猪附红细胞体病诊断及防控

Ludwig E.Hoelzle（德国霍恩海姆大学 教授）

猪附红细胞体病诊断及防控

Ludwig E.Hoelzle（德国霍恩海姆大学 教授）

猪附红细胞体病是由猪嗜血支原体（Mycoplasma suis）即猪附红细胞体感染而引起的一种细菌性疾病。急性感染和慢性感染的症状有所不同。仔猪、临产母猪和处于应激状态的育肥猪发生急性感染后，出现溶血性贫血，严重时危及生命。慢性感染主要表现为轻微贫血、繁殖障碍、免疫抑制，并易感染其他疾病。患病仔猪易出现贫血、轻度黄疸、瘦弱；育肥猪则生长迟缓、易感染呼吸系统疾病和肠道疾病；母猪则出现繁殖周期紊乱等。总之，急性感染和慢性感染都会降低猪的生产性能，使抗生素的使用增加，给养猪生产带来严重的经济损失。在当今的养殖环境下，猪附红细胞体病还会产生人畜共患问题。

1 附红细胞体的病原学分析

猪附红细胞体是一种直径为0.3～3μm的多形细菌，基因呈环形双链结构。通过对猪附红细胞体的两个菌株（ki 3806和ilinois）进行全基因组分析，发现其基因组可达到70万bp以上（图1），而一般病毒的基因组在几万到十几万bp之间，而RNA病毒的基因组更小，只有几千bp。对其进一步进行功能分析，还发现了一些毒力因子：一是亮氨酰氨肽酶，它与附红细胞体在红细胞中的存活有关；二是在金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌中发现的一种毒力调节因子CVFA；三是RNAP，即一种可以提高转录特异性的RNA聚合酶，该蛋白在B型链球菌属中可以通过阻止吞噬作用的进行从而引发败血症，附红细胞体引起的败血症就可能因为RNAP是其毒力因子；四是钾吸收系统TrKa，在一种嗜盐弧菌中曾发现其具有抗血清的作用，既然附红细胞体生活在宿主血清中，这种毒力因子可能会提高其抗血清作用。

猪附红细胞体主要寄生在红细胞表面（图2），使红细胞发生变形甚至遭到破坏。与寄生虫的生长类似，附红细胞体吸附在红细胞表面，形成复合体。复合体含有两种成分：一种是类似于磷酸甘油醛脱氢酶的一类蛋白即MSG，另一类是α烯醇化酶。此复合体容易与后续感染的病原菌（如大肠杆菌）结合，促进红细胞裂解，使大肠杆菌变异体牢固地吸附在红细胞上。

2 猪附红细胞体病的流行病学特点

在德国，约40.3%的猪场发生过猪附红细胞体病，场内猪只的阳性检出率可以达到13.9%。我国除了西藏以外，其他地区均发现过该病。2002年，国家流行病学中心检测该病的发病率达到30%，死亡率为10%～20%。在德国，采用实时荧光定量PCR对359份野猪样品进行分析，发现36份样品为猪附红细胞体阳性，感染的猪附红细胞体可以分为两种类型，一种是美国欧洲型illinois，一种是中国的广东型。

3 猪附红细胞体病的诊断方法

截至目前，还未建立附红细胞体的体外培养系统。在分类学上，猪附红细胞体与支原体类似，将其在支原体培养基以及改良的培养基中进行培养，虽然可以生长，但量没有增加，有时反而会下降。在电镜下观察发现，猪附红细胞体能在红细胞中生长是因为先形成复合体，再转移到红细胞中。但猪附红细胞体在培养基中无法形成复合体，因此无法进行体外培养而获得大量菌株，也就无法进行实验室诊断。临床诊断主要依赖于显微镜检测，即将血细胞染色后在显微镜下进行观察，此种方法需要血液中附红细胞体的含量大于105个/mL，因此检测的特异性和灵敏度都较差。

分子技术检测比较灵敏，尤其是基于rpoB基因和MSG蛋白的16s rDNA的PCR扩增技术，其检测限可以低至10GE，特异性和灵敏性都较高，是一种诊断动物感染附红细胞体的有效方法。

猪感染附红细胞体后在12周时IgG抗体浓度达到峰值（图 3），因此可采用血清学方法 （如 ELISA）进行诊断。ELISA有全细胞ELISA和重组ELISA两种。全细胞ELISA需要从感染附红细胞体的猪中纯化出抗原，而这些抗原各个批次之间差异较大，且需要在特定的实验室进行。因此，全细胞ELISA不能在急性发病情况下使用，而且无法制定标准的血清学诊断程序，进而无法对猪附红细胞体病进行定期诊断。大肠杆菌产生的重组蛋白HspA1和MSG1蛋白具有附红细胞体抗原特性，用这两种蛋白进行重组ELISA反应，发现与全细胞ELISA相比，HspA1和MSG1重组ELISA的检测灵敏性高于或等于全细胞ELISA（94.0%和100.0%vs.94.0%），而三者之间的特异性相当（100.0%和94.0%vs 96.0%）。可见，重组ELISA适用于定期检测附红细胞体病，以便进行致病学研究和大规模流行病学调查。

4 猪附红细胞体病的防治方法

该病可以采用疫苗免疫进行防治。但疫苗技术现在还不成熟，即将MSG与大肠杆菌连接后，生产出亚单位疫苗注入猪的体内，虽然在一定程度上可以减轻贫血症的发生，但猪并未得到完全保护，易造成免疫失败。

5 总结

猪附红细胞体在全世界都有分布，在野猪身上也能分离到，易造成贫血症。该病具有人畜共患病的危险，通过血液污染产品进行传播。截至目前，不能用专门的宿主细胞进行培养，PCR检测具有高度的敏感性和特异性。在防治措施上，可以用MSG制成的亚单位疫苗进行免疫，但不能提供完全的免疫保护。未来若能分析出猪附红细胞体的完全蛋白质序列，将有助于人类发明更有效的检测技术，以便对该病进行诊断和预防。