剑白香猪猪瘟活疫苗免疫效果观察

杨先富 吴通奎 袁晓娟 廖 飞 包涛涛 杨胜红 赵孝木 彭彩丽

（贵州省黔东南州动物疫病预防控制中心，贵州凯里 556000）

猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus,CSFV）引起猪的一种高度接触性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的传染病[1]；在《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》中，作为我国优先防治和重点防范的16种动物疫病之一[2]。在我国，对猪瘟的防控采取以疫苗免疫接种为主的综合防治措施[3]；常用的猪瘟疫苗有猪瘟兔化弱毒脾淋苗、猪瘟兔化弱毒组织苗、猪瘟细胞苗（猪瘟活疫苗）、猪瘟-猪丹毒-猪肺疫三联活疫苗4种[4]。目前，在规模场虽然每年都免疫猪瘟疫苗，猪瘟的发生与流行也逐渐减少，但“非典型猪瘟”、隐性带毒情况以及疫苗免疫失败的现象仍然时有发生。由于我国幅员辽阔，各地环境状况差异较大，同一种疫苗在不同的养殖环境免疫效果不尽相同，加上猪的品种不同，对同一种疫苗免疫反应程度有所差异，因此，已建立的猪瘟疫苗免疫程序可能存在局限性。做好猪瘟的防治工作，各地应根据实际情况探索适合当地猪品种的疫苗免疫程序。

剑白香猪是世界上著名的微型猪品种，被农业农村部列为国家二级保护畜种，是剑河县少数民族同胞培育成的具有悠久历史的原始猪种；是经历了1 000多年的自然进化和人类培育，适应当地自然环境、生活条件和少数民族生产习俗的带有野性的特殊猪种，主要产于贵州省黔东南州剑河县的丛林山寨中，主食为野生植物，以其猪肉特有香味、嫩度、纯天然、无污染而引起科学家们的高度关注。剑白香猪猪瘟疫苗免疫程序研究未见报道，为了规范剑白香猪猪瘟疫苗免疫程序，降低猪瘟发生的风险，保障剑白香猪产业的健康发展，2018年至2019年，笔者对剑白香猪商品猪开展猪瘟活疫苗的免疫试验，观察其免疫抗体变化规律和免疫效果，为剑白香猪商品猪猪瘟疫苗的免疫工作提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 疫苗

猪瘟活疫苗，广东永顺生物制药股份有限公司生产，批号：2018039。

1.2 试验动物

在剑河县剑白香猪原种场选择来自同批次4头母猪的同胎次、同日出生、相同饲养管理条件的健康仔猪30头，35日龄监测猪瘟母源抗体，全部为阴性，符合试验条件。

1.3 检测试剂

猪瘟ELISA试剂盒，中国农业科学院兰州兽医研究所生产。

1.4 免疫方法

仔猪于35日龄首次免疫猪瘟活疫苗，分别在56日龄、65日龄采集血清监测猪瘟疫苗免疫抗体。65日龄加强免疫1次，分别在85日龄、115日龄、145日龄、175日龄、185日龄采集血清监测猪瘟抗体。185日龄开展第3次免疫，分别在205日龄、260日龄、320日龄、365日龄采集血清监测猪瘟抗体；每次免疫猪瘟活疫苗，都按每头猪1头份（1 mL）进行肌肉注射。

1.5 免疫抗体监测方法

取出CSFV抗原酶标板，在记录表上记录样本的位置。选2个孔加入100μL未稀释的阴性对照血清，在临近阴性对照孔附近选2个孔加入100μL未稀释的阳性对照血清，然后在其他对应的孔中加入30倍稀释的待检样品。加样完成后，将CSFV抗原酶标板置于37℃条件下孵育30 min后，弃掉酶标板各孔中的反应液体，用约300μL的1×洗涤液洗涤5次板孔，将孔中残留的洗涤液用吸水纸拍干。在干燥后的抗原酶标板中加入50μL兔抗猪IgG-HRP工作液，然后封板。封好的反应板在37℃下孵育30 min，然后再洗涤板孔并吸干孔中的水分。在干燥后的板孔中加入50μL底物溶液，37℃下孵育12±1 min，孵育完成后，在每个孔中加入50μL终止液，并将酶标板放入酶标仪中读取酶标仪上波长450 nm下的OD值。

1.6 计算结果

对照值计算：

注：NC1A（450）为阴性对照1孔，NC2A（450）为阴性对照2孔；PC1A（450）为阳性对照 1孔，PC2A（450）为阳性对照2孔。

实验有效判定：

样品：

结果判定：S/P≥0.4为阳性，S/P＜0.4为阴性。

2 结果与分析

2.1 结果

猪瘟活疫苗免疫抗体通过ELISA方法监测，结果如表1所示。

表1 猪瘟活疫苗免疫抗体监测结果

仔猪在35日龄首次免疫后，在56日龄、65日龄采样检测，S/P值分别为0.320、0.391，猪瘟活疫苗免疫抗体阳性数分别为12头、19头，猪瘟活疫苗免疫抗体阴性数分别为18头、11头，阳性率分别为40%、63.3%；在75日龄、85日龄、115日龄、145日龄、175日龄、185日龄检测，S/P值分别为0.423、0.625、0.614、0.512、0.420、0.375，猪瘟活疫苗免疫抗体阳性数分别为21头、25头、24头、23头、21头、15头，猪瘟活疫苗免疫抗体阴性数分别为9头、5头、6头、7头、9头、15头，阳性率分别为70%、83.33%、80%、76.66%、70%、50%；在205日龄、260日龄、320日龄、365日龄检测，S/P值分别为0.693、0.658、0.603、0.415，猪瘟活疫苗免疫抗体阳性数分别为27头、26头、24头、21头，猪瘟活疫苗免疫抗体阴性数分别为3头、4头、6头、9头，阳性率分别为90%、86.66%、80%、70%。

2.2 分析

2.2.1 S/P值分析

剑白香猪仔猪在35日龄首次免疫猪瘟活疫苗后，抗体水平呈缓慢上升趋势，到65日龄值仍低于0.4，抗体水平低，不足以保护猪群，此时如果有猪瘟强毒侵袭，猪群易被感染而发病，因此，必须加强免疫1次，免疫后抗体水平快速上升，到85日龄时达到峰值，随后抗体水平缓慢下降，到185日龄时，S/P值低于0.4，免疫保护率变低，免疫保护期可维持4个月；由于剑白香猪生长慢，饲养周期较长，通常是1年才能出栏，为了使抗体维持在较高水平，确保猪群安全，必须在185日龄进行第3次免疫，在205日龄时，抗体水平达到高峰，直到365日龄，S/P值仍然维持在合格水平以上，免疫保护期可维持半年以上，通过3次猪瘟活疫苗的免疫，猪瘟免疫保护期可维持到剑白香猪商品猪出栏。

2.2.2 免疫保护率分析

经过2次免疫的猪群在85日龄时，猪瘟免疫抗体保护率为83.33%，比第1次免疫保护率63.33%提高了20%，这与卫选智等人[5]报道的猪瘟抗体水平变化趋势相似。第3次免疫后，抗体水平进一步提高，在205日龄时，免疫保护率达90%，比第2次免疫保护率83.33%提高了6.67%，到365日龄时，免疫保护率仍维持在70%。

3 小结

综上所述，第2次免疫效果优于第1次，第3次免疫效果优于第2次，是由于动物机体存在免疫记忆，当疫苗再次刺激机体免疫系统后，迅速产生大量抗体，抗体在体内能维持较长时间[6]。按照在35日龄首免、65日龄加强免疫1次、185日龄进行第3次免疫的程序进行免疫，可使剑白香猪商品猪获得较高的猪瘟抗体水平，保护生猪免受猪瘟病毒感染。