河南省猪球虫感染情况及种类鉴定

程俊贞，刘光辉，班付国，房大学，赵胜杰

（1.许昌市动物疫病预防控制中心，河南 许昌 461000；2.河南省动物疫病预防控制中心，郑州 450008）

仔猪球虫病是由猪等孢球虫（Isospora suis）和某些艾美耳属（Eimeria）球虫寄生在哺乳期及新近断奶仔猪小肠上皮细胞所引起一种寄生性原虫病，临床上以腹泻为主要症状[1-2]。哺乳仔猪患球虫病是养猪场的常见问题[3]。发病主要出现在8～15日龄仔猪，感染日龄越小，病情越严重[3-4]。发病仔猪出现腹泻，粪便黄色到灰色，开始时粪便松软或呈糊状，随着病情加重变为液状，并且发出腐败乳汁样酸臭味。吮乳减少，被毛粗乱，脱水，增重下降，因而导致新生仔猪死亡率增加，断奶时营养不良，很多仔猪成了僵猪，给养猪生产造成了很大的经济损失[1，4-6]。

河南省是我国的养猪大省之一，为掌握河南省猪场球虫感染情况及感染球虫种类分布，为制定切实可行的预防措施提供依据，笔者于2018年8—11月和2019年3—5月选取河南省豫东、豫西、豫南、豫北和豫中部分市县的25个规模化猪场及专业户和6个农村散养户猪球虫感染情况和种类分布情况进行了初步调查，其结果如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 饱和糖-盐水溶液：380 g氯化钠与500 g蔗糖溶解于1 L水中，加热溶解，冷却备用。比重为1.226。

1.1.2 器材 显微镜、80目金属筛、130目金属筛、漏斗、离心机、铁架台、天平、烧杯、玻璃棒、盖玻片、载玻片、胶头滴管、冰箱等。

1.2 方法

1.2.1 样品采集 采用直肠取粪法，采集1～10日龄、11～20 日龄、21～30 日龄、31～40 日龄的仔猪及41日龄以上仔猪、肥育猪等粪样或收集刚排出的新鲜粪便约50～100 g，分别装入干净塑料袋中，标注猪场名称、编号、猪的年龄，置4℃冰箱内备查。

1.2.2 定性检查卵囊 用饱和糖-盐水溶液漂浮法检查球虫卵囊。取2 g粪便样品，用10 mL自来水搅拌均匀后，再加入40 mL自来水搅拌均匀，用80目和130目金属筛双层过滤，将滤液置于离心管中以3 000 r/min离心10 min，取出离心管弃去上清液，之后再加入50 mL左右饱和糖-盐水溶液，用干净的玻璃棒搅拌均匀，再以3 000 r/min离心10 min，然后用吊环吊一环上清液涂片，在高倍显微镜（400×）下观察，根据卵囊大小、形态进行查找。

1.2.3 卵囊收集 用饱和糖-盐水溶液漂浮法收集球虫卵囊。将阳性粪样加4～5倍量水搅拌均匀，在装有80目和130目双层金属筛的漏斗中过滤，将滤液置于离心管中以3 000 r/min离心10 min，取出离心管弃去上清液，再加入50 mL左右饱和糖-盐水溶液用干净的玻璃棒搅拌均匀，再以3 000 r/min离心10 min，然后用专门收集卵囊用的铁丝圈网多次蘸取上层表面液在装有100 mL左右自来水的烧杯中涮洗，即将卵囊收集到烧杯中制成卵囊混悬液；再将卵囊混悬液以3 000 r/min离心10 min，取出离心管弃去上清液，离心管中便为球虫卵囊。

1.2.4 卵囊培养 将收集到的球虫卵囊加入2.5%重铬酸钾溶液，取1～2滴收集的新鲜卵囊液置于18 mm×18 mm盖玻片上，再覆以同样大小盖玻片，四周用凡士林封闭后置载玻片上，28℃恒温箱中培养，每隔2 h用显微镜（400×）观察其孢子化程度，记录结果并显微拍照。其余卵囊置平皿于27～28℃的恒温箱中培养观察直至80%卵囊完全孢子化，期间保持深度0.5 cm，每天用吸管吹打2～3次，计数后置于4℃冰箱中保存。

1.2.5 球虫种类鉴定 用Miaspro图象分析处理系统测量卵囊、卵囊质、孢子囊的大小及卵囊周长、面积、形状因子（卵囊长度∶卵囊宽度）等，结合卵囊形态、孢子囊、子孢子的形态结构及个数，参照有关文献进行虫种鉴定[1-2，7-11]。

2 结果与分析

2.1 猪场及散养户猪球虫感染情况

调查商丘、漯河、许昌、禹州、洛阳、新安、偃师、宜阳、郑州、淇县、鹤壁、嵩县、伊川、汝阳等14个地、市县的25个具有代表性的规模化猪场及专业户和6个地市农村散养户猪，共检查2 051份样品，除了偃师某猪场2和偃师散养户的球虫感染为阴性，其余猪场的猪球虫感染均为阳性。感染日龄主要集中在11～20日龄，猪场阳性率为61.29%，球虫的最高感染率为83.33%，平均感染率为23.29%；其次在1～10日龄，猪场阳性率为41.94%，球虫的最高感染率为66.67%，平均感染率为17.71%；在21～30日龄，猪场阳性率为35.48%，球虫的最高感染率为85.71%，平均感染率为13.35%；在31～40日龄，猪场阳性率为38.71%，球虫的最高感染率为80.00%，平均感染率为7.04%；在41日龄以上猪场阳性率也为48.39%，球虫的最高感染率为37.50%，平均感染率为7.95%。详见表1。

表1 猪场及散养户猪球虫感染情况

表1 猪场及散养户猪球虫感染情况（续）

2.2 球虫种类鉴定结果

从卵囊形态结构、大小以及子孢子的形态结构、大小及个数经过初步分离和鉴定，鉴定出河南省25个猪场及专业户和6个地市的散养户猪感染的球虫有2个属8种，分别是猪等孢球虫（Isospora suis）、杨陵艾美耳球虫新种（Eimeria yanglingensissp.Nov.）、种猪艾美耳球虫（E.porci）、蒂氏艾美耳球虫（E.debliecki）、猪艾美耳球虫（E.suis）、极细艾美耳球虫（E.perminuta）、粗糙艾美耳球虫（E.scabra）和新蒂氏艾美耳球虫（E.neodebliecki）。

2.2.1 8种球虫特征及其感染率

猪的8种孢子化球虫卵囊见图1。

（1）猪等孢球虫（I.suis Biester，1934，图 1-1）。卵囊呈球形、亚球形或卵圆形，黄褐色或无色，卵囊壁光滑且较薄，无色，孢子形成后的卵囊壁常皱裂，无卵膜孔。卵囊的大小为 19.549～29.428 μm×15.746～22.273 μm， 平均为 20.976 μm×18.648 μm；面积为 276.684～354.768 μm2， 平均面积为 304.562 μm2；周长为 52.469～68.264 μm，平均周长为 60.584 μm；形状因子为 1.000～1.236，平均为 1.118。 壁厚1.2～1.6 μm，平均 1.4 μm；无极粒，无卵囊余体，孢子化的卵囊内有2个孢子囊，孢子囊呈圆形或椭圆形，大小为 12.4～17.2 μm×9.6～11.6 μm，平均 15.4 μm×12.8 μm，形状指数为1.11～1.25，平均为1.18。孢子囊余体呈颗粒状，位于孢子囊一端，无斯氏体。每个孢子囊内有4个子孢子，子孢子呈腊肠形或香蕉形，钝端有一折光球。猪场感染率为80.65%。

（2）杨陵艾美球虫新种（E.yanglingensis sp．Nov．，图1-2）。卵囊窄长，似长圆柱状，有的两端大小略有差异，但卵囊对称。卵囊壁两层，较厚，淡黄色，无卵膜孔。 卵囊的大小为 32.216～35.624 μm×14.633～21.422 μm，平均为 33.976 μm×17.648 μm；面积为324.658～426.265 μm2， 平均面积为 384.226 μm2；周长为 58.354～71.225 μm，平均周长为 64.259 μm；形状因子为1.926～2.124，平均为2.054。无卵囊残体，有极粒。孢子化卵囊内有4个孢子囊，孢子囊对称，长卵圆形， 大小为 9.26～19.6 μm×5.21～6.98 μm，平均 17.4 μm×6.4 μm，形状指数为 1.5～3.4，平均为 2.64。每个孢子囊有2个子孢子，子孢子呈香蕉形，2个子孢子头尾并列于孢子囊内。猪场感染率为51.61%。

（3）种猪艾美尔球虫（E.porci Vetterling，1965，图1-3）。卵囊椭圆形。壁光滑，黄褐色或无色，由两层构成，无卵膜孔。卵囊的大小为18.236～24.568 μm×13.562～17.364 μm， 平均为 22.164 μm×16.015 μm；面积为 278.324～326.263 μm2， 平均面积为 295.364 μm2；周长为 46.358～61.268 μm，平均周长为 54.362 μm；形状因子为1.264～1.646，平均为1.424。 缺外残体，有一个极粒。孢子化的卵囊内有4个孢子囊，孢子囊宽卵圆形，内残体由细颗粒构成，位于两子孢子之间，成条状或三角形排列。孢子囊大小为8.9～11.2 μm×6.48～7.36 μm，平均 9.7 μm×6.84 μm，形状指数为1.46～1.58，平均为1.52。猪场感染率为38.71%。

（4）蒂氏艾美耳球虫（E.debliecki Douwes，1921，图1-4）。卵囊常呈椭圆形、圆柱状。壁光滑，淡黄色，由两层构成，厚约（1.4±0.2）μm。无卵膜孔和外残体，但有明显的极粒。卵囊的大小为23.568～31.216 μm×19.364～24.649 μm，平均为 28.684 μm×22.569 μm；面积为 326.128～402.364 μm2， 平均面积为 346.892 μm2；周长为 54.633～66.326 μm，平均周长为 58.467 μm；形状因子为 1.248～1.626，平均为 1.496。 孢子化的卵囊内有4个孢子囊，孢子囊为不对称的长卵圆形，一边较为平直，另一边呈弧形；孢子囊大小为13.8～21.4 μm×5.8～7.9 μm，平均 18.2 μm×6.8 μm，形状指数为2.24～2.98，平均为2.64。猪场感染率为51.61%。

（5）猪艾美耳球虫（E.suis Noller，1921，图 1-5）。卵囊为圆形或亚球形。壁光滑，由两层构成，厚约0.15 μm，黄褐色。无极帽和外残体，有极粒。卵囊的大小为 16.863～22.658 μm×11.364～17.364 μm，平均为 20.364 μm×16.224 μm； 面积为 289.364～346.269 μm2， 平均面积为 324.368 μm2； 周长为 47.694～62.354 μm， 平均周长为 56.354 μm； 形状因子为1.256～1.342，平均为1.294。孢子化的卵囊内有4个孢子囊，孢子囊卵圆形，大小为 9.4～11.2 μm×6.8～8.1 μm，平均 10.8 μm×7.4 μm，形状指数为 1.24～1.68，平均为1.49。猪场感染率为38.71%。

（6）极细艾美耳球虫（E.perminuta Henry，1931，图1-6）。卵囊呈圆球形或亚球形。壁粗糙，由两层构成，淡黄色。无卵膜孔，有极粒，但无外残体。卵囊的大小为 14.684～17.224 μm×11.367～15.694 μm，平均为 16.326 μm×13.242 μm； 面积为 249.564～298.368 μm2，平均面积为 286.324 μm2； 周长为 40.335～54.261 μm， 平均周长为 50.468 μm； 形状因子为1.038～1.226，平均为1.148。孢子化的卵囊内有4个孢子囊，孢子囊近似椭圆形，大小为6.8～8.2 μm×4.4～6.2 μm，平均 7.8 μm×5.3 μm，形状指数为 1.46～1.87，平均为1.57。猪场感染率为32.26%。

（7）粗糙艾美耳球虫（E.scabra Henry，1931，图 1-7）。卵囊呈椭圆形。壁粗糙，有辐射状条纹，呈黄色或黄褐色，厚约2 μm。有显著的卵膜孔，但无极帽。卵囊的大小为 32.664～34.469 μm×21.652～24.649 μm，平均为 32.623 μm×23.465 μm；面积为 346.846～426.364 μm2，平均面积为 384.669 μm2；周长为 56.354～65.394 μm，平均周长为61.258 7 μm；形状因子为1.324～1.548，平均为1.432。孢子化的卵囊内有4个孢子囊，具极粒，无外残体。孢子囊长卵圆形，大小为13.8～19.2 μm×6.4～9.8 μm，平均 16.4 μm×8.4 μm，形状指数为1.68～2.24，平均为1.86。猪场感染率为32.26%。

（8）新蒂氏艾美耳球虫（E.neodebliecki Vetterling，1965，图1-8）。卵囊常呈椭圆形、圆柱状。壁光滑，黄褐色，由两层构成。无卵膜孔和外残体，但有明显的极粒。 卵囊的大小为19.367～23.654 μm×14.325～19.568 μm，平均为 22.364 μm×16.324 μm；面积为 311.684～348.362 μm2，平 均 面 积 为 324.662 μm2； 周 长 为50.364～58.694 μm，平均周长为 56.394 μm；形状因子为1.248～1.564，平均为1.408。孢子化的卵囊内有4个孢子囊，孢子囊长卵圆形，大小为10.658～16.328 μm×5.468～8.624 μm，平均 13.684 μm×6.246 μm，形状指数为2.14～2.61，平均为2.34。猪场感染率为35.48%。

2.2.2 不同日龄段感染的球虫种类 在所有被调查的猪群中，以11～20日龄段仔猪感染的球虫种类较多，感染7种；其次在21～30日龄段，感染6种球虫；再次是在1～10日龄段和41日龄以上，感染5种球虫；在31～40日龄段感染4种球虫。其中，I.suis主要感染40日龄以下仔猪；E.yanglingensis sp.则感染10日龄以上猪；E.porci感染10日龄以下和41日龄以上猪；E.debliecki和E.perminuta也主要感染40日龄以下仔猪；E.suis和E.scabra主要感染11～30日龄和41日龄以上猪；E.neodebliecki则感染20日龄以下和41日龄以上猪。详见表2。

表2 不同日龄段所感染的球虫种类

2.2.3 不同猪场感染的球虫种类 在25个猪场及专业户和6个地市的散养户中，猪球虫多为混合感染，除了12号（偃师某猪场2）和31号（偃师散养户）无球虫感染，2号（漯河某猪场）、23号（洛阳专业户2）和25号（嵩县专业户）是单一种类感染，其余猪场多是感染3～6种；从各个猪场感染的种类看，河南省猪场感染的球虫优势种为I.suis，其次是E.yanglingensis sp.、E.debliecki。 详见表 3。

表3 不同猪场所感染的球虫种类

3 结论与讨论

3.1 猪球虫病在河南省普遍存在

在25个猪场及专业户和6个地市的散养户中，除了12号猪场（偃师某猪场2）和31号（偃师散养户）的球虫感染为阴性，其余猪场的猪球虫感染均为阳性。在阳性场中，猪球虫感染率可高达40.43%（淇县某猪场3）和35.29%（淇县某猪场1），感染率最低为0.84%（洛阳某猪场），平均感染率为12.14%；说明猪球虫病在河南广泛存在，而且感染率挺高。在所有被调查的猪场中，散养户的平均感染率为11.91%，而猪场的平均感染率则为12.54%，说明与散养户相比，猪场的球虫感染率较高，其原因可能是猪场的养殖密度大，猪球虫更易传播。说明猪球虫的传播与养殖密度也相关，养殖密度大，猪群之间更易接触，给猪球虫的传播创造有利条件；反之亦然。

3.2 不同日龄猪感染率不同，11～20日龄仔猪球虫感染率最高

调查和试验结果表明：猪球虫主要感染1～20日龄仔猪，尤其是11～20日龄的仔猪，感染率为23.29%，最高感染率可达83.33%，21日龄以后感染率逐渐降低；等孢球虫感染日龄也主要集中在11～20日龄，感染率为19.52%，最高感染率为66.67%；41日龄以上则不易感，调查的结果是41日龄以上感染率为0。据有关资料报道：仔猪球虫感染以8～15日龄为主[3-4]。本研究结果与之相比，易感日龄有扩大化的趋势，说明仔猪年龄越小，对球虫越易感。

3.3 猪场感染球虫种类较多，其中猪等孢球虫为优势虫种和主要致病种

据周继贤等[9]1996报道：河南共感染8种球虫，分别是猪等孢球虫（Isospora suis）、有刺艾美耳球虫（Eimeria spinosa）、种猪艾美耳球虫（E.porci）、蒂氏艾美耳球虫（E.debliecki）、猪艾美耳球虫（E.suis）、极细艾美耳球虫（E.perminuta）、粗糙艾美耳球虫（E.scabra）和新蒂氏艾美耳球虫（E.neodebliecki），优势虫种是E.debliecki和E.scabra。本调查结果显示：在河南发现了杨陵艾美耳球虫新种（Eimeria yanglingensis sp.Nov.），而没有 Eimeria spinosa。 不同种类球虫，猪场感染率不同，感染率较高分别为猪等孢球虫（猪场感染率为80.65%）、杨陵艾美耳球虫新种（猪场感染率为51.61%）和蒂氏艾美耳球虫（猪场感染率为51.61%），况且猪等孢球虫是引起仔猪球虫病的致病种。说明河南猪球虫种类有所改变，更重要的是优势种发生了改变，猪等孢球虫为优势虫种和主要致病种。

3.4 各猪场感染的球虫种类不同

调查和试验结果表明：在25个猪场及专业户和6个地市的散养户中，除了12号猪场（偃师某猪场2）和31号（偃师散养户）的球虫感染为阴性外，其余猪场均感染有猪球虫；猪球虫感染场中，除了2号（漯河某猪场）、23号（洛阳专业户2）和25号（嵩县专业户）是单一种类感染，其余猪场为混合感染，多是感染3～6种球虫。说明河南省猪场感染猪球虫以混合感染为主，不同猪场感染的球虫种类也不同。