蛋内注射黄芪多糖增强高温孵化时雏鸡法氏囊抗氧化性能

苏兰利，江海宙，赵银利，王金荣，贾 葳，胡三龙

(河南工业大学 生物工程学院，河南 郑州 450001)

雏鸡生长速度快、新陈代谢旺盛，但其散热能力差，易发生热应激，这是导致雏鸡发病和死亡的重要因素之一。胚胎时期热习服是减轻雏鸡热应激的有效方法，可使雏鸡在后期的生长过程中获得抵御热应激的能力，但高温应激会降低雏鸡的抗氧化能力。有研究报道，在种蛋孵化的10～18胚龄时，每天对种蛋进行6 h的高温处理，可以提高雏鸡出生后对热应激的适应能力，同时其生长速度也快于常温孵化的雏鸡[1-2]。但是高温孵化会直接影响鸡胚胎的发育，降低出雏率[3]。若母鸡常处在高温环境中，则会增加其种蛋的死胚率和后代的抗氧化能力[4]。

黄芪多糖(Astragaluspolysaccharides，APS)具有抗炎和抗氧化等多种生物学特性[5]。有文献报道，黄芪多糖可以提高动物谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性，降低丙二醛(MDA)的含量[6-8]。在体外培养的鸡淋巴细胞中加入黄芪多糖，能够使鸡淋巴细胞SOD和GSH-Px的活性显著增强，使MDA含量降低[9]。前期研究发现，利用黄芪多糖浸泡种蛋，可以增强0日龄雏鸡的脾脏和法氏囊指数，并增加雏鸡肝脏、脾脏和法氏囊组织的抗氧化能力[10-11]。法氏囊是禽类的中枢免疫器官，有研究发现，高温孵化后雏鸡的生长指数及法氏囊质量会显著降低[12-13]。那么，黄芪多糖是否能够缓解高温孵化对雏鸡法氏囊抗氧化能力和鸡胚发育的抑制作用目前还不清楚。因此，本研究在入孵前对肉鸡种蛋气室内注射不同剂量的黄芪多糖，然后进行高温孵化，通过分析出雏后0、7日龄雏鸡的体质量和法氏囊质量，并进一步检测雏鸡血清和法氏囊组织中GSH-Px和SOD活性以及MDA含量，探讨蛋内注射黄芪多糖对高温孵化鸡胚发育和雏鸡法氏囊抗氧化能力的影响，并寻找蛋内注射黄芪多糖的最佳剂量，以期提高雏鸡的抗热应激和抗病能力，并为黄芪多糖的合理应用提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 试剂和仪器

黄芪多糖注射液购于北京生泰尔科技股份有限公司，规格为0.02 g/mL。GSH-Px试剂盒、SOD试剂盒、MDA试剂盒和考马斯亮蓝试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。孵化器购于南京万盛孵化设备有限公司，酶标仪购于美国Bio-Tek公司。

1.2 肉鸡种蛋的黄芪多糖注射和孵化

120枚固始肉鸡种蛋购于河南农业大学种鸡场，按照种蛋质量一致的原则随机分为4个组，每组30枚。种蛋经消毒后进行气室内注射黄芪多糖，对照组种蛋气室内注射1.5 mL生理盐水，试验1组、试验2组、试验3组分别注入0.5、1.0、1.5 mL黄芪多糖注射液，含黄芪多糖分别为10、20、30 mg。

将注射后的肉鸡种蛋放入孵化器进行孵化，在1—9胚龄时将孵化器设置为温度37.5 ℃、湿度60%。在孵化到10—18胚龄时，每天10:00将孵化器设置为温度39.5 ℃、湿度60%，18:00将孵化器设置为温度37.5 ℃、湿度60%，种蛋每天进行8 h的高温孵化。孵化至19胚龄时落盘，直至出雏。

1.3 样品采集及抗氧化指标测定

1.3.1 雏鸡血样及法氏囊的采集与处理 记录出雏时的出雏数、健雏数、弱雏数，同时称量雏鸡体质量。每组选取10只雏鸡进行采血，解剖鸡只后采集法氏囊并称质量，然后制备组织匀浆用于抗氧化指标测定。其余雏鸡饲养至7日龄时称量体质量并进行采血，解剖鸡只后采集法氏囊并称质量，然后制备组织匀浆用于抗氧化指标测定。

1.3.2 出雏指标及抗氧化指标的测定 出雏指标：出雏率=出雏数/种蛋数；健雏率=健雏数/雏鸡数；弱雏率=弱雏数/雏鸡数；法氏囊指数(mg/g)=法氏囊质量(mg)/雏鸡体质量(g)。

抗氧化指标：血清和法氏囊组织中SOD活性测定采用羟胺法，GSH-Px活性测定采用比色法，MDA含量测定采用硫代巴比妥酸(TBA)法，法氏囊组织匀浆蛋白质含量测定用考马斯亮蓝法。具体测定均按照试剂盒说明书进行。

1.4 数据处理

结果数据用“平均数±标准误”表示。所有的数据采用SPSS 18.0统计软件中的单因子方差分析进行统计，并进行LSD多重比较。

2 结果与分析

2.1 蛋内注射黄芪多糖对高温孵化种蛋出雏的影响

如表1所示，分别在蛋内注射10、20、30 mg黄芪多糖提高了经高温孵化后种蛋的出雏率和健雏率，降低了弱雏率。相比于对照组，试验1、2、3组种蛋的出雏率分别提高了4.16%、4.16%、8.34%，健雏率分别提高了5.14%、7.05%、9.89%，因此，在蛋内注射30 mg黄芪多糖的效果最好。

2.2 蛋内注射黄芪多糖对高温孵化雏鸡法氏囊发育的影响

如表2所示，试验3组0日龄雏鸡的体质量比试验1组和对照组分别提高了4.83%和5.72%(P<0.05)，与试验2组雏鸡体质量差异不显著(P>0.05)。试验1组雏鸡体质量与试验2组差异不显著(P>0.05)。相比于对照组，试验3组雏鸡的法氏囊质量提高了31.25%(P<0.05)，但与试验1组和试验2组雏鸡的法氏囊质量差异不显著(P>0.05)。试验组雏鸡的法氏囊指数和对照组差异不显著，说明在蛋内注射30 mg黄芪多糖可以提高经高温孵化的0日龄雏鸡的体质量和法氏囊质量，对法氏囊指数没有影响。

表1 种蛋出雏情况

表2 0日龄雏鸡体质量和法氏囊指数

注：字母相同表示差异不显著(P>0.05)，不同表示差异显著(P<0.05)。下同。

Note: Values with the same letter mean no significant difference (P>0.05), and values with different letter mean significant difference (P<0.05). The same below.

如表3所示，试验1、2、3组7日龄雏鸡体质量分别比对照组提高了12.62%、14.83%和20.79%(P<0.05)，试验3组雏鸡的体质量分别比试验1组和试验2组提高了7.25%(P<0.05)和5.19%(P>0.05)，试验1组和试验2组雏鸡的体质量之间差异不显著(P>0.05)。试验3组雏鸡的法氏囊质量分别比试验1组和对照组提高了9.22%和29.12%(P<0.05)，与试验2组没有显著差异(P>0.05)。试验组雏鸡的法氏囊指数和对照组差异不显著(P>0.05)。说明在蛋内注射30 mg黄芪多糖可以提高经高温孵化的7日龄雏鸡体质量，并促进法氏囊发育。

表3 7日龄雏鸡体质量和法氏囊指数

2.3 蛋内注射黄芪多糖对高温孵化雏鸡血清抗氧化能力的影响

如表4所示，试验2、3组0日龄雏鸡的血清GSH-Px活性分别比对照组提高了40.30%、46.35%(P<0.05)，但与试验1组差异不显著(P>0.05)。此外，试验1组雏鸡的血清GSH-Px活性与对照组雏鸡差异不显著(P>0.05)。试验1、2、3组雏鸡的血清SOD活性分别比对照组雏鸡提高了32.27%、35.76%、39.81%，达到差异显著水平(P<0.05)，但3个试验组之间差异没有达到显著水平(P>0.05)。试验1、2、3组雏鸡血清MDA含量分别比对照组降低了32.08%、44.94%、66.04%(P<0.05)，而试验3组雏鸡血清MDA含量分别比试验1、2组降低了50.00%、38.32%(P<0.05)。说明在蛋内注射黄芪多糖能够显著提高经高温孵化的0日龄雏鸡的血清抗氧化能力，且有剂量依赖性，30 mg黄芪多糖效果最好。

表4 0日龄雏鸡血清中抗氧化指标

如表5所示，试验2、3组7日龄雏鸡血清中GSH-Px的活性分别比对照组提高了32.96%、51.40%，SOD的活性分别比对照组提高了14.37%、21.22%(P<0.05)。试验2、3组之间雏鸡血清中GSH-Px和SOD的活性差异不显著(P>0.05)。此外，试验1、2、3组雏鸡血清MDA含量分别比对照组降低了29.59%、54.59%、57.40%(P<0.05)，其中试验2、3组雏鸡血清MDA含量分别比试验1组降低了35.51%、39.49%(P<0.05)，但试验2组和试验3组雏鸡血清MDA含量之间差异不显著(P>0.05)。说明在蛋内注射20、30 mg黄芪多糖能够显著提高经高温孵化的7日龄雏鸡的血清抗氧化能力。

表5 7日龄雏鸡血清中抗氧化指标

2.4 蛋内注射黄芪多糖对高温孵化雏鸡法氏囊抗氧化指标的影响

如表6所示，试验3组0日龄雏鸡法氏囊组织GSH-Px活性分别比对照组和试验1组提高了33.65%和30.28%(P<0.05)，与试验2组差异不显著(P>0.05)。试验1、2组雏鸡法氏囊组织GSH-Px活性和对照组差异不显著(P>0.05)。试验2、3组雏鸡法氏囊组织SOD活性分别比对照组提高了38.67%、49.93%(P<0.05)，但试验2、3组雏鸡法氏囊组织SOD活性之间差异不显著(P>0.05)。试验2、3组雏鸡法氏囊组织MDA含量分别比对照组降低了37.21%、33.68%(P<0.05)，分别比试验1组降低了30.68%、26.79%(P<0.05)，但试验2、3组雏鸡法氏囊组织MDA含量之间差异不显著(P>0.05)。说明在蛋内注射20、30 mg黄芪多糖能显著提高经高温孵化的0日龄雏鸡法氏囊组织抗氧化性能。

表6 0日龄雏鸡法氏囊组织抗氧化指标

如表7所示，试验3组7日龄雏鸡法氏囊组织GSH-Px活性分别比对照组和试验1组提高了24.46%和19.61%(P<0.05)；SOD的活性分别比对照组和试验1组高出37.52%和31.50%(P<0.05)，与试验2组差异不显著(P>0.05)。试验1、2组雏鸡法氏囊组织GSH-Px和SOD活性与对照组均差异不显著(P>0.05)。试验2、3组雏鸡法氏囊组织MDA含量分别比对照组降低了16.02%、23.12%(P<0.05)，但试验2、3组雏鸡法氏囊组织MDA含量之间差异不显著(P>0.05)。说明在蛋内注射30 mg黄芪多糖能够显著提高经高温孵化的7日龄雏鸡法氏囊抗氧化性能。

表7 7日龄雏鸡法氏囊组织抗氧化指标

3 结论与讨论

3.1 蛋内注射黄芪多糖对高温孵化雏鸡的鸡胚和法氏囊发育的影响

温度是种蛋孵化过程中的重要条件，会直接影响鸡胚的发育。高温孵化会抑制鸡胚的发育，增加胚胎死亡率，降低雏鸡体质量[14-15]。黄芪多糖可以促进鸡胚发育，增加雏鸡质量，提高出雏率[11]。本研究通过在种蛋气室内注射10、20、30 mg的黄芪多糖，使出雏率分别提高了4.16%、4.16%、8.34%，使健雏率分别提高了5.14%、7.05%、9.89%。因此，推测在蛋内注射黄芪多糖能够改善高温条件下种蛋的孵化，且30 mg黄芪多糖效果最好。

法氏囊质量和法氏囊指数是判断法氏囊发育状况的重要指标。高温孵化会抑制鸡胚的法氏囊发育，降低法氏囊质量[16]。本研究发现，在种蛋内分别注射10、20 mg黄芪多糖总体上对高温孵化出的雏鸡体质量和法氏囊质量没有影响，注射30 mg黄芪多糖则能够显著提高高温孵化出的0日龄和7日龄雏鸡的体质量和法氏囊质量，对法氏囊指数没有影响，与前人研究的黄芪多糖能够提高鸡胚法氏囊质量的结果一致[17,11]，同时也与本研究中，在蛋内注射黄芪多糖能够提高高温孵化的种蛋出雏率和健雏率的结果相对应。因此推测，在蛋内注射30 mg黄芪多糖能够缓解高温孵化对鸡胚和法氏囊发育的抑制作用，这种效应能够延续到雏鸡7日龄。

3.2 蛋内注射黄芪对高温孵化时雏鸡法氏囊抗氧化能力的影响

SOD和GSH-Px是动物体内2种重要的抗氧化酶，能够将细胞新陈代谢产生的超氧自由基转化成无毒副作用的H2O，保护细胞的结构和功能的完整性。种蛋在孵化过程中温度升高，鸡胚心肌的抗氧化酶活性下降[18]。黄芪多糖是重要的抗氧化物质[19-20]。饲料中添加黄芪多糖可以促进雏鸡法氏囊和胸腺的发育，提高其血液中抗氧化酶的活性[21]。本研究发现，在种蛋内注射10 mg黄芪多糖能够显著提高0日龄雏鸡血清中SOD活性，并降低MDA含量，但对0日龄雏鸡法氏囊抗氧化酶活性没有影响。在种蛋内注射20、30 mg黄芪多糖能够显著增加高温孵化时0日龄雏鸡血清和法氏囊中抗氧化酶活性，并降低MDA含量，且30 mg效果比20 mg效果好，与先前研究的黄芪多糖浸泡种蛋能够显著增加0日龄雏鸡血清和法氏囊组织GSH-Px和SOD活性，降低MDA含量结果一致[10-11]。

本研究结果还显示，在蛋内注射10 mg黄芪多糖对7日龄雏鸡血清和法氏囊组织中的抗氧化酶活性没有影响，在蛋内注射20 mg黄芪多糖能够显著提高7日龄雏鸡血清抗氧化酶活性，降低MDA含量，对法氏囊抗氧化酶活性没有影响。在蛋内注射30 mg黄芪多糖显著提高7日龄雏鸡血清和法氏囊抗氧化酶活性，降低MDA含量，与魏炳栋等[22]报道的黄芪多糖能够提高肉仔鸡生长前期的抗氧化能力一致，同时也与本研究中，在蛋内注射30 mg黄芪多糖提高了7日龄雏鸡体质量和法氏囊质量相对应。因此推测，在蛋内注射30 mg黄芪多糖能够提高高温孵化的雏鸡血液和法氏囊组织抗氧化性能，这种效应能持续到雏鸡7日龄。

综上所述，在蛋内注射黄芪多糖促进鸡胚的发育，减缓了由高温孵化引起的出雏率和健雏率下降，降低了弱雏率。在蛋内注射30 mg黄芪多糖能够提高0日龄雏鸡体质量和法氏囊质量，缓解了高温孵化对鸡胚发育和法氏囊发育的抑制作用，且这种效应持续到雏鸡7日龄。在蛋内注射20、30 mg黄芪多糖能够缓解高温孵化对0日龄雏鸡血清和法氏囊抗氧化能力的抑制作用，但30 mg黄芪多糖的效果优于20 mg，且注射30 mg黄芪多糖的效应能够持续到雏鸡7日龄。