利用Design-Expert响应面法优化南方稻谷防霉剂配方及验证

张典典 高家东 戴彰言 张文虎 张友胜 刘军

摘要：【目的】篩选适合南方稻谷贮藏要求的防霉剂配方，为南方稻谷贮藏提供技术支持。【方法】以当年收储、入库贮藏3～6个月的籼稻稻谷（新粮）和入库贮藏12～24个月的籼稻稻谷（陈粮）为试验材料，分析稻谷带菌总量、主要污染菌种类以及藤茶提取物、茶叶提取物、桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油等5种植物提取物对稻谷中黄曲霉的抑制效果;以黄曲霉的抑菌圈直径为考察指标，通过Design-Expert响应面法进行南方稻谷复合防霉剂最佳配方设计。【结果】新粮稻谷样品带菌量为1.1×103～9.2×103 CFU/g，陈粮样品带菌量为8.1×103～2.2×105 CFU/g，陈粮样品的带菌总量明显高于新粮样品;南方稻谷的主要污染菌属以曲霉属和青霉属为主，其次是毛霉属和镰刀菌属;5种植物提取物对黄曲霉的抑菌圈直径在8.4～11.1 mm，最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）分别为0.0125%～0.0500%和0.0500%～0.1000%，5种植物提取物均可作为单独的防霉剂使用，以藤茶提取物的抑制效果最好。复合防霉剂预测模拟方程为：Y=10.34A+10.06B+7.18C+8126.84D-10096.90E+11.97AB+12.18AC-8236.89AD+10212.40AE+10.74BC-8245.77BD+10084.50BE-8149.38CD+10357.06CE+6202.14DE（其中Y代表抑菌圈直径，A、B、C、D和E分别代表藤茶提取物、茶叶提取物、桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油在复合防霉剂中的比例），拟合后得到的复合防霉剂最优配方比例为：55.00%藤茶提取物、22.12%茶叶提取物、22.56%桑叶提取物、0.10%陈皮精油和0.21%丁香精油;复合防霉剂的防霉效果明显优于单一防霉剂，25个组合对黄曲霉的抑菌圈直径在11.30～13.90 mm;稻谷表面喷洒最优复合防霉剂后的安全贮藏时间可延长60～120 d。【结论】由藤茶提取物、茶叶提取物、桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油等5种植物提取物组成的复合型稻谷防霉剂可抑制稻谷中微生物的繁殖，延长稻谷安全贮藏时间。

关键词： 响应面法;南方稻谷;防霉剂;配方优化;验证

中图分类号： S511.093                           文献标志码： A 文章编号：2095-1191（2021）10-2690-08

Abstract：【Objective】The mould inhibitor formula for southern rice during storage was selected so as to provide technical support for the rice storage. 【Method】 The main rice mold contaminants were determined from two indica rice varieties stored for 3-6 months and 12-24 months. The total mold counts and the mildew proof effects of five plant extracts， including leaf extracts from ampelopsis， tea，and mulberry， essential oils of orange peel and clove， on Aspergillus flavus growth in stored rice were analyzed. Finally， inhibition zone diameters achieved against A. flavus was used as an index and combined with the Design Expert response surface method to obtain an optimized compound formulation of the plant extracts. 【Result】 The microbial presence in grain stored for 3-6 months was 1.1×103-9.2×103 CFU/g，while that in rice stored for 12-24 months was significantly greater at 8.1×103-2.2×105 CFU/g. Aspergillus and Penicillium were the main contaminating molds in southern rice，followed by Mucor and Fusarium. The inhibition zone diameter of A. flavus is between 8.4-11.1 mm，and the minimum inhibitory（%） and bactericidal concentrations were between 0.0125%-0.0500% and 0.0500%-0.1000%， respectively. All five plant extracts were effective as independent fungicides， the most effective of which was the leaf extract of ampelopsis . The prediction and simulation equation of mold inhibitor is as follows：Y=10.34A+10.06B+7.18C+8126.84D-10096.90E+11.97AB+12.18AC-8236.89AD+10212.4AE+10.74BC-8245.77BD+10084.50BE-8149.38CD+10357.06CE+6202.14DE. Where Y represents the diameter of the antifungal zone and A，B，C，D and E represent the proportions of extracts of ampelopsis， tea， mulberry， orange peel and clove in the mold inhibitor formulation respectively. The optimal proportion of leaf extracts and essential oils was as follows： 55.00% ampelopsis，22.12% tea，22.56% mulberry，0.10% orange peel and 0.21% clove. The inhibition of mildew development by the compound fungicidal formula was clearly more effective than individual extracts or essential oils and the inhibition zone diameter of 25 combinations against A. flavus was between 11.30-13.90 mm. The safe grain storage time after spraying with the best compound fungicide on rice could be extended for about 60-120 d. 【Conclusion】 The compound fungicide composed of five natural plant extracts described above could inhibit the reproduction of microorganisms and extend the safe storage period for grain.

Key words：response surface method; southern rice; mould inhibitor; formula optimization; verification

Foundation item：Protection Project of Species and Varieties Resources of Ministry of Agriculture and Rural Affairs（111821301354052029）;Guangdong Science and Technology  Project（2020B121201008）;Guangdong Modern Agricultural Induetry System Innovation and Extension Project（2021KJ101）

0 引言

【研究意义】水稻是一种重要的粮食作物，稻谷是我国主要储备粮种。2019年，我国稻谷总产量为2.10亿t，约占全国粮食总产量（6.64亿t）的31.6%，其中湖南、湖北、安徽等南方地区13个省份的稻谷总产量约1.7亿t，占全国总产量的81.0%（中华人民共和国国家统计局，2019）。南方稻谷尤其是早稻收获季节正值南方雨季，环境温度高、湿度大，稻谷水分含量高达25%～35%，在高温高湿的环境中储藏，易发生微生物特别是霉菌活动而发生霉变，若不采取必要的防霉处理，品质快速劣变，从而导致霉变稻谷中的大米无法食用（Shafiekhani et al.，2018;周显青等，2020），即使稻谷经干燥处理，也由于环境湿度大，易吸收外界水分从而导致稻谷霉变（Zhou et al.，2003）。因此，稻谷防霉处理是南方稻谷储藏及粮食安全生产中最重要的环节之一。【前人研究进展】从20世纪90年代开始，大量科研工作者围绕稻谷或大米等粮食防霉剂的筛选、配方组成和效果评价进行了系列试验。Paster等（1995）报道牛至精油和百里香精油可抑制黄曲霉、黑曲霉和赫曲霉的生长，利用其可作为粮食贮藏中的防霉剂使用。陈伟畅（2008）使用生姜水提取物、海藻糖和维生素C复合对大米进行保鲜试验，结果表明，生姜水提取物能替代传统化学防霉剂双乙酸钠。张旭等（2008）将柠檬、艾叶、肉桂、丁香、香茅和芥末等6种植物提取的精油对高水分含量（17.0%）大米进行防霉保鲜效果试验，结果表明，不同植物精油均有一定的防霉作用，但该种方法可能对大米的风味产生影响。盛强等（2010）采用食品级防霉剂双乙酸钠与山梨酸钾复配对高水分（15.6%～17.6%）稻谷进行保鲜效果试验，结果表明，防霉剂添加量越大，防霉效果越好，安全储藏期也越长。徐铠煜等（2010）研究食品级防霉剂双乙酸钠、山梨酸钾和丙酸钙两两复配后对引起粮食霉变的10种主要有害霉菌的抑制作用，结果表明，复配防霉剂相比单一防霉剂具有明显的防霉增效作用。战鑫（2020）研究发现，当蛇床子、山苍子和补骨脂3种天然植物提取物的复合比例为1∶1∶1时，复合提取物对贮藏稻谷的防霉效果突出，且三者存在较强的协同作用。【本研究切入点】上述前人研究结果均表明，复合防霉剂相比单一防霉剂具有明显的防霉增效作用，且天然植物防霉剂在安全性方面也较化学防霉剂具有明显优势。复合防霉剂研究的关键是选择合适的单一防霉剂和相应的配方组成。本研究以稻谷中主要污染菌的分离与鉴定作为切入点，在证实曲霉属为稻谷中主要污染菌属的基础上，选择近年来国内外研究较多的对微生物具有普适抑制和杀灭作用的藤茶提取物、茶叶提取物、桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油等5种植物提取物（熊皓平等，2004;沈维治等，2013;左龙亚，2018;顾莹婕等，2019;王丹等，2020）对普通存在于曲霉属中的黄曲霉进行抑制和杀灭效果比较，然后对5种植物提取物构成的配方进行优化和验证，目前鲜见相关研究报道。【拟解决的关键问题】利用Design-Expert响应面法对复合防霉剂中藤茶提取物、茶叶提取物、桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油5种成分的构成比例进行研究，通过混料设计组合中抑菌圈实测值与预期值的比较等系列试验获得最佳配方，并在实践中进行效果验证，以期为南方稻谷贮藏提供技术支持。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

稻谷样品采自广东、湖南和广西等我国南部省份的国有和私营粮库，新粮为当年收储、入库贮藏3～6个月的籼稻稻谷，陈粮为入库贮藏12～24个月的籼稻稻谷。藤茶提取物、茶叶提取物、桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油均为本实验室自制，其中藤茶提取物中总黄酮含量≥50%、茶叶提取物中总多酚含量≥50%、桑叶提取物中总黄酮含量≥20%、陈皮精油中精油含量≥90%、丁香精油中精油含量≥90%;馬铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）购自广东省微生物研究所。

主要仪器设备：LDZX-50FBS立式电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）;SW-CJ-2F双人双面净化工作台（苏州净化设备有限公司）;LRH-150B生化培养箱（广东省医疗器械厂）;MJPS-150型霉菌培养箱、HWS-400恒温恒湿箱（上海精宏实验设备有限公司）;Milipore超纯水净化系统（美国Milipore超纯水系统）。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 稻谷样品采集 采用五点取样法，将粮仓东南角、东北角、西南角、西北角及中央作为取样点，每个取样点分别在距粮堆表层0.5 m处取样，每仓15个取样点，每点取样0.25 kg。样品放置在无菌采样袋中，于4 ℃保存。试验前将同一粮仓中所取的15个样品等量混合，测定稻谷中的带菌总量，同时对稻谷中主要污染菌属进行分离和鉴定（刘慧等，2020）。

1. 2. 2 稻谷中带菌总量确定 参照GB 4789.2—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数》的方法测定稻谷中的菌落总数。

1. 2. 3 稻谷中主要污染菌属的分离与鉴定 取3份同一粮仓中的混合稻谷置于灭菌平板中，加入适量无菌水，28 ℃培养;待其长出霉菌后，挑取形态各异的菌株，划线接种到PDA培养基平板上，28 ℃培养;之后反复进行平板划线，直至得到形态相同的单菌落。获得单菌落后，采用形态特征与分子生物学技术相结合的方法进行菌属鉴定（都立辉等，2016;Rico-Munoz et al.，2019;李娜等，2020）。对试验获得稻谷中主要污染菌属中的主要菌种进行单独保留，以备后续试验使用。

1. 2. 4 植物提取物对稻谷中黄曲霉的抑制效果比较 采用抑菌圈试验，参考李娜等（2020）的方法并修改。选择1.2.3中获得的曲霉属中主要污染菌黄曲霉作为试验菌种并扩繁。之后用无菌生理盐水将其配制成106～107 CFU/mL的菌悬液，用无菌移液管向已灭菌、凝固的平板上加入0.l mL菌悬液，再用无菌三角刮铲涂布均匀，制成含一定浓度的黄曲霉平板。然后将直径为6 mm的已灭菌滤纸片分别浸于浓度为0.1%的5种植物提取物溶液（用95%乙醇溶解）中充分浸泡;将浸泡好的滤纸片于60 ℃恒温箱中烘干，无菌操作贴在制备好的含一定浓度的黄曲霉平板上，培养皿背面标记，每皿均匀分贴同种植物提取物溶液滤纸片3片，相应乙醇溶剂空白对照滤纸片2片;将贴好滤纸片的平板置于37 ℃恒温培养箱中培养18～24 h，取出测定抑菌圈直径大小。

1. 2. 5 植物提取物对稻谷中黄曲霉的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）确定 参考李娜等（2020）的方法并修改。将各植物提取物用95%乙醇配成一定浓度，与琼脂培养基按不同比例混合，制成不同浓度的植物提取物平板，再接种黄曲霉试验菌，28 ℃培养44～48 h，观察生长情况。以能抑制黄曲霉生长的植物提取物最低浓度为该植物提取物的MIC。平板继续培养24 h，观察黄曲霉生长情况，以无黄曲霉菌生长的植物提取物最高浓度为该植物提取物的MBC。

1. 2. 6 复合防霉剂配方筛选 采用D-最优混料设计进行配方筛选。利用前期研究得到的复合防霉剂中5种植物提取物的用量范围（藤茶提取物45.00%～55.00%，茶叶提取物和桑叶提取物均为20.00%～30.00%，陈皮精油和丁香精油均为0.10%～0.30%），根据Design-Expert 8.0中自带的中心响应面试验原则，组成25个模拟配方组合（运行序列），以黄曲霉抑菌圈直径为考察指标，进行抑菌圈直径的实测和预期比较;得到复合防霉剂中5种植物提取物的构成比例与抑菌圈直径之间的预测模型方程，同时通过校正与优化，得到复合防霉剂中5种植物提取物的最佳配方组合。

1. 2. 7 稻谷防霉验证试验 按试验获得的最佳防霉剂配方，配制一定量防霉剂，用95%乙醇溶液将其溶解成1.0%的防霉剂溶液，在广东省从化市某粮食干燥厂进行验证。当新鲜稻谷经传送带送入干燥箱时，通过普通喷雾器将防霉剂溶液喷洒到稻谷表面（防霉剂的喷洒量为1 kg/t），经干燥工艺后进入贮藏仓库。分别在0、60、180、240、360、480和720 d取样分析稻谷表面微生物总量，以此验证最佳防霉剂对稻谷的防霉效果。

1. 3 统计分析

所有分析测试均采用3次平行处理，每项测试设3次独立重复。采用SPSS 13.0对试验数据进行处理，同时应用单因素方差进行数据统计分析，统计分析时的组间差异采用S-N-K法，显著性水平P<0.05。

2 结果与分析

2. 1 稻谷带菌总量和主要污染菌

稻谷带菌总量是衡量稻谷污染程度的重要指标，带菌总量多代表稻谷污染程度高，带菌总量少则代表稻谷污染程度低。试验测定了15个新粮和21个陈粮样品的带菌总量，其中新粮样品带菌总量为1.1×103～9.2×103 CFU/g，陈粮样品带菌总量为8.1×103～2.2×105 CFU/g，陈粮样品带菌总量明显高于新粮样品，说明粮食贮藏过程中微生物仍在不断生长繁殖。从表1可看出，尽管贮藏稻谷中的微生物污染菌属组成复杂，但不同样品中同一类型污染菌属的检出率基本一致;不论是新粮还是陈粮，曲霉属（90.1%和91.3%）和青霉属（均为83.5%）霉菌均为南方贮藏稻谷中的主要污染菌属，其次是毛霉属和镰刀菌属，而枝孢霉属、交链孢霉属和根霉属存在较少。因此，对贮藏稻谷而言，控制其中微生物的关键是防止曲霉属和青霉属霉菌的快速繁殖，进行相关试验时可用曲霉属或青霉属中的某一种具体菌种作为指示菌。

2. 2 5种植物提取物对稻谷中黄曲霉的抑制效果

根据藤茶提取物、茶叶提取物、桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油等5种植物提取物在乙醇溶液中的溶解情况，最终选用溶解状态均为良好、浓度均为0.1%的植物提取物乙醇溶液对稻谷中最典型的污染菌属（曲霉属）中的黄曲霉进行抑制试验。同时因为黄曲霉为南方稻谷的主要污染菌属普通存在于稻谷中，且容易产生被世界卫生组织劃定为一类致癌物的黄曲霉毒素。结果（表2）表明，5种植物提取物对黄曲霉均有一定的抑制效果，均可作为单一的稻谷防霉剂进行使用，但不同种类提取物对黄曲霉的抑制效果不同，其中藤茶提取物对黄曲霉的抑制效果最好，其抑菌圈直径达11.1 mm，其次为桑叶提取物（10.5 mm）和茶叶提取物（10.4 mm）。从MIC和MBC同样可看出，5种植物提取物中以藤茶提取物和茶叶提取物对黄曲霉的抑制和杀灭效果较好，其MIC和MBC均分别为0.0125%和0.0500%，而桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油的MIC和MBC均分别为0.0500%和0.1000%（表2）。

2. 3 复合防霉剂的配方筛选结果

2. 3. 1 混料试验组合 由表3可看出，运行序列10中抑菌圈直径实测值最大（13.90 mm），而抑菌圈直径预期值最大的运行序列为7（13.17 mm），两者存在一定差异。其原因一是软件本身可能存在设计问题，二是可能存在的试验误差所致。5种植物提取物作为单独的防霉剂使用时，对黄曲霉的抑菌圈直径在8.4～11.1 mm（表2），若组合使用，25个组合对黄曲霉的抑菌圈直径（实测值）在11.30～13.90 mm，显示复配防霉剂具有明显的增效作用。

2. 3. 2 预测模型方程及最优组合 根据表3所得的模拟组合中抑菌圈直径的实测值和Design-Expert 8.0给出的预期值，进行二次多项回归拟合，得到抑菌圈直径（Y）与各因素之间的拟合方程：Y=10.34A+10.06B+7.18C+8126.84D-10096.90E+11.97AB+12.18AC-8236.89AD+10212.40AE+10.74BC-8245.77BD+10084.50BE-8149.38CD+10357.06CE+6202.14DE（其中A、B、C、D、E分别代表藤茶提取物、茶叶提取物、桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油的比例）。通过对模型进行方差分析（表4），发现二项式模型达P<0.01的极显著水平，判定系数R2=0.9431。校正后的判定系数R2adj=0.9517，表明模型方程很好地拟合抑菌圈直径与各植物提取物在复合防霉剂最终配方中的比例关系。从各因素的交互作用差异性分析可看出，仅AC和BC的交互作用对黄曲霉抑菌圈直径有显著影响（P<0.05，下同），而其他提取物的交互作用無显著影响（P>0.05），其原因可能是藤茶提取物与桑叶提取物、茶叶提取物与桑叶提取物之间所含的活性成分对黄曲霉的抑制作用具有非常强烈的互补增效作用。

最后，用Design-Expert 8.0的最优化功能设定各组分的变化范围，同时设定所期望的响应值。运行软件后，从随机组合开始进行最陡爬坡预测，直到目标响应值。软件给出达到或接近目标响应值时的5个组合，并提供预测值（表5和表6）。由表6可看出，要使抑菌圈直径达最大预测结果（13.37 mm），稻谷防霉剂中藤茶提取物、茶叶提取物、桑叶提取物、陈皮精油和丁香精油5种原料的用量比例分别为55.00%、22.12%、22.56%、0.10%和0.21%。

2. 4 验证试验结果

为验证通过Design-Expert响应面法获得的复合防霉剂最佳配方效果，进行20 t稻谷效果验证试验。由表7可看出，试验初期（0～180 d）2个样品表面微生物总量变化较小，贮藏240 d后两者间有明显差异，说明复合防霉剂的主要作用是抑制稻谷表面微生物繁殖，而非杀灭微生物。在贮藏过程中，未喷洒防霉剂的稻谷，180 d后其表面微生物总量与刚入库贮藏（0 d）的稻谷表面微生物总量相比有显著增加，720 d的稻谷表面微生物总量较240 d增加16.44倍，说明未经防霉剂处理的稻谷在贮藏过程中微生物繁殖速度非常快;而经过防霉剂处理的稻谷，240 d后稻谷表面微生物总量与入库贮藏（0 d）的稻谷表面微生物总量才开始有显著差异，说明喷洒防霉剂后的稻谷贮藏时间至少延长了60 d。结合360～720 d的微生物总量可看出，喷洒防霉剂后的稻谷安全贮藏时间延长了60～120 d。

3 讨论

稻谷贮藏过程中，随着贮藏时间的延长，微生物不断繁殖，其结果显示出陈粮样品的带菌总量明显高于新粮样品。随着陈粮样品带菌总量的增加，各种微生物依靠其分泌的胞外酶不断地将贮藏稻谷中淀粉、纤维素、蛋白质和脂肪等大分子物质水解为可溶性低分子物质，以此保证微生物自身生长发育和大量繁殖的营养需要，其结果反映在贮藏粮食上，便是霉变的发生和发展（周建新，2004）。在稻谷贮藏过程中，减少稻谷初始带菌量或抑制微生物的繁殖速度是保障稻谷安全贮藏的关键，但由于稻谷生产环境为开放式，要减少初始带菌量较难以实现，抑制微生物的繁殖速度则是比较可行的一种技术方案。

长期以来，主要使用单一组分的防霉剂以抑制贮藏稻谷中微生物的繁殖，如食品级的双乙酸钠、山梨酸和山梨酸盐、丙酸钙、苯甲酸和苯甲酸盐等（盛强等，2010;马永轩等，2012）。但单一组分组成的防霉剂无法对所有粮食微生物起到抑制作用，且不同区域尤其是南、北方稻谷在贮藏过程中的微生物菌系差别很大，影响稻谷的品质情况也不相同（王启阳等，2020），因此，单一组分的防霉剂在贮藏稻谷中具有明显不足。复合型防霉剂是由多种具有协同效应的单一防霉组分按一定比例复配而成，其增效和协同作用可克服单一组分防霉剂在防霉效应上的局限性。本研究结果表明，5种植物提取物中对黄曲霉抑制效果最好的是藤茶提取物，其抑菌圈直径为11.1 mm，最差的是丁香精油，抑菌圈直径为8.4 mm，但5种植物提取物复配后抑制效果明显增加，其对黄曲霉的抑菌圈直径可达13.37 mm。因此，复合型防霉剂应是稻谷贮藏过程中首选的技术方案。

随着天然产物研究的纵深发展，天然产物中有不少活性成分兼具保健和防霉作用，从天然产物中筛选相应的活性成分复配成稻谷防霉剂更是引起了大量粮食贮藏科研工作者的注意（智亚楠等，2018;罗泽萍等，2019）。但由于微生物的多样性，引起粮食霉变中的微生物又有其特殊性，且天然产物活性成分的种类很多，选择何种天然产物作为复合型防霉剂的组成又是其中的一个关键。本研究过程中，选择藤茶、茶叶和桑叶提取物，主要是因为其主要活性成分分别为藤茶黄酮（二氢杨梅素）、茶多酚（儿茶素）和桑叶黄酮（芸香甙、槲皮素、异槲皮素及槲皮素-3-葡萄糖甙等），均含有基本骨架为C6-C3-C6结构的2-苯基苯并吡喃酮天然化合物及其衍生物，此类化合物则是对稻谷中黄曲霉具有明显的抑制作用（尚小飞，2019）;选择陈皮精油和丁香精油作为复合型防霉剂的原料，主要是因为精油中含有大量的萜烯类、醛类、酯类和醇类等组成复杂的小分子类物质，脂溶性强，容易渗入微生物脂质膜从而抑制微生物的繁殖代谢（高以宸，2020;张庆霞，2020）。

选择单一的防霉组分后，如何按一定的配比组成复合型防霉剂也是研究中的重点内容，不同的配比最终决定配方的协同效应大小，这是一种典型的混料试验。目前常用的混料试验方法有很多，如单因素轮换法、优选法、正交试验设计、回归试验设计、旋转设计、均匀设计及D-最优混料设计等，难以区分哪种方法具有决定性优势，但采用Design-Expert响应面法进行配方优化，在利用前期研究得到的复合防霉剂中各个组分大致的用量范围基础上，根据软件中自带的中心响应面试验原则，通过模拟和实测的比较、校正与优化，最后可快速得到最佳配方组合，相比其他方法，试验次数较少，较容易得到具体的最佳配方。但最佳配方是否合理，能否达到预期目的的关键是试验过程中选择的考察指标是否具有代表性。本研究选择配方组合对黄曲霉的抑菌圈直径为考察指标，但黄曲霉仅是贮藏稻谷中的一种污染菌，尽管普通存在于贮藏稻谷中，但也不能完全代表所有污染菌的抑制状况，因此这是本试验中的一个明显不足。为获得理想准确的配方，下一步可选择其他的污染菌如曲霉属中的黑曲霉作为考察指标进行类似试验，以此校正最终配方，获取最佳防霉效果。此外，在稻谷防霉应用效果方面，盛强等（2010）采用双乙酸钠与山梨酸钾复配制成复合型防霉剂，在实验室条件下可使稻谷的安全贮藏时间延长90 d，而本研究所得的配方产品在大规模实际生产应用过程中，可使稻谷安全贮藏时间延长60～120 d，表现出较好的实际应用效果。

4 结论

利用5种植物提取物配制复合型稻谷防霉剂的最优用量比例为：55.00%藤茶提取物、22.12%茶叶提取物、22.56%桑叶提取物、0.10%陈皮精油和0.21%丁香精油。复合型稻谷防霉剂可抑制稻谷中微生物的繁殖，延长稻谷安全贮藏时间60～120 d。

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（責任编辑 罗 丽）