蒙古口蘑的真伪鉴别*

苏日古格，佟春兰，包海鹰

（吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 130118）

蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum Imai），又称白蘑、口蘑、草原白蘑、珍珠蘑、查干蘑菇、云盘蘑、银盘蘑等。由日本真菌学者今井三子（S.Imai）于1937年定名发表，并记载其汉语名称为白蘑菇[1]。隶属于伞菌目（A-garicales）、口蘑科（Tricholomataceae）、口蘑属（Tricholoma）真菌。夏秋季尤其在立秋前后大量地产生在草原上群生并形成蘑菇圈。分布于我国东北、河北张家口以北及内蒙古中东部,东起呼贝尔盟[2]，西达包头地区[3]，蒙古，俄罗斯的亚洲地区（阿尔泰）[4，5]。蒙古口蘑子实体较大，菌肉肥厚、质地鲜嫩、味鲜香浓，为著名食药用菌[6]。民间用于消化不良，脘腹胀满，胃气痛，泄泻等症，在民间也流传着许多单验方及食疗方[7]。在蒙药中用于治疗外伤及解毒[8]。

蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum）是我国宝贵的食药用菌资源，由于蒙古口蘑自然生长季节性强，加之生态环境恶化、资源锐减，至今尚不能实现人工驯化栽培[9，10]，所以蒙古口蘑的产量和质量每况愈下，难以满足商品化、市场化的要求，导致蒙古口蘑价格上涨,每公斤蒙古口蘑要几百元甚至上千元。由于价格昂贵市场上出现了大量的蒙古口蘑劣质品及伪品。本文从性状鉴定、薄层色谱鉴定、红外检测、石油醚提取物的化学成分GC－MS分析等化学检识方面分别对蒙古口蘑及其混淆品进行了系统研究。

1 实验材料与仪器

1.1 实验材料

蒙古口蘑子实体于2008年采自内蒙古呼伦贝尔市陈巴尔虎旗草原，由吉林农业大学菌物研究所图力古尔教授鉴定。蒙古口蘑样品1、样品2、样品3是2008年购于呼伦贝尔盟海拉尔市新桥市场。

1.2 仪器与试剂

电热鼓风干燥箱，上海实验仪器厂有限公司；SHB－B95型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；FW－200型高速万能粉碎机，北京中兴伟业仪器有限公司；紫外灯，AUY220型电子分析天平，日本岛津公司；XS－212－201生物学显微镜红外检测仪，德国 Bruker WERTREX型红外检测仪。

试剂：水合氯醛、稀甘油、氢氧化钾、浓硝酸。

2 研究方法

2.1 性状鉴别

通过眼观、手摸、鼻闻、口尝及水试的方法对新鲜子实体的形状、大小、色泽、表面、质地、断面、气味等特点进行鉴别。

2.2 理化检识鉴别

蒙古口蘑、样品1、样品2、样品3干燥子实体粉碎，各样称取品8 g，梯度提取法分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇索式提取10 h，减压浓缩各提取液。

2.2.1 薄层色谱鉴定

将其各个层4种提取液溶于有机溶剂后在薄层板上分别点样，以下展开剂条件下薄层展开，如氯仿层以氯仿：石油醚=1∶2；乙酸乙酯层以乙酸乙酯：氯仿=3∶4；丙酮层以乙酸乙酯：氯仿=1∶1。

2.2.2 红外检测

4个蘑菇的氯仿提取物、丙酮提取物、甲醇提取物分别减压浓缩至完全晾干之后分别加5 ml甲醇溶解。

2.2.3 石油醚提取物的化学成分GC－MS分析

4种蘑菇石油醚提取物通过GC－MS分析，其色谱条件为：HP－5 型毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），汽化室温度 270℃，流速 1.0 mL·min－1，柱温 80℃（3 min）→150℃→270℃（5 min），接口280℃。质谱条件为：离子源温230℃，采集方式全扫描，扫描范围45 amu～460 amu，不分流，四极杆150℃，溶剂延迟2.0 min，阀值150。各组分的相对含量是从总离子流色谱图中用封面积归一化方法计算而得，采用WILEY.L谱库检索，并结合质谱图中基峰、负荷比以及相对丰度与标准图谱的比较，鉴定其化合物。

3 实验结果

3.1 来源鉴定及性状鉴定

蒙古口蘑鲜品：子实体中等至较大；菌盖直径5 cm～17 cm，半球形、扁半球形至近平展，白色，光滑，初期边缘内卷；菌肉白色，厚，具香气；菌肉肥厚，质地细嫩；菌褶白色，弯生，稠密，不等长；菌柄粗壮至肥大，长3.5 cm～7 cm，粗1.5 cm～4.6 cm，基部稍膨大，白色，内实；孢子印白色。干品：蒙古口蘑子实体干后，质脆，易碎；菌盖成乳白色；菌褶白色至土黄色；菌柄长度与菌盖直径比例不超过1；表面光滑有网状纹理，质地疏松，易折断，断面纯白色呈粉性，有浓郁的蘑菇香气（图2）。蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum）又称白蘑、口蘑、草原白蘑、珍珠蘑、查干蘑菇、云盘蘑、银盘蘑等。属伞菌目（Agaricales）、口 蘑 科（Tricholomataceae）、口 蘑 属（Tricholoma）真菌。夏秋季尤其在立秋前后大量地产生在草原上群生并形成蘑菇圈。

图2 蒙古口蘑子实体

劣质品：某些商家为使蒙古口蘑增重，把新鲜蒙古口蘑子实体泡入水中。泡过水的蒙古口蘑子实体颜色会迅速变褐，甚至变黑，尤其是菌盖边缘，并且菌盖掰开就能看到吸收的水分（图3）。

图3 蒙古口蘑劣质品图片

样品1鲜品：子实体中等，菌盖2 cm～8 cm，常常颜色多变化，呈现为灰褐、烟灰色至近淡黄色；菌盖边缘平滑无条棱，但有时成波浪状或近似花瓣状；菌褶窄而密，污白色，稍延生；菌柄长5 cm～9 cm，粗达3 cm；表面白色，基部往往膨大，中空；孢子印白色。干品：子实体干后，质脆，易碎；菌盖成黄色至褐色；菌褶土黄色；菌柄长度与菌盖直径比例超过1.5；表面粗糙、皱褶状，质地疏松，易折断，断面纯白色至土黄色呈粉性，有浓郁的蘑菇香气（图4）。根据以上特征鉴定样品1为水粉伞菌（Clitocybe nebularis），又称水粉蕈、烟云杯伞，当地牧民称之为二白蘑、灰顶二白蘑。属伞菌目（Agaricales）、口蘑科（Tricholomataceae）、杯伞属（Clitocybe）真菌。 通常在晚秋季出现在林地上形成大的蘑菇圈。

图4 样品1子实体

样品2鲜品：菌盖半圆形，中凸，后期微平展，径6 cm～8 cm，盖表光滑，干；后期微有龟裂，盖中央或具不明显的小鳞片；白色、乳白色或乳黄色，紧压后微呈黄色；菌肉白色；菌褶密而离生，初白色，成熟后呈粉红色、深咖啡色；菌柄柱状，近等粗；中端与盖缘衔接处层外具絮状环膜，白色或乳黄色，脆而易碎；气香，味特异。干品：子实体干后，质脆，易碎；菌盖白色至微黄色，微有龟裂；菌盖边缘与菌柄衔接处具絮状环膜；菌柄长度与菌盖直径比例超过1.5；菌褶初白色，成熟后呈粉红色、深咖啡黄色；表面白色至微黄色，粗糙，质地疏松，易折断，断面白色至土黄色呈粉性，有浓郁的蘑菇香气（图5）。根据以上特征鉴定样品2为野蘑菇（Agaricus arvensis），也叫田蘑菇、杂蘑、哈日蘑菇，当地牧民称之为雷窝子，长在白蘑蘑菇圈上的二茬白蘑。属伞菌目（A-garicales）、蘑菇科（Agaricaceae）、蘑菇属（Agaricus）真菌。夏季生于旷野、肥土、林旁、草原及草地。

图5 样品2子实体

样品3鲜品：子实体中等至较大；菌盖直径4 cm～12cm，扁半球形至平展，边缘内卷变至平展和波状，粘，浅红褐色，趋向边缘色浅，被棕褐色细小鳞片；气味香；菌肉较厚，污白色，伤处变暗；菌褶密，较窄，污白色带浅红褐色，不等长，伤处色变暗；菌柄比较粗壮，内实至松软，长3 cm～8 cm，粗1 cm～3 cm，有的下部膨大，白色擦伤处带红褐色；孢子印白色。干品：子实体干后，质脆，易碎；菌盖黄色至褐色，被棕褐色细小鳞片；菌褶黄色；表面紫褐色附有白色粉状小颗粒，质地疏松，易折断，断面白色至土黄色呈粉性，有浓郁的蘑菇香气（图6）。根据以上特征鉴定样品3为杨树口蘑（Tricholoma populinum），又称杨林口蘑，杨口蘑，当地牧民称之为油蘑、土豆蘑。 属伞菌目（Agaricales）、口蘑科（Tricholomataceae）、口蘑属（Tricholoma）真菌。秋季在杨树林中沙质的土地上群生、散生。

3.3 4种样品的理化鉴定

图6 样品3子实体

3.3.1 薄层色谱鉴定

丙酮层Rf=0.712和Rf=0.76处，4种菌物都有粉色斑点，Rf=0.712处样品3和蒙古口蘑色深。Rf=0.76处样品2和蒙古口蘑色比较深。乙酸乙酯层Rf=0.677处四种菌物都有灰色斑点，颜色都比较深。Rf=0.74处样品2、样品3和蒙古口蘑有蓝色斑点，样品2色深。Rf=0.84处只有蒙古口蘑有紫粉色斑点，具有鉴定意义。氯仿层Rf=0.46处4个菌物都有粉色斑点，颜色都比较深。Rf=0.58处样品2和蒙古口蘑色有粉色斑点，样品2颜色都比较深。

3.3.2 红外检测

图7 样品1氯仿层红外图谱

图8 样品2氯仿层红外图谱

图9 样品3氯仿层红外图谱

图10 蒙古口蘑氯仿层红外图谱

图11 样品1丙酮层红外图谱

图12 样品2丙酮层红外图谱

图13 样品3丙酮层红外图谱

图14 蒙古口蘑丙酮层红外图谱

图15 样品1甲醇层红外图谱

图16 样品2甲醇层红外图谱

图17 样品3甲醇层红外图谱

图18 蒙古口蘑甲醇层红外图谱

用移液枪吸取50 μL样品，均匀涂在溴化钾片上，将涂好的片子置于光路中，用电子计算机程序控制进行测定400 cm－1～4 000 cm－1间的光谱。 结果分析见图 7 至图18。蒙古口蘑、样品1、样品2、样品3的氯仿、丙酮和甲醇提取物的红外光谱表明，在官能团区（1 300 cm－1～4 000 cm－1），样品 1、样品 2、样品 3 氯仿层在 1 651 cm－1～1 384 cm－1处有相同的吸收峰。而蒙古口蘑氯仿层在1 627 cm－1～1 665 cm－1处有个强吸收峰，1 732 cm－1处有较强吸收峰，其他3种无。类似这样的小特征峰可做为鉴别蒙古口蘑及以上3种混淆品的依据。

指纹区（1 300 cm－1～910 cm－1），样品 1、样品 2、样品 3 氯仿层在 1 012 cm－1～1 031 cm－1处有相同的强吸收峰，而蒙古口蘑氯仿层没有这个吸收峰。蒙古口蘑氯仿层在1 172 cm－1处有吸收峰，其他3种无。4种样品丙酮层提取物和甲醇提取物中，样品1、样品2、样品3在1 018 cm－1～1 053 cm－1处有1个相同的强吸收峰。这些差异鉴别蒙古口蘑及其混淆品具有一定的鉴定意义。

芳香区（910 cm－1～650 cm－1）的吸收峰比较小，也有较大差异，如蒙古口蘑氯仿层提取物在723 cm－1处有1个小尖峰，其他3种都无。蒙古口蘑丙酮和甲醇层提取物在783 cm－1、721 cm－1、680 cm－1处有小尖峰，其他 3 种都无。这对用红外方法鉴别蒙古口蘑有辅助意义。

3.3.3 4种样品的石油醚提取物的GC－MS分析结果

4种样品石油醚提取物的GC－MS总离子流色谱结果见图19至图22。

图19 样品1石油醚提取物GC-MS总离子流图

图20 样品2石油醚提取物GC-MS总离子流图

图21 样品3石油醚提取物GC-MS总离子流

图22 蒙古口蘑石油醚提取物GC-MS总离子流图

4种样品的石油醚提取物各组分的相对含量是从总离子流色谱图中用峰面积归一化方法计算而得，结果见表1至表4。

采用WILEY.L谱库检索结果，并结合质谱图中基锋、负荷比以及相对丰度与标准图谱的比较，以上4种样品分别鉴定出样品1有5个化合物、样品2鉴定出2个化合物、样品3鉴定出3个化合物、蒙古口蘑鉴定出10个化合物。其中正－十六烷酸是四者共有的化学成分（表1～表4）。除蒙古口蘑外，其他3种蘑菇石油醚提取物都含有(Z,Z)－9,12－十八碳二烯酸。

表1 样品1石油醚提取物GC-MS联机分析结果

表2 样品2石油醚提取物GC-MS联机分析结果

表3 样品3石油醚提取物GC-MS联机分析结果

表4 蒙古口蘑石油醚提取物GC-MS联机分析结果

4 讨论

本论文通过来源鉴定和性状鉴定方法相结合，鉴定样品1为水粉伞菌（C.nebularis）、样品2为野蘑菇（A.arvensis）、样品3为杨树口蘑（T.populinum）。并且将三者和蒙古口蘑进行性状特征和薄层色谱、红外检测、石油醚提取物GC－MS等理化特征进行对比鉴定，结果显示四者具有不同程度的差异性。

水粉伞菌与蒙古口蘑干品鉴别要点：蒙古口蘑菌柄粗短、肥大、白色、光滑，水粉伞菌菌柄较长基部膨大、褐黄色、条状纹理；蒙古口蘑菌柄长度与菌盖直径比例不超过1，而水粉伞菌菌柄长度与菌盖直径比例超过1.5。

野蘑菇与蒙古口蘑干品鉴别要点：蒙古口蘑菌柄长度与菌盖直径比例不超过1，而野蘑菇菌柄长度与菌盖直径比例超过1.5；蒙古口蘑菌褶白色，而野蘑菇菌褶初白色，成熟后呈粉红色、深咖啡色；蒙古口蘑菌盖白色、光滑，而野蘑菇菌盖白色粗糙、微有龟裂；野蘑菇菌盖边缘与菌柄衔接处具絮状环膜，白色或乳黄色，脆而易碎，而蒙古口蘑没有。

杨树口蘑与蒙古口蘑干品鉴别要点：蒙古口蘑菌褶白色，而杨树口蘑菌褶污白色带浅红褐色；蒙古口蘑菌盖白色、光滑，而杨树口蘑菌盖红褐色、被棕褐色细小鳞片；蒙古口蘑有浓郁的鲜味而杨树口蘑有股略发咸的香气。

从红外图谱上蒙古口蘑氯仿层在1 627 cm－1～1 665 cm－1处有个强吸收峰，1 732 cm－1处有较强吸收峰，其它3种无；在1 172 cm－1处有吸收峰；在723 cm－1处有1个小尖峰，其他3种都无。蒙古口蘑丙酮和甲醇层提取物在783 cm－1、721 cm－1、680 cm－1处有小尖峰，其他 3 种都无。 薄层色谱鉴别，蒙古口蘑乙酸乙酯层Rf=0.84处有紫粉色斑点，其他3种均没有。石油醚提取物GC－MS分析，水粉杯伞石油醚层鉴定出5个化合物；野蘑菇石油醚层鉴定出2个化合物；杨树口蘑石油醚层鉴定出3个化合物而蒙古口蘑石油醚层鉴定出10个化合物。其中正－十六烷酸（n－Hexadecanoic Acid）是四者共有的化学成分。除了蒙古口蘑外，其他3种菌物石油醚提取物都含有 (Z,Z)－9,12－十八碳二烯酸。这些差异在鉴别蒙古口蘑及其混淆品方面具有一定的鉴定意义。

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