一例PRV、PCV2 和Hps 混合感染的诊治与思考

廖拥民

（湖南省汨罗市农业农村局动物疫病预防中心，湖南汨罗414400）

猪圆环病毒2 型（PCV2）在我国猪场广泛流行，仔猪感染该病后可出现系列临床症状，如仔猪皮炎肾病综合征和断奶仔猪多系统衰竭综合征等，母猪则会出现繁殖障碍性疾病，如返情、空怀、流产等[1]。猪伪狂犬病毒（PRV）为疱疹病毒科，可感染多种宿主动物（如猪、牛、羊等），不同发育阶段猪群感染该病引发临床症状有很大差异，仔猪和保育猪主要表现腹泻、呕吐、体温升高和神经症状，种猪则出现繁殖障碍性疾病[2]。副猪嗜血杆菌（Hps）为重要的细菌性病原，健康猪群感染该病原后不表现明显症状，往往处于隐性感染，当猪群免疫力下降时（如感染PCV2 和PRRSV 可导致猪群免疫抑制）感染该病可出现系列症状，仔猪主要表现为呼吸困难，最终因呼吸衰竭死亡[3]。

近年来，随着我国生猪养殖不断发展，疫病发生情况逐渐频繁化和复杂化，猪群出现两种或者两种以上病原混合感染情况十分常见，这导致疫病的诊断与防控较为困难[1]。为提高广大养殖户对猪混合感染疫病的诊断水平和防控意识，本文通过对近期汨罗市某猪场发生的一起典型猪多种病原混合感染疫病的诊断与治疗过程进行介绍，具体如下：

1 猪场发病情况

汨罗市某养猪场户饲养繁殖母猪8 头，育肥猪19 头，保育猪及仔猪分别为22 头和39 头。近一年以来，该场一直有仔猪或保育猪零星死亡现象，但养殖户未重视，2019 年8 月，大批仔猪发病，主要表现为皮炎、精神萎靡、体温升高、消瘦、腹泻、呕吐、呼吸困难等，部分仔猪有神经症状，如磨牙、发抖、角弓反张等，也有妊娠母猪出现繁殖障碍。

2 病理变化

对发病严重或无治疗价值仔猪进行剖检，可见病猪体表有大小不一的黑色结痂，腹股沟、颌下淋巴结充血并肿大，切面多汁；病猪肺脏实变，胸腔内有大量积液和纤维性渗出，导致肺脏和肝脏表面粘都有纤维，且心包内有黄色积液；肝脏质地变硬，肾脏表面有出血点；此外，部分关节肿大仔猪关节腔内有大量浑浊脓性液体。

3 实验室诊断

3.1 细菌性病原分离与鉴定

无菌采集病猪肺脏、淋巴结、胸腔积液和关节腔积液，充分研磨后过滤，以灭菌接种环蘸取少量滤液划线接种在大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）表面，37℃恒温箱内培养24～48h，期间定时观察培养基表面是否出现菌落，若出现菌落，则以革兰氏染色法对菌落进行鉴定，并将纯化的分离菌进行生化鉴定。结果发现，培养基置于恒温箱内24h 后其表面仅出现光滑且无色透明的针尖状菌落，48h 也未出现其它可视菌落；革兰氏染色后，可见单个细菌为杆状或丝状，且为革兰氏阴性菌，进一步生化鉴定结果发现该菌在葡萄糖、硝酸盐还原试验中呈阳性，但在氧化酶、木糖等反应中为阴性，因此可初步将其判定为Hps[3]。

3.2 细菌药敏试验

在TSA 培养皿表面随机挑选6 个Hps 菌落进行扩繁，用生理盐水适度稀释后分别涂布于新的TSA 培养基，待表面菌液快干燥后，在每个培养皿上贴上4 种不同的抗生素药敏纸片，置于恒温箱内24h 后测量抑菌圈直径，从而进一步衡量致病菌对不同抗生素的耐药性。结果发现，6 个Hps 分离株均对头孢菌素、头孢喹肟和环丙沙星等抗生素高敏，部分菌株对氟苯尼考、卡那霉素和阿莫西林高敏或中敏；对新霉素、阿米卡星、链霉素、庆大霉素和青霉素等中敏或低敏。

3.3 病毒性病原检测

将无菌采集的淋巴结、肺脏和肝脏等病变组织混合并研磨，按照DNA/RNA 提取试剂盒（购自洛阳爱森生物科技有限公司）对样品进行处理后提取核酸（DNA 和 RNA），并将 RNA 反转录为 cDNA。采用 PCV2、PRV、猪蓝耳病毒（PRRSV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪瘟病毒（CSFV）荧光定量检测试剂盒对样品中病原进行检测，其反应体系和反应条件参考试剂盒提供说明书，每个检测反应中均设置阳性和阴性对照。结果发现，病料中为PRV 和PCV2 阳性，其它病原检测均为阴性。

4 综合评定及紧急防治措施

4.1 诊断结果

根据病猪临床及病理诊断结果，结合实验室诊断结果可判定该猪场发生PCV2、PRV 和Hps 混合感染疫情。

4.2 紧急防治措施

根据诊断结果，我们建议养殖户采取以下紧急措施：（1）迅速将疑似发病或以发病猪群进行隔离饲养，淘汰并无害化处理发病严重猪；（2）对发病猪群紧急免疫接种伪狂犬病毒弱毒疫苗，不同发育阶段猪群接种量和频率有所差异，具体参考说明书进行；（3）对发病猪群肌注头孢喹肟注射液（2 mg/kg），每日1 次，连续使用3 日；（4）在饲料中添加乳酸环丙沙星（250g/t）、多维（1kg/t）和中草药粉末（如黄芪和板蓝根等），连续使用1 周，对全部猪群进行饲喂；（4）提高饲养管理水平，定时清扫并消毒栏舍，保持栏舍干燥通风等。此外，对发病猪群进行针对性治好，如止咳和降烧等。养殖户采取以上紧急措施3 周后，该场疫情得到有效控制。

5 讨论

近年来，我国大部分猪场发生疫病原因十分复杂，同时养殖企业（户）对疫病防控能力相对较差，导致多种病原混合感染较为常见，这也导致传统的临床诊断无法对疫病发生原因进行准确判断，继而影响进一步的治疗与防控[4]。本案例中猪场爆发严重疫病之前可能就有免疫抑制性疾病（PCV2）流行，但养殖户缺乏相关的防控意识，导致后期猪群感染PRV，继而继发感染Hps，而PRV 和Hps 均为烈性传染病，可使免疫抑制猪群出现高病亡率，继而造成严重的经济损失。

本文采用更加准确的实验室诊断技术（如细菌分离与鉴定、荧光定量检测技术等）对该场病猪病原进行诊断，由于实验室诊断技术具有高敏感性和准确性，可降低误诊或漏诊的可能性，同时通过对分离菌株进行高敏抗生素筛选，根据实验室诊断结果，对猪群进行针对性治疗与进一步防控，可在短期内控制疫病的流行，减少相关经济损失。 □