小叶矮生型广玉兰嫩茎段离体培养方法

王水燕 陆锦明 朱天华 徐劲松 朱逸敏 （上海市闵行区苗圃 201109）

汤桂钧 （上海市闵行区农业技术服务中心 201101） 殷丽青 （上海市农业科学院 201403）

小叶矮生型广玉兰嫩茎段离体培养方法

王水燕 陆锦明 朱天华 徐劲松 朱逸敏 （上海市闵行区苗圃 201109）

汤桂钧 （上海市闵行区农业技术服务中心 201101） 殷丽青 （上海市农业科学院 201403）

小叶矮生型广玉兰是近年来上海市从国外引进的一种集观赏、绿化、环保与药用为一体的广玉兰新品种。为解决该品种常规繁殖难且慢的问题，研究探索了用组织培养中的“嫩茎段离体培养方法”来培育试管苗，且着重介绍了广玉兰嫩茎段诱导发生、继代增殖、生根培养及试管苗炼苗驯化的全过程。

小叶矮生型广玉兰；嫩茎段；诱导发生；继代增殖；生根；炼苗驯化

广玉兰是一种集观赏、绿化、环保和药用为一体的多用途植物品种，属我国南方地区（包括长江流域）广泛种植的主要乔木类优良品种。而小叶矮生型广玉兰是近年来上海市从国外引进的新品种，属广玉兰中的变种与名贵品种，特别适合作盆栽或在住宅小区、绿地、单位、公园等栽植。该品种叶片小、树体矮生紧凑，树姿优美，具有与常规广玉兰相同的生物学特性与适应性，是难得的宽叶型、常绿型小型乔木名贵品种。该品种引入上海已有3年多，表现优异，但其靠扦插繁殖速度慢且生根存活率低，一般只有50%左右，制约了其在盆栽观赏及绿化中的应用。近年来，笔者尝试以嫩茎段为外植体，应用组织培养技术快速繁殖生产小叶矮生型广玉兰种苗，并取得成功。现着重介绍了小叶矮生型广玉兰嫩茎段诱导发生、继代增殖、生根培养及试管苗炼苗驯化的全过程。

1 诱导发生培养

1.1 外植体材料选择

外植体诱导发生培养采用“嫩茎段离体培养法”，由于木本植物枝条每张叶片的叶腋中都有腋芽，节间有丰富的分生组织，应用此法可通过刺激腋芽萌发新芽从而再生植株，获得无菌系，进而获得试管苗。外植体材料采用二、三年生幼树的中上部健壮枝条上当年新抽生的半木质化嫩枝，其采集标准为枝条柔软尚有弹性、叶片展开后展现淡绿色。将半木质化嫩枝自基部剪下，剪去叶片，剪成长10 cm左右的茎段，用洗洁精清洗2次后用纱布包扎，并在自来水龙头下冲洗3 h后沥干待用。

1.2 嫩茎段消毒杀菌

消毒在接种室超净工作台上进行，先用75%酒精消毒1 min，再用新洁尔敏50倍液消毒15 min，最后用0.1%氯化汞溶液加5～6滴吐温80消毒10 min（防褐化及辅助杀菌），最后用无菌水冲洗3次后沥干待用。

1.3 接种及无菌系诱导发生培养

将消毒后的嫩枝切成长1 cm左右的茎段（剔除嫩枝顶端幼嫩部分及基部老熟部分），每段带1～2个茎节，接种至诱导培养基上，每瓶接种1个。诱导发生培养基为1/2MS+ZT 3 mg+NAA 0.2 mg/L。培养基中加入0.7%PVP（聚乙烯聚吡氯烷酮）进行脱醛基处理，以防材料在初培养时褐化死亡。培养室温度为22～24 ℃，光照强度为3 000 Lx左右（但初始培养前1周不加光为暗培养）,光照时间为12 h/d。培养15 d左右后，嫩茎段腋芽开始萌发，平均发生率最高达92%。注意，外植体成熟度的不同对萌芽有直接影响，在相同的消毒方法、培养基及培养环境下，太过幼嫩柔软的枝条和基本呈木质化的成熟枝条诱导发生率均较低，一般在30%以下甚至不萌芽，大多褐化死亡。

2 继代增殖培养

成功诱导发生后，进入继代增殖培养阶段，以不断扩大繁殖系数。继代增殖培养基配方为1/2 MS+BA 1 mg+NAA 0.1 mg/L（配方每1 L中加蔗糖30g、琼脂粉6g，pH5.8）。培养室温度为23～24 ℃（24 h恒温），光照强度为3 000 Lx，光照时间为12 h/d。经14 d培养后，叶色深绿，叶片无黄化、无“玻璃苗”现象，平均增殖率在3～3.5。值得注意的是，在继代增殖培养中，培养室的温度控制是一个重要因素，适宜温度在23 ℃左右，温度太低，瓶苗生长缓慢，增殖率下降；温度过高，会造成叶片黄化，生长势迅速衰退。

3 生根培养

在继代增殖培养至一定数量后，切取生长健壮的枝条转到生根培养基上进行生根培养(须切成单株)，长2 cm左右，笔直浅插入培养基上，深0.5 cm左右。生根培养基配方为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L（配方每1 L中加蔗糖20g、琼脂粉6g，pH5.8）。培养室光照强度为3 000 Lx，温度为22℃(24 h恒温)，光照时间为12 h/d。经过7 d左右培养，枝条基部开始膨大，愈伤组织长出，10 d后长出根原基，生根20 d左右幼根完全长成，一般有3～5条，呈鸡爪状，长1 cm左右。

将瓶苗移出培养室至室内常温下炼苗24 h，以适应室外气候环境，再用镊子轻取出幼苗，置清水中漂净根系所沾琼脂，以防移入苗床炼苗培养时滋生病菌烂根死苗。至此，试管苗成功育成。

4 试管苗炼苗驯化

4.1 炼苗基质选择与试管苗移栽

生根后，试管苗移入塑料温室大棚进行炼苗驯化。育苗基质采用泥炭+椰糠+珍珠岩（比例为1∶1∶1），平铺于苗床上，厚度8～10 cm。将试管苗浅栽入基质中，栽后浇足水，并用塑料薄膜小环棚覆盖，以防失水萎焉，如遇晴天，还需覆盖75%遮光率的黑色遮阳网。掌握好炼苗季节炼苗是成活率高低的关键因素，在2～5月及9～12月炼苗，成活率均高达95%以上，而在夏秋高温季节炼苗成活率极低，故炼苗时需避开6～8月的盛夏高温季节。炼苗45～60 d时，将幼苗移栽至穴盘（72孔）或营养钵中，以培育成穴盘苗或营养袋苗，其基质为泥炭+珍珠岩（比例为3∶1），再经2个月左右的养护就可移栽至大田或上盆，成活率可达100%。

4.2 栽后管理措施

栽后7 d内，每天叶面喷水3～5次，7 d后揭开塑料薄膜炼苗，每天叶面喷水2～3次，切忌向基质内浇水，以防水分过多而烂苗。30 d后，用0.1%硝酸铵+0.1%磷酸二氢钾+0.1%硫酸镁的混合液根部追肥或叶面喷洒，每月喷洒1～2次，以提高试管苗成活率，促其健壮生长。

2016-11-08