乌腺金丝桃醇溶物体外活性研究

杨 洋，常桂英，张成林，刘乘宁，党晓宇，刘梦琼，张 雷

（吉林农业科技学院生物工程学院，吉林 吉林132101）

乌腺金丝桃（Hypericum attenuatum），又名野金丝桃，属于藤黄科金丝桃属植物，是近年来关注较多的中草药之一。研究表明，乌腺金丝桃植株中含有黄酮类化合物、金丝桃素和挥发油等成分，对心律失常、心肌缺血、心衰有较好的疗效，并且能够增强人体免疫力，同时还具有抗抑郁、抗肿瘤及抗病毒等功效[1]。目前，对乌腺金丝桃的研究仍处于初级阶段，如活性成分的提取、药理学方向的研究等，故对乌腺金丝桃其他方面的报道较少。试验通过对乌腺金丝桃醇溶物体外活性的研究，试图寻找纯天然、无毒的活性物质，为乌腺金丝桃在医药、保健食品、美白化妆品等领域的开发利用提供理论基础[2]，也为乌腺金丝桃综合开发提供方向。

1 材料与方法

1.1 供试材料

乌腺金丝桃，采自吉林农业科技学院乌腺金丝桃种植基地。供试大肠杆菌（吉林农业科技学院微生物实验室）。试验主要试剂有邻苯三酚、Tris-HCL、磷酸缓冲液等生化试剂（吉林农业科技学院生物化学实验室），酪氨酸酶、邻苯二酚（购自上海源叶生物公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 乌腺金丝桃醇溶物制备 将乌腺金丝桃根、茎、叶、花干燥，粉粹，取粉末各50 g，分别用650 m L 75%乙醇浸提6 h，过滤；向滤渣中再加入650 m L 75%乙醇重复提取1 次；合并滤液，于50℃下减压浓缩至1/4 体积；分别取浓缩液100、80、60、40、20 m L 于100 m L容量瓶中定容，配制4个部位不同浓度的醇溶物[3]。1.2.2 乌腺金丝桃醇溶物的抑菌活性研究 将活化的大肠杆菌接种到培养基上，然后将不同样品液浸泡的滤纸片（6 mm）分别贴在平板上，于37℃培养箱中培养24 h，记录抑菌圈直径[4]。

1.2.3 乌腺金丝桃醇溶物的抗氧化活性研究——邻苯三酚自氧化法 在试管中加入4.5 m L 50 mmoL/L Tris-HCL 溶液（pH 值8.2），再分别添加0.1 m L 醇溶物试样液，然后在25℃水浴中预热20 m in；加入25℃预热的2.5 mmol/L 邻苯三酚溶液20 L，并开始计时，迅速转入比色皿中，在320 nm 测其吸光度（Ai），记录4 min 时的吸光值。以蒸馏水为空白（吸光值A0）[5-6]。清除率（%）=（A0－Ai）/A0×100

1.2.4 乌腺金丝桃醇溶物对酪氨酸酶抑制作用的研究 取4 支试管按表1 添加底物、乌腺金丝桃醇溶物和磷酸缓冲液，于30℃水浴中恒温5 m in 后，再加入0.035 g/m L 酪氨酸酶0.1 m L，反应15 m in，移入比色皿中，在410 nm 处分别测定吸光度A1、A2、A3、A4[7-8]。抑制率（%）=[1－（A3－A4）/（A1－A2）]×100

表1 乌腺金丝桃醇溶物对酪氨酸酶抑制作用的反应（物mL加）液量

2 结果与分析

2.1 乌腺金丝桃醇溶物对大肠杆菌的抑制作用

从图1 中可以看出，较低浓度（如20%）时，花、茎、根的醇溶物对大肠杆菌无抑菌活性，叶的醇溶物抑菌圈直径为7.35 mm；随着浓度的增加，各部位醇溶物对大肠杆菌的抑菌活性呈增强趋势；当醇溶物浓度为40%时，乌腺金丝桃各部位对大肠杆菌的抑制作用由强到弱依次为叶＞花＞茎＞根，其中根的醇溶物无抑菌活性；当在醇溶物浓度为60%时，各部位对大肠杆菌的抑制作用由强到弱依次为花＞叶＞根＞茎；当醇溶物浓度为80%时，各部位对大肠杆菌的抑制作用由强到弱依次为根＞花＞叶＞茎；当醇溶物浓度为100%时，各部位的抑菌活性均达最大值，其中花、叶、根的抑菌效果相近，抑菌圈达8.80 mm 以上，以叶的醇溶物抑菌活性最强，抑菌圈直径达8.93 mm，而茎的抑菌效果明显较低，抑菌圈仅7.90 mm。

2.2 乌腺金丝桃醇溶物抗氧化活性

由图2 可知，不同部位的醇溶物均具备一定的抗氧化活性，且随着醇溶物浓度的增加，其抗氧化活性逐渐增强；其中，在醇溶物浓度相同的情况下，叶的抗氧化活性显著高于其他部位，清除率均在50%以上；当醇溶物浓度为20%和40%时，各部位的抗氧化活性由强到弱均为叶＞花＞茎＞根；当醇溶物浓度为60%时，各部位的抗氧化活性由强到弱依次为叶＞花＞根＞茎；当醇溶物浓度为80%时，各部位的抗氧化活性由强到弱均为叶＞茎＞花＞根；当醇溶物浓度为100%时，各部位的抗氧化活性由强到弱均为叶＞花＞茎＞根。

图2 乌腺金丝桃醇溶物的抗氧化活性

2.3 乌腺金丝桃醇溶物对酪氨酸酶的抑制作用

从图3 中可以看出，除了20%花的醇溶物以外，其他3个部位的各浓度醇溶物以及花的其他浓度醇溶物对酪氨酸酶均表现出一定的抑制作用，且随着醇溶物浓度的增加，抑制作用逐渐增强；当醇溶物浓度为20%时，各部位对酪氨酸酶的抑制作用由强到弱依次为叶＞根＞茎＞花；当醇溶物浓度为40%时，各部位对酪氨酸酶的抑制作用由强到弱依次为叶＞花＞茎＞根；当醇溶物浓度≥60%，各部位对酪氨酸酶的抑制作用由强到弱均表现为叶＞花＞根＞茎；其中，在浓度相同的情况下，叶的醇溶物对酪氨酸酶的抑制作用显著高于其他部位，抑制率在6.08%～48.78%范围内。

图3 乌腺金丝桃醇溶物对酪氨酸酶抑制作用

3 结论与讨论

试验结果表明，药用植物乌腺金丝桃的根、茎、叶、花4个部位对大肠杆菌有一定的抑制作用，同时还具有较强的抗氧化活性，对酪氨酸酶也有相当的抑制作用；以40%的醇溶物浓度为例，各部位对大肠杆菌的抑菌活性由强到弱依次为叶＞花＞茎＞根，抗氧化活性由强到弱均为叶＞花＞茎＞根，对酪氨酸酶的抑制作用由强到弱依次为叶＞花＞茎＞根；且随着醇溶物浓度的升高，各种作用逐渐加强；同时，叶片中的作用效果明显高于其他部位，当浓度达100%时，叶醇溶物的抑菌圈直径为8.93 mm，对邻苯三酚的清除率为94.1%；对酪氨酸酶的抑制率为48.78%。这说明在4个部位中，叶片中的醇溶物比其他部位的具有更高的生物活性。由此可以认为，乌腺金丝桃的叶可作为新型安全天然活性物质开发的主要原料，是一种新的药用植物资源。乌腺金丝桃提取物可以作为天然的美白活性物质、具有抑菌活性的天然防腐剂以及具有抗氧化活性的功能，但该研究未涉及乌腺金丝桃醇溶物的成分分析，故尚不清楚其醇溶物的活性物质成分及作用机理，需进一步研究探索。

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