食用菌生产中污染霉菌敏感性杀菌剂的测定*

谢春芹，陈啸寅，贾 君，宋子明，谢正林，杨鹤同

（江苏农林职业技术学院，江苏 句容 212400）

食用菌是指可供人类食用或药用的，能形成大型肉质、胶质、膜质、革质、木栓质或木质的子实体或菌核的一类大型菌（Fungus）总称。通常也称菇、菌、蕈、耳、芝等。食用菌约90%以上种类属于担子菌纲（Basid ionycetes），少数属于子囊菌纲（Ascomycetes）[1]。

食用菌营养丰富、风味独特、药食同源，具有一定的保健功能，是人们所喜爱的健康理想食品。食用菌生产投资少，见效快，效益好，是广大农村致富的一个重要门路[1]。但食用菌生产中常受到多种病原霉菌的侵染，严重时会造成大面积减产，因此食用菌生产中如何防治霉菌污染是亟待解决的重要问题[2－4]。鉴于此，立题开展对食用菌生产中常见5种霉菌敏感性杀菌剂的检测研究。通过平板抑菌试验，测定几种杀菌剂对霉菌的抑制效果，旨在筛选出对食用菌生产中常见霉菌有较强抑制作用的杀菌剂，为食用菌安全生产提供理论依据和技术指导。

1 材料和方法

1.1 材料及来源

1.1.1 供试杀菌剂及来源

70%克霉灵，山西运城化工厂生产；50%多菌灵可湿性粉剂，江苏江都市化工厂生产； 30%菇丰可湿性粉剂，江苏苏科农化有限公司生产；70%甲基托布津，浙江威尔达化工厂生产； 绿霉净，山东单县高港食用菌公司生产。

1.1.2 供试霉菌菌种及来源

霉菌菌种（木霉、青霉、曲霉、毛霉、根霉），由江苏农林职业技术学院食用菌研究所提供。

1.1.3 供试培养基

PDA 培养基[5，7]。

1.2 试验方法

1.2.1 试验设计

将生产上常用5种杀菌剂稀释成适当的浓度倒入PDA培养基中，制成PDA平板，并设空白对照，将5种霉菌病原分别接入到制好5种杀菌剂的平板和空白对照平板中，放入相同的条件下培养，定期测不同杀菌剂下各种霉菌的生长速度，比较5种杀菌剂分别对5种霉菌的抑制效果[8－17]。

1.2.2 方法

采用PDA培养基平板抑菌试验[8]。为避免因高温而破坏杀剂的药效，待PDA培养基温度降至50℃～60℃时，将5种的杀菌剂稀释成适当的浓度在无菌条件下加入到PDA培养基的三角瓶中，充分混匀后倒入无菌培养皿中，冷却成药液平板培养基。在无菌条件下，采用打孔接种法（霉菌接种块直径为0.5 cm），每种霉菌接5个平板培养基，并设有空白对照，放置恒温培养箱中培养，培养温度为25℃，24 h后定期测量霉菌菌落生长的大小。根据测定结果，选出具有能抑制多种霉菌的杀菌剂，再对该种药剂最适抑制浓度进行测定，即在初步抑制浓度的基础上再设定几种梯度浓度，每个浓度设5个重复，并设有对照，通过抑菌效果比较，筛选出该种药剂最适抑菌浓度。

（1）5种杀菌剂平板的制作

将灭菌好的PDA培养基，取出移至超净工作台内，在无菌条件下，将每种药剂按照1∶1 200比例的量，分别加入三角瓶中，摇均后迅速将三角瓶中的培养基倒入无菌培养皿中，每个培养皿倒入15 mL培养基，写上标签，冷却待用。

（2）接种霉菌

按无菌操作要求，挑取一块霉菌菌饼块迅速移接到平板培养基的中央[8－10]。

（3）培养

将接好霉菌的平板倒置放入恒温培养箱内培养，温度25℃，培养 7 d～10 d[11]。

（4）抑菌效果的测定

接种后每隔24 h观察1次，记录各霉菌菌落生长面积，用自动式游标卡尺量不同杀菌剂平板中各霉菌的生长面积，即以各霉菌菌落的长（cm）和宽（cm）来计算[12，13]，直至霉菌菌落完全布满平板。

2 结果分析

2.1 50%多菌灵对霉菌生长速度的抑制效果

经过10 d的观察测定，50%多菌灵对5种霉菌生长速度的抑制效果有明显差异，见表1。

表1 50%多菌灵对不同霉菌菌丝生长的抑制效果

结果表明，50%多菌灵杀菌剂对木霉、曲霉、青霉有抑制作用；对毛霉抑制效果较明显；而对根霉无抑制作用。

2.2 30%菇丰对霉菌菌落生长的抑制效果

经过10 d的观察测定，30%多菌灵对5种霉菌生长速度的抑制效果有明显差异，见表2。

表2 30%菇丰对不同霉菌菌丝生长的抑制效果

结果表明，30%菇丰杀菌剂对木霉、曲霉、青霉、毛霉和根霉均有的抑制作用，其中对根霉和毛霉的抑制效果比较显著。

2.3 绿霉净对霉菌菌落生长的抑制效果

经过10 d的观察测定，绿霉净对5种霉菌生长速度的抑制效果有明显差异，见表3。

表3 绿霉净对不同霉菌菌丝生长的抑制效果

结果表明，绿霉净对木霉、毛霉、青霉、曲霉均有抑制作用，对根霉无抑制作用。

2.4 70%甲基托布津对霉菌菌丝生长的抑制效果

经过10 d的观察测定，70%甲基托布津对5种霉菌生长速度的抑制效果明显的差异，见表4。

表4 70%甲托对不同霉菌菌线生长的抑制效果

结果表明，70%甲基托布津杀菌剂对木霉、青霉、曲霉、根霉和毛霉均有抑制作用，对根霉的效果比较明显。

2.5 70%克霉灵对霉菌菌落生长的抑制效果

经过10 d的观察测定，70%克霉灵对5种霉菌生长速度的抑制效果有明显差异，如表5。

结果表明，70%克霉灵杀菌剂对青霉、根霉、毛霉、曲霉有抑制作用，而对木霉则无抑制作用。

通过对以上5种杀菌剂对食用菌生产中常见霉菌抑制效果的研究，结果表明30%菇丰对这5种霉菌均抑制作用，效果较好。为了比较准确了解30%菇丰对不同霉菌的最适抑制浓度，需进一步研究其抑菌浓度。

表5 70%克霉灵对不同霉菌菌丝生长的抑制效果

2.6 不同浓度的30%菇丰对5种霉菌生长的抑制

在试验抑制浓度的基础上，上下分别设定4个浓度梯度，共9个浓度试验，按同样的方法制作不同浓度梯度平板培养基[8]，按无菌操作要求分别接入霉菌病原，置入相同的条件下培养，每隔24 h测霉菌菌丝生长情况，记录菌落布满平皿的时间，见表6。

表6 不同浓度30%菇丰对木霉菌菌丝生长的抑制效果

表6表明，菇丰在 1∶900～1∶1 100倍液之间对木霉抑制作用效果较好，其中1∶1 000倍液对木霉抑制作用效果最好。不同浓度30%菇丰对根霉的抑制效果见表7。

表7 不同浓度30%菇丰对根霉的抑制效果

表7表明，菇丰在 1∶800～1∶1 600倍液之间对根霉均有抑制作用，其中以1∶1 000倍液对根霉抑制效果最好。不同浓度30%菇丰对毛霉菌菌丝生长的抑制效果见表8。

表8 不同浓度30%菇丰对毛霉菌菌丝生长的抑制效果

表8表明，菇丰在 1∶800～1∶1 600倍液之间对毛霉均有抑制作用，其中以1∶900～1∶1 200对毛霉抑制效果最好。不同浓度30%菇丰对青霉的抑制效果见表9。

表9 不同浓度30%菇丰对青霉的抑制效果

表9表明，菇丰在 1∶800～1∶1 400倍液对青霉均有抑制效果，从测量青霉菌丝日生长速度结果看，在此浓度范围内对青霉抑制效果随着深度的增加而提高。不同浓度30%菇丰对曲霉的抑制效果见表10。

表10 不同浓度30%菇丰对曲霉的抑制效果

表10表明，菇丰在1∶800～1∶1 500倍液之间对曲霉均有抑制作用，其中以1∶1 000～1∶1 100对曲霉抑制效果最好。

3 小结与讨论

3.1 不同杀菌剂对不同的霉菌抑制效果不同

5种常用杀菌剂中50%多菌灵杀菌剂对木霉、曲霉、青霉有抑制作用，对毛霉抑制效果较明显，而对根霉无抑制作用；绿霉净对木霉、毛霉、青霉、曲霉均有抑制作用，对根霉无抑制作用；70%甲基托布津杀菌剂对木霉、曲霉、根霉和毛霉均有抑制作用，对青霉的抑制效果不明显；70%克霉灵杀菌剂对青霉、根霉、毛霉、曲霉有抑制作用，而对木霉无抑制作用；菇丰对5种霉菌均有抑制作用，抑菌谱最广。

3.2 不同浓度的菇丰对不同霉菌抑制效果不同

30%菇丰在 1∶900～1∶1 000倍液对木霉抑制作用效果最好；在1∶1 000倍液对根霉抑制作用效果最好；在1∶900～1∶1 200 倍液对毛霉抑制作用效果最好； 1∶800～1∶1 400 倍液对青霉抑制作用效果最好；在1∶1 000～1∶1 100倍液对曲霉抑制作用效果最好。在1∶1 000倍液的浓度下对5种霉菌均有抑制效果，因此，在食用菌生产中推荐使用菇丰作为该5种霉菌杀菌剂，建议使用浓度比为1∶1 000。

3.3 讨论

以上5种霉菌在食用菌生料栽培中发生尤其严重，因此，本试验的杀菌剂是在培养基灭菌冷却至50℃～60℃时加入的，试验结果适用于食用菌生料栽培和发酵料栽培。熟料栽培由于要高温灭菌，是否影响药效，还需进一步试验研究。

[1]常明昌.食用菌栽培[M].北京：中国农业出版社，2009.

[2]牛贞福.平菇绿霉菌的发生原因及防治措施[J].食用菌，2007(5)：56.

[3]苏贵平，黄聿善，郑东.4种药剂对蘑菇疣孢霉病的防治及安全性试验[J].福建农业科技，2008(3)：36.

[4]暴继春，赵桂云，赵洪彬.不同浓度的多菌灵对食用菌菌丝生长的影响[J].中国林副特产，2006(1)：12.

[5]胡建伟，龚明福，彭英等.多菌灵、石灰对5种霉菌抑菌效果的研究[J].新疆农业科学，2004，（41）(专刊)：40-41.

[6]王慧阳.七种食用菌消毒剂抑制霉菌效果的比较研究[J].中国食用菌，2004，25(3)：29-31.

[7]韩留福.克霉灵注射法防止绿色木霉试验[J].食用菌，2006(4)：64.

[8]张宗舟.防霉剂对霉菌和食用菌菌丝的生长[J].食用菌学报，2004，11 (4)：34-37.

[9]韩庆国.几种药剂对木霉、根霉的抑菌试验[J].食用菌，2007(1)：55

[10]胡文华.食用菌奇效杀菌剂[J].湖北农业科技，2004，10(1)：25.

[11]吴仁顿.食用菌生产中绿霉菌的防治[J].种植业大观，2005，4(2)：12.

[12]康业斌.多菌灵对绿色木霉的测定[J].洛阳农专学报，1997，12(17)：35.

[13]张继英.集中杀菌剂抑菌防杂比较试验[J].食用菌，2009(3)：68-69.

[14]曹涤环.多菌灵用于食用菌生产应慎重[J].植物医院，2010(2)：25.

[15]董昌金.几种食用菌消毒剂的防霉效果研究[J].湖北师范学院，2004，24(4)：40.

[16]王振河.四种杀菌剂对绿色木霉及平菇菌丝生长的影响[J].河南农业科学，2000(7)：28.

[17]周传富，何云霞，王杰.多菌灵对几种食用菌霉菌抑制作用的研究[J].安徽农业大学学报，1999，26 (4)：457-460.