2种培养基对乳粉中沙门氏菌的定量检测比较

程潇 刘娟娟 贾贞 徐晨 安虹

摘要 为了掌握食品中沙门氏菌的定量检测方法，对比不同种类培养基对食品中沙门氏菌定量检验结果的差异，参考国家权威部门提供的乳粉中沙门氏菌标准物质定值实施方案及GB 4789.4-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》的要求对3份沙门氏菌标准物质样品进行沙门氏菌的定量检测。结果显示，使用XLD培养基和沙门显色培养基，在没有其他干扰菌的情况下，均可对沙门氏菌进行有效的计数。

关键词 沙门氏菌;定量检测;XLD培养基;沙门显色培养基

中图分类号：TS252.7 文献标识码：A 文章编号：2095-3305（2020）02-121-03

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2020.02.048

Comparison of Quantitative Detection of Salmo-nella in Milk Powder by using Two Kinds of Medium

CHENG Xiao  et al（Anhui Provincial Institute for Food and Drug Control，China National Center for Quality Supervision and Test of Agricultural-Avocation Processed Food，Hefei，Anhui 230051）

Abstract In order to master the quantitative detection method of Salmonella in food and compare the results of different kinds of culture media for the quantitative detection of Salmonella in food，refer to the implementation plan of the value determination of Salmonella in milk powder provided by the national authority and GB 4789.4-2016 National Food Safety Standard-Food Microbiological Examination：Salmonella，three samples of reference materials of Salmonella were detected quantitatively. The results showed that using XLD medium and Salmonella chromogenic medium could count Salmonella effectively without other interfering bacteria.

Key words   Salmonella;Quantitative detection; XLD medium; Salmonella chromogenic medium

沙門氏菌是一种无芽孢、无荚膜、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性菌，易存在于家禽、肉及蛋等食品中，是食品中分布比较广、危害程度严重的食源性致病微生物，可以引起恶心、呕吐、腹痛、腹泻及发热等疾病[1]。由于沙门氏菌具有种类繁多、对外界抵抗力较强、对营养要求不高等特点，导致沙门氏菌成为引起食物中毒的主要致病菌，所以检验食品中的沙门氏菌对保障人民身体健康具有重要意义。

沙门氏菌的检测有多种方法，目前我国主要采用国家标准GB4789.4《食品安全国家标准 食品微生物检验 沙门氏菌检验》对食品中的沙门氏菌进行检验，此外还颁布有行业标准、地方标准和团体标准等其他检测标准，基本上这些方法都是对沙门氏菌进行定性检测。笔者主要通过对3份沙门氏菌标准物质样品进行定量检测并对结果进行分析，为食品中沙门氏菌的定量分析提供一定依据。

1 材料与方法

1.1 样品来源

沙门氏菌的定量检测样品为国家权威部门提供的3份标准物质样品。

1.2 试剂与仪器

木糖耐氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD）、磷酸盐缓冲液（PBS）、营养琼脂、沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒均使用北京陆桥技术股份有限公司产品;沙门显色培养基使用法国科玛嘉产品，沙门氏菌属诊断O及H血清使用宁波天润生物药业有限公司产品，所有试剂均为笔者所在实验室合格供应方提供并在有效期内。

移液器 Eppendorf research plus（德国Eppendorf公司）、MSC1.8型生物安全柜（赛默飞世尔科技有限公司）、 恒温培养箱（德国宾得）、5050型全自动高压蒸汽灭菌锅（以色列腾氏公司）。

1.3 检测方法

检验方法主要依据沙门氏菌标准物质定值实施方案以及GB 4789.4-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》的要求进行。

2 结果与分析

2.1 使用XLD培养基进行接种检验结果

分别将1号、2号、3号3份样品按照实施方案的要求从-20℃冰箱中取出，在22℃的环境下平衡30 min，接着在生物安全柜中用4.5 ml无菌蒸馏水进行复溶并用漩涡振荡器充分振荡后制备成1∶10样品匀液，再用移液器吸取1∶10样品匀液1 ml，缓慢注入盛有9 ml无菌稀释液中制成1∶100样品匀液，继续使用此种方法制成1∶1 000稀释梯度样品匀液。每个稀释梯度分别吸取1 ml样品匀液以0.3、0.3、0.4 ml接种量加入3块XLD平板后，用一次性无菌L型涂布棒进行涂布，每份样品各接种3次重复，同时取1 ml稀释液以0.3、0.3、0.4 ml接种量加入3块XLD平板做空白对照。接种后分别按要求将平板倒置于36℃培养箱中培养24 h后观察结果（图1为部分结果）。从图1可以看出，使用XLD平板进行涂布可以对沙门氏菌进行有效的分离。

2.2 使用XLD培养基进行接种的计数结果分析

选择在同一稀释度3块平板，并将所有典型菌落进行计数，之后随机挑选10个特征菌落，进行生化试验和血清学鉴定。结果确认后，对沙门氏菌菌落数进行计数（表1～3）。

结果表明，3份样品在1∶10和1∶100 2种稀释度的情况下存在明显的梯度差异，并且3次平行结果表现出很好的重复性，但是在1∶1 000的稀释度下，由于稀释度太低，导致结果出现较大的偏差。

2.3 使用沙门显色培养基进行接种检验结果

使用“2.1”中制备的1∶100、1∶1 000 2种样品匀液（由于样品量原因1∶10样品匀液未进行沙门显色培养基的接种），分别吸取1 ml样品匀液以0.3、0.3、0.4 ml接种量加入3块沙门显色平板后，用一次性无菌L型涂布棒进行涂布，每份样品各接种3次重复，同时取1 ml稀释液以0.3、0.3、0.4 ml接种量加入3块沙门显色平板做空白对照。接种后分别按要求将平板倒置于36℃培养箱中培养24 h后观察结果（图2为部分结果）。从图2可以看出，使用沙门显色平板进行涂布可以对沙门氏菌进行有效的分离，且由于沙门氏菌在沙门显色培养基上为淡紫色菌落，而其他非沙门氏菌在沙门显色培养基上为蓝色或无色菌落，所以使用沙门显色培养基可以得到更加直观的结果。

2.4 使用沙门显色培养基进行接种的计数结果分析

选择在同一稀释度3块平板，并将所有典型菌落进行计数，之后随机挑选10个特征菌落，进行生化试验和血清学鉴定。结果确认后，对沙门氏菌菌落数进行计数（表4～6）。

结果表明，3份样品在1∶10和1∶100 2种稀释度的情况下存在明显的梯度差异，且3次平行结果重复性好，同样在1∶1 000的稀释度下，由于稀释度太低，导致结果出现一定的偏差。

3 讨论

目前，由于国标中未见对食品中沙门氏菌的定量检测有要求，所以现行的食品中沙门氏菌的檢测方法都是基于定性的检测方法，这样在一定程度上就没有办法充分了解食品受到沙门氏菌污染的程度状况。

试验结果表明，此次标准样品中沙门氏菌的浓度在103～104范围内，使用XLD平板和沙门显色平板的检测结果基本一致。由于试验中使用的是疏水性的一次性涂布棒，且每毫升菌液的涂布只使用1根涂布棒，所以因涂布棒造成的损失比较小，结果更加接近理论值。此外，此次提供的样本中基本没有其他杂菌的干扰，所以在结果的判定上比较直观，然而在日常的检测过程中，由于样品中可能存在着各种类型的杂菌，这时如果采用沙门显色平板进行涂布分离，可以通过颜色的区别直接观察结果，相对于使用XLD平板进行计数可能会更加简单，但是有研究表明部分假单胞菌在沙门显色培养基上存在和沙门氏菌同样的表现形态[2]，所以在进行沙门氏菌定量检测时最好选择多种方法，这样可以最大程度地避免漏检的可能。此外，王晓英等[3]研究表明在食物中杂菌污染严重或沙门菌水平较低的情况下，平板法不能准确进行沙门菌计数，选择MPN方法进行定量检测更加准确，所以在检测过程中需要对不同来源的食品提前预估被污染的情况，从而选择合适的方法以及合理的稀释度对沙门氏菌进行定量检测分析。

该次试验表明，在没有其他干扰菌的情况下，无论使用XLD培养基还是沙门显色培养基，都可以对沙门氏菌进行有效的分离计数。

参考文献

[1] B-UMLER A J，HARGIS B M，TSOLIS R M. Tracing the origins of Salmonella out-breaks[J]，Science，2000（287）：50.

[2] 王萍，董贵军，乔勇升，等.显色培养基上沙门氏菌及干扰菌的分离鉴定[J].食品研究与开发，2017，38（12）：158-161.

[3] 王晓英，余东敏，刘秀梅.涂布平板计数法与MPN法定量检测禽肉和蛋中沙门菌的比较[J].中国食品卫生杂志，2005，17（2）：106-108.

责任编辑：郑丹丹