用速测仪测定蔬菜农药残留的操作程序及注意事项

余 意 缪松涛 覃 朗 孙 军 （江苏省南京市浦口区农产品检验检测中心 211800）

用速测仪测定蔬菜农药残留的操作程序及注意事项

余 意 缪松涛 覃 朗 孙 军 （江苏省南京市浦口区农产品检验检测中心 211800）

农残速测仪操作简单，检测速度快、成本低，适合现场检测及大批样品的筛选检测。为促进农残速测仪在蔬菜上的推广应用，介绍了使用农残速测仪检测蔬菜中农药残留的检测原理、操作程序及注意事项，以供参考。

农残速测仪；蔬菜；检测原理；操作程序；注意事项

1 农残速测仪的检测原理

农残速测仪采用酶抑制法，在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性，其抑制率与农药浓度呈正相关。在正常情况下，酶催化代谢产物水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在410 nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率的大小可判断样品中是否存在高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药。但该方法只能检测出农残超标与否，不能准确定量地检测出某种农药超标。

2 农残速测仪的操作程序

2.1 仪器准备工作

接通电源，仪器自检，自检结束后待机预热10 min，仪器工作稳定后进行测量。玻璃器皿晾干后待用。5.0 mL、10 mL和200 uL量程移液器调好量程待用。

2.2 试剂准备

2.2.1 缓冲液配置

2.2.2 酶液配置

用5.0 mL移液器吸3.1 mL缓冲液注入底物干粉瓶中，盖上盖摇匀，置于0-5 ℃环境中备用。

2.2.3 显色剂配置

用10 mL移液器分两次共吸10.5 mL缓冲液注入显色剂瓶中，盖上盖摇匀，置于0-5 ℃环境中备用。

2.2.4 底 物

用5.0 mL移液器吸3.1 mL蒸馏水注入底物干粉瓶中，盖上盖摇匀，置于0-5 ℃环境中备用。2.3 样品处理制备

取干净的蔬菜，用天平准确称取2 g，叶菜取叶尖部分，果菜横截削下一片，叶片、瓜肉等剪成1 cm2，置于50 mL小烧杯内；用10 mL量程移液器吸10 mL缓冲液注入小烧杯中，振荡提取1-2 min，倒出提取液，静置3-5 min，取上层清液作为样液。若样液浑浊或色素重，可用中速滤纸过滤到三角瓶中再吸取。

2.4 对照测定方法

向比色皿中加3 mL缓冲液，再用专用的移液枪向比色皿中分别加入100μL酶液和100μL显色剂，摇匀后于37 ℃水浴锅放置15 min以上（每批样品的控制时间应一致），再向其中加入100μL底物摇匀，然后迅速放入仪器通道，盖上暗板，点击对照检测键。待空白对照值的吸光度变化值在0.3以上，才可测定样品，否则要重新做空白测定。测量结束后仪器自动保存当前的对照值，下一次测量样品时就可以不用继续进行对照测量。

图15中不同z处投影宽度的中点位置，代表了刀具的轴线位置。因此，通过比较加工状态下刀具轴线位置偏离空载条件下的程度，便可以推测刀具所受径向力的大小。图16为直径1mm双刃平头铣刀在不同径向载荷下挠度位移的实验结果。只要事先通过这样的标定，便可以根据实际加工过程中刀具的投影图像推测出径向切削力大小。

2.5 样品测定方法

用5.0 mL量程移液器移取样液3 mL放入比色皿中，其他操作与对照测试相同，将比色皿迅速放入通道后，点击样品检测键。测试结束后，显示当前测量的样品抑制率结果和吸光度变化值。

2.6 检测结果的判定

测定结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。根据GB/ T5009.199-2003判定要求，当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中存在高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药，样品为阳性结果。阳性结果的样品需重复检测2次以上。对于阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。

3 农残速测仪检测时的注意事项

3.1 关于器材和试剂

（1）所有玻璃器皿，均要晾干后待用。（2）移液枪要定期校正调试、科学使用。枪嘴要先用清水冲洗再用纯净水冲洗，在电子天平上进行吸液量校正。移液器使用时，必须遵循器具专用原则，即吸取酶、显色剂、底物的移液器应贴上专用标签，移取试剂时一一对应使用。（3）试剂从冰箱取出，先恢复至室温，摇匀后再使用。检测室温度要控制在20-25 ℃，否则会影响酶的活性。试剂使用时，必须遵循只出不进原则，即从酶、显色剂、底物试剂瓶中移取出的试剂，不得返回原试剂瓶中，以免污染原试剂。

3.2 关于样液制备

在样液制备过程中，浸提时间要充分，否则对结果影响较大。样液加入酶试剂和显色剂的混合液水浴锅静置反应时间应在15 min以上，反应时间不同，结果不同。酶、显色剂和底物不能漏加或多加，否则对结果影响较大。

3.3 关于检测结果

检测结果抑制率A%为“——”时，表示测量结果无效，可能由以下原因造成：（1）试剂从冰箱取出后，未恢复到室温即进行对照测试。（2）对照测试时间与样品测试时间相隔太久，导致光照与样品测试温度等外界条件相差较大。（3）被测样品色素干扰较严重。（4）反应试剂取用量不准确。

3.4 关于某些特殊样品

在韭菜、芹菜、生姜、葱、蒜、萝卜、香菜等蔬菜中含有破坏酶活性的物质，检测此类蔬菜农残时，容易产生假阳性，因此，在处理这类样品时，宜采取整株（体）浸提的方法，避免次生物质干扰。

2015-08-28