全球首个单针圆支二联苗（瑞圆舒）的创新工艺与攻毒试验

姚 晶，王科文

[硕腾（上海）企业管理有限公司，上海 长宁 200050]

一直以来，疫苗免疫的便捷性是养猪生产者的追求；尤其是在非洲猪瘟大背景下，更加催生了养猪生产者对便捷性的需求。因此，为了迎合养猪生产者的需求，行业内出现了混合疫苗的各种乱象—多种疫苗混合免疫。笔者认为在考虑满足行业需求的同时，也要考虑是否给养猪生产者带来了真正的益处。

养猪也是一门生意，最终养猪生产者是要赚取利润的，如此才能立于行业不败之地。不合理的混合免疫在当前相对高猪价的行情下带来的损失可能是可以承受的，但是这其实是在降低猪场生产者的利润，降低其竞争力；接下来的半年、一年、两年甚至五年，养猪场还能活多久？行业内不乏有这样的案例：猪场同样利润的情况下，你养的母猪数是别人的好几倍。

我们不能只看到眼前的方便，还要注重其后期的效果，真正给养猪生产者带来效益；或者说我们在保障效果的情况下来考虑其便捷性。硕腾即将在中国上市的猪圆环病毒（PCV）与猪肺炎支原体（MH）二联苗—瑞圆舒—就是既有效果又便捷的单针疫苗。文章将从创新工艺和攻毒试验来介绍瑞圆舒的有效性。

1 瑞圆舒的创新工艺

研制圆支二联苗的主要问题：猪血清中生长的猪肺炎支原体抗原和PCV抗原缺乏兼容性。猪血清含有多种针对各种抗原（包括PCV2）的特异性抗体。不幸的是，当把PCV抗原做成联苗时，猪肺炎支原体部分中的抗PCV抗体会结合PCV抗原。

为解决这个重大问题，针对瑞圆舒中猪肺炎支原体部分的生产，硕腾研究人员开发一种改进的下游生产工艺。

在猪肺炎支原体细胞生长过程中，免疫原性成分被释放到培养液中；这种无细胞的肺炎支原体培养上清液与沉淀的整个肺炎支原体细胞相比，同样可以实现对猪肺炎支原体的免疫保护。瑞圆舒疫苗中的肺炎支原体抗原代表了一种无细菌细胞的产品，这意味着只有可溶性猪肺炎支原体蛋白被用来诱导猪的免疫反应，而不是整个灭活的支原体。这样通过去除疫苗中不必要的成分使其安全性更高，且更有针对性地刺激免疫应答。

简单地去除肺炎支原体细胞并不能使猪肺炎支原体抗原与PCV2抗原兼容。因此，硕腾科学家引入了一种从含有猪肺炎支原体的培养液中除去抗PCV抗体的方法—“蛋白质A”层析法。通过使用蛋白质A去除肺炎支原体部分的PCV抗体（及其他无关的IgG抗体），联苗中的PCV抗原仍然有效。事实上，研究评估了多种全细胞和无细胞培养液上清猪肺炎支原体抗原的组合，最后证实了无细胞、蛋白质A处理的猪肺炎支原体抗原是非常高效的。

最后，同样重要的是找到合适的佐剂来同时优化疫苗中两种抗原的效力。研究人员进行了多次试验，比较了3种佐剂，以确定最安全、最有效的佐剂。在评估的佐剂中，选择了MetaStim，其在联苗中具有很好的有效性和安全性。几十年来，MetaStim佐剂已成功地用于猪、牛和马的疫苗中。该佐剂的优势包括针对灭活苗和活疫苗均能很好地刺激体液免疫和细胞免疫、不杀害活病毒活性、无矿物油、通针性好及无过敏反应等。

2 瑞圆舒的攻毒试验

2.1 PCV2攻毒试验

免疫后3周攻毒试验：选取了48头平均3周龄临床健康的杂种断奶仔猪，仔猪PCV2血清学阴性并且没有病毒血症；所有仔猪随机（24头/组）分为对照组（没有PCV抗原，只有MH抗原）和瑞圆舒组（Fostera PCV MH）；接种疫苗3周后（试验第21天），猪只通过肌肉注射1 mL和鼻内吸入2 mL共接种3 mL PCV2a（攻毒阶段6～9周龄）。

每天观察猪只的总体健康状况及呼吸困难、嗜睡等临床症状。每周收集血清样品和攻毒阶段的粪便拭子，并分析PCV2病毒血症、粪便排毒和抗体水平。攻毒后3周对所有猪只进行剖检，并采集组织样品来评估组织细胞浸润情况、淋巴衰竭和免疫组化（IHC，检查组织中的PCV）。

试验结果：瑞圆舒（Fostera PCV MH）组和对照组相比，疫苗接种减少了91.3%猪只病毒血症的发生率（P≤0.000 1，图1），粪便排毒显著降低70.0%（P=0.000 2），免疫猪的抗体滴度均显著提高（P≤0.005 6），淋巴衰竭减少91.2%，组织细胞浸润减少100%，组织中检出的PCV2抗原的数量减少77.4%（图2）。

图1 在试验过程中猪只出现过PCV2病毒血症的百分比

图2 PCV2组织分析（微观病变和免疫组化评分）

2.2 MH攻毒试验

免疫后3周攻毒试验：选取了60头临床健康的杂种断奶仔猪，大约3周龄，而且猪肺炎支原体血清阴性；将仔猪随机分为两组（30头/组），即对照组（无MH抗原，只有PCV抗原）和瑞圆舒组（包含MH和PCV抗原）；在接种疫苗后3周，用10 mL含有强毒活MH的肺脏匀浆对猪进行连续2 d气管内攻毒。每天观察猪的整体健康状况和呼吸困难、嗜睡等临床症状，在攻毒后4周对所有猪进行剖检以评估肺部病变，并收集肺部拭子和组织样本进行MH检测。

瑞圆舒组（1.66%）与对照组（7.01%）相比，MH病变肺脏的比例明显降低（P≤0.000 1）；这表明免疫组比对照组的相对风险降低了76.3%（图3）。血清学结果表明，接种前所有猪的MH抗体均为阴性（第0天），而瑞圆舒组在MH攻毒后具有记忆应答反应（第48天或第49天，P≤0.000 1）。

图3 MH病变肺脏的百分比（最小平方均值）

除免疫后3周龄攻毒试验，还进行了免疫后23周PCV2和MH攻毒试验；通过控制猪只PCV2病毒血症、PCV2粪便排毒、淋巴组织中病毒载量、接种疫苗的血清学反应及减轻MH引起的肺部病变的支持数据表明，瑞圆舒中的PCV部分和MH部分均具有至少23周的免疫保护期。

3 总结

通过瑞圆舒的创新工艺可知，瑞圆舒是从“基础”开始研发的，而不是两种现有疫苗的简单混合。在疫苗的MH组分生产工艺中，把富含MH抗原的液体部分中的MH细胞过滤掉，增加疫苗的安全性，并产生更有效的免疫应答；同时，通过“蛋白A”方法从MH部分中去除PCV抗体（和其他无关的IgG抗体），使两种抗原更加兼容；而且选用MetaStim作为瑞圆舒的佐剂来生产一种安全和高效的联苗。

在PCV2攻毒试验方面，试验结果证实了瑞圆舒中PCV成分能够帮助预防攻毒后PCV2病毒血症、显微病变（淋巴衰竭）及其在淋巴组织的定殖，帮助降低PCV2粪便排毒，接种后产生PCV2主动的抗体应答及攻毒后的记忆应答；在PCV2攻毒试验方面，试验结果证实了瑞圆舒中MH成分显著降低了猪支原体肺炎肺部病变严重程度，并对于猪肺炎支原体的攻毒产生了显著的记忆应答反应；两者的免疫保护期均达23周之长。

总而言之，瑞圆舒是从源头研发的圆支二联苗，在保证有效性的情况下发挥其便利性，给养猪生产者带来应有的利润。