(E)-2-{2-[6-(2-氰基苯氧基)嘧啶-4-基氧]苯基}-3-甲氧基丙烯酸甲酯，分子式为C22H17N3O5，CAS登录号为31860-33-8。嘧菌酯是新型高效、广谱、内吸性杀菌剂，对白粉病和霜霉病防治效果较好，且与现有杀菌剂无交互抗性，在果蔬、谷物等作物的病虫害防治上应用广泛[1-2]。目前，已有其在人参、小麦、水稻、茶叶、水果和蔬菜等作物中的残留检测报道，采用的方法主要为气相色谱-火焰光度检测法、气相色谱-氮磷检测法、气相色谱-电子捕获检测法[3-5]、液相色谱-紫外线检测法[6-7]、气相色谱-串联质谱法和液相色谱-串联质谱法[8-13]，但嘧菌酯在葡萄中的残留检测未见报道。

本文参考QuEChERS方法，结合高效液相色谱-串联质谱仪，建立了嘧菌酯的残留量在葡萄中分析检测方法，该方法处理样品快速、简便、灵敏度高，嘧菌酯的定性定量准确。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Aglient 1290Ⅱ-6460高效液相色谱-串联质谱仪，美国安捷伦公司；Sorvall ST16型台式通风离心机，赛默飞世尔科技有限公司；XBLL-25A型多功能食品加工机，上海市帅佳电子科技有限公司；QL-861型高速涡旋混合仪，上海书培实验设备有限公司；JA21002型电子精密天平，上海赛德利思精密仪器仪表有限公司。

乙腈（色谱纯和分析纯），德国默克公司和天津市科密欧化学试剂有限公司；氯化钠（分析纯），上海阿拉丁生化科技股份有限公司；N-丙基乙二胺固相吸附剂（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、十八烷基硅烷（C18），粒径均为40～60 μm，天津市博纳艾杰尔科技有限公司；嘧菌酯标准品（98.7%），上海市农药研究所有限公司。

1.2 标准溶液配制

称量嘧菌酯标准品0.023 2 g，转移至25 mL容量瓶中，使用乙腈将标准品完全溶解，准确定容得916 mg/L嘧菌酯标准溶液，置于4℃冰箱中保存。

1.3 试验样品的前处理

用食品调理仪将葡萄粉碎，称取10.0 g，置于50 mL具塞式塑料离心管中，加入10 mL乙腈和5 mL超纯水，高速涡旋4 min，加入5 g氯化钠，剧烈振荡30 s，以4 500 r/min的转速离心4 min至液面分层，取上清液1 mL至装有40 mg PSA的2 mL塑料离心管中，高速涡旋30 s，静置1 min，上清液过0.22 μm有机系微孔滤膜，待检测。

1.4 色谱和质谱检测条件

色谱柱：Eclispe plus C18RRHD型色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱温为室温；进样体积1 μL；流动相：0.1%甲酸水溶液＋乙腈（体积比30∶70）；流速0.3 mL/min。

质谱条件：电喷雾离子源ESI（＋）；流速11 L/min；干燥器温度300℃；雾化气压力103 kPa；毛细管电压4 kV；干燥气N2；碰撞气N2。

2 结果与分析

2.1 仪器检测条件确定

使用1 mg/L嘧菌酯标准溶液，采用电喷雾电离ESI（＋/-）模式下进行全扫描（m/z80～520），保留时间为0.747 min，驻留时间为200 ms。根据扫描结果，选择合适的分子离子峰和电喷雾电离方式。结果表明，在ESI（＋）采集模式下，嘧菌酯［M＋1］峰（m/z403.9）响应值最高。选择母离子（m/z403.9）进行子离子扫描，不断优化碎裂电压和碰撞能量等相关参数，最终获得嘧菌酯的定量离子对m/z403.9＞372.0和定性离子对m/z403.9＞343.9，相应的碎裂电压为100 V，碰撞能量均为20 V。

在0.3 mL/min流速、0.1%甲酸水溶液＋乙腈（体积比30∶70）流动相下，嘧菌酯有效成分基线平稳，峰形对称，与其余杂质分离较好。

2.2 提取方法

试验结果表明，PSA和C18对嘧菌酯没有吸附，GCB对嘧菌酯的吸附在10%以内。PSA对样品中有机酸、糖类、色素和金属离子等吸附作用明显；C18对富含脂肪和醇类物质的样品有很好的吸附效果；GCB去除色素效果好。因葡萄样品中糖类和有机酸含量高，综合结果分析，最终选定PSA作为葡萄的净化剂。该方法操作简单，去除糖类和有机酸效果好，回收率高，耗时短，适用于大批量葡萄样品的检测。

2.3 嘧菌酯的线性范围

将嘧菌酯标准溶液（50 mg/L）用乙腈稀释配得0.02、0.10、0.50、2.50、5.00 mg/L的系列标准溶液。按1.4色谱和质谱条件测定，横坐标为标准溶液浓度，纵坐标为定量离子对峰面积，每个质量浓度进样3次，根据试验结果绘制工作曲线。在0.02～5.00 mg/L范围内，嘧菌酯在乙腈中线性关系良好，曲线方程为y=10 545x＋1 509，相关系数为0.994 9。

2.4 嘧菌酯的添加回收试验和精密度

葡萄中嘧菌酯的添加回收率及变异系数见表1。嘧菌酯在葡萄中添加回收率为98%～107%，变异系数为0.5%～1.0%，结果满足农药残留的分析要求。目标峰无杂质干扰，峰形好（图1）。

表1 葡萄中嘧菌酯的添加回收率及变异系数

图1 嘧菌酯在葡萄中的添加色谱图（添加水平0.5 mg/kg）

2.5 方法定量限

以最低添加水平作为方法的定量限，嘧菌酯在葡萄中的定量限为0.02 mg/kg。

3 结 论

本文参照QuEChERS方法，建立了嘧菌酯在葡萄中的残留分析检测方法，试验样品用水和乙腈提取，以PSA为净化剂，高效液相色谱-串联质谱仪快速检测。该方法通用性强，样品处理快速、简单、重现性较好，嘧菌酯在葡萄中的定量限、准确度和精密度均满足农药残留分析要求。