猪李氏杆菌病的诊断及药敏实验

周 军 陈长生

(新疆塔城地区畜牧科技研究推广中心，新疆塔城市 834700)

养殖生产中抗生素的滥用，导致病原耐药性的产生，给疾病的治疗和预防带来了巨大的困难，为了更好的指导养殖场（户）用药，笔者分离培养病料中的细菌，同时进行药敏试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料

于2010年5月无菌采集塔城市某猪场病死猪的心脏血、肝脏、脾脏、喉头等。

1.1.2 主要器材

全自动鉴定及药敏测试仪 （ATB Expression）、HPX—9272MBE数显不锈钢电热培养箱、数码显微镜、SW-CJ-2FD超净工作台、LDIX—40BI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器、温箱、冰箱等。

1.1.3 药敏纸片

药敏纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司。

1.1.4 培养基及主要试剂

鲜血琼脂培养基、营养琼脂培养基、各种糖发酵培养基、西蒙氏枸橼酸盐培养基、硝酸盐、吲哚培养基。甲基红、溴甲酚紫、α-萘酚酒精溶液、欧立希氏吲哚试剂、营养琼脂、蛋白胨、葡萄糖、乳糖、蔗糖、氯化钠、磷酸二氢钾等。

1.1.5 实验动物

健康小白鼠6只，体重17～24g雌雄各半；健康家兔1只。

1.2 方法

1.2.1 直接涂片镜检

无菌采取病猪的心脏血、肝脏、脾脏、喉头等直接抹片，进行革兰氏染色，显微镜检查。

1.2.2 细菌的分离培养

无菌采取病猪的心脏血、肝脏、脾脏、喉头，接种于鲜血琼脂平板和普通琼脂平板中，37℃培养24小时后，纯化培养物置于4℃冰箱保存备用。

1.2.3 生化试验

挑选单个菌落进行常规生化实验，观察结果。

1.2.4 动物接种试验

挑选单个菌落用蒸馏水稀释到1个麦氏单位的菌液，取4只小白鼠，每只小白鼠腹腔注射菌液0.2mL；取2只小白鼠腹腔注射蒸馏水0.2mL做对照。同时用菌液滴入家兔一侧结膜囊内，另一侧为对照。

1.2.5 药敏试验

将分离的菌株接种于琼脂平板上，贴上药敏纸片 （8种药物），37℃恒温培养36小时，观察抑菌圈直径。

1.2.6 细菌鉴定仪鉴定

取1～2个纯化的菌落，用生理盐水稀释到0.5个麦氏单位，取细菌菌液200μL接种于一定量的培养液 （按照细菌鉴定仪的说明书操作）；用连续加样器将带有细菌的培养基，分别加入鉴定条的32个孔，每孔135μL，盖好鉴定条的盖子，放入温箱37℃恒温培养8小时。打开盖子，用细菌鉴定仪鉴定。

2 试验结果

2.1 细菌形态

在显微镜下观察到两端钝圆的革兰氏阳性，微弯曲、细长的小杆菌。有的连成链状，有的呈 “V”型、环状或栅栏状，此外还可见长丝状的菌体。

2.2 菌落形态

鲜血培养基出现溶血现象，普通琼脂培养基上呈中等大小的扁平菌落，表面光滑、边缘整齐、不透明；中间也有圆形光滑，透明水样的极小菌落；在肉汤培养基中呈均匀浑浊，有颗粒沉淀。

2.3 生化试验

发酵葡萄糖、水杨苷，24小时即产酸；甘露醇为阴性，在7天内不发酵蔗糖和乳糖。不产硫化氢和吲哚，不还原硝酸盐以及不利用枸橼酸盐。由于条件所限，生化试验未做全。

2.4 动物试验

小鼠腹腔注射后，出现体温升高，精神沉郁，食欲减少或废绝，口渴，全身衰弱、僵硬、咳嗽、腹泻、皮疹、呼吸困难、耳部和腹部皮肤发绀的症状；96小时注射菌液的小鼠全部死亡，对照组正常。

解剖发现脾脏、淋巴结、肺脏、肾上腺、心肌、胃肠道中有较小的坏死灶；取心血、肝脏、脾脏直接做抹片，镜检发现大量呈 “V”型、栅栏状或长丝状的革兰氏阳性杆菌。兔左眼眼结膜滴入菌液72小时出现化脓性结膜炎。

2.5 药敏试验

测量抑菌圈的直径，按其大小报告敏感程度。结果显示该菌株对头孢唑林钠、庆大霉素、复方磺胺甲恶唑、罗红霉素高敏，对乙酰螺旋霉素、诺氟沙星中敏，青霉素钠、呋喃唑酮低敏。

2.6 细菌鉴定仪鉴定结果

确诊为李氏杆菌。

3 小结

通过镜检、生化试验、细菌鉴定仪鉴定确诊为李氏杆菌病，通过药敏实验发现该菌株对头孢唑林钠、庆大霉素、复方磺胺甲恶唑、罗红霉素高敏，建议该猪场使用这些药物进行治疗。

由于该病多呈零星散发，发病率较低，且第一头发病时，病程短、死亡急，有的仅见神经症状，有的甚至不见任何症状就突然死亡。

一旦发生该病，常误诊为常见病如伪狂犬病、水肿病、猪瘟、乙脑等，误诊后的治疗导致仔猪病死率增加。故在临床上，要根据发病情况、临床症状、用药情况结合剖检变化和实验室诊断等进行鉴别诊断，做到早确诊早治疗。

应采用一头发病全窝用药的措施，保护健康猪群，提高治愈率，减少仔猪的死亡。

目前针对猪李氏杆菌病尚无很好的控制方案，疫苗尚在研制，因此要加强饲养管理，增强猪只抵抗力，处理好猪只粪尿，减少饲料和环境中的细菌污染，定期消毒，严格控制继发感染。