葡萄病毒病脱毒技术

文/李大志 周 敏 聂松青 刘昆玉 邓子牛

葡萄病毒类病害已由1999年的17个属，47种，增加到2003年的25个属，55种。目前国内己报道的葡萄病毒病有11种，其中扇叶病、卷叶病、茎痘病、栓皮病和斑点病等在我国各葡萄产区分布广泛，且病害复合侵染现象比较普遍。

脱毒是葡萄无毒化栽培中的关键技术，也是葡萄产业持续健康发展的保障。目前葡萄的脱毒技术主要是茎尖培养结合热处理，这种技术是茎尖培养和热处理脱毒的优势互补，而且比单纯的热处理脱毒或茎尖培养脱毒效果都要好。另外，还有茎尖培养结合药剂处理来脱除病毒，病毒唑、板蓝根、病毒钝化剂等药剂结合茎尖培养都可以取得良好的效果，而茎尖微芽嫁接操作难度较大，不宜在生产中推广应用。在脱毒过程中，培养基和热处理温度选择最为重要。以下重点针对目前葡萄主栽品种综述它们的脱毒技术，作为生产无病毒葡萄苗木的参考。

一、酿酒葡萄品种

单芽段消毒时间为70%酒精液浸洗10秒钟，0.1%升汞水振荡消毒7分钟。培养基基本成分和条件相同，分别是蔗糖浓度2%、琼脂浓度0.4%～0.6%，pH 值 5，培养温度为（25±3） ℃。

北方酿酒葡萄品种：赤霞珠、霞多丽、黑品诺最适培养基分别为B5+IAA 0.2 mg/L+6-BA 0.01 mg/L；B5+IAA 0.2 mg/L+6-BA 0.015 mg/L；B5+IAA 0.2mg/L+6-BA 0.005mg/L。热处理温度最初为25℃，约一周逐渐升温至（37±1）℃，在该条件下培养约2个月，能达到100%的脱毒效果。

南方酿酒葡萄品种：刺葡萄抗病性较强，较难感染葡萄病毒病，其叶片愈伤组织最佳诱导培养基为ZT 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L，增殖培养为ZT1.0mg/L+NAA 0.01mg/L为佳。毛葡萄最适茎尖培养基为B5+BA 0.5 mg/L+IAA 0.1mg/L，生根培养基为1/2MS+BA 0.2mg/L+IAA 0.6 mg/L。热处理选择白天37℃处理8小时，晚上22℃处理16小时，变温方法处理10～15天。

▲葡萄卷叶病毒在红色果实的品种上引起叶片反卷、叶肉变红而叶脉保持绿色

▲葡萄病毒导致的葡萄茎基部形成大量茎痘斑

二、鲜食葡萄品种

3～4 cm单芽茎段先用自来水冲洗10分钟，再以0.1%升汞浸泡7分钟。培养基中琼脂浓度0.75%，蔗糖浓度2.5%，pH值5.8。

藤稔：诱导藤稔芽原基的最适培养基为1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L，培养温度23±2℃；增殖、生根最适培养基是GS+IBA 0.3 mg/L，培养温度28℃。

▲葡萄卷叶病毒在绿色果实的品种上引起叶片反卷

红宝石无核、优无核、红地球、美人指最适初始培养基配方分别为l/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L；红地球 l/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L；优无核l/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L；美人指 l/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L；最佳分化培养基配方分别为:B5+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L；B5+KT 1.0 mg/L+NAA 2.2 mg/L；B5+KT 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L；B5+KT 1.0 mg/L+NAA 2.2 mg/L。 热处理是先预热处理 （32℃）7天，后将温度升至38℃，恒温处理20天。

葡萄脱毒技术是葡萄无病毒繁育的关键步骤，南北方种植的酿酒葡萄、鲜食葡萄品种不一，各品种对培养、热处理要求也不尽相同，综合不同葡萄品种脱毒关键因素是作为实际脱毒的参照。暂没有报道脱毒的葡萄品种，可以参考已有的脱毒技术，也可以对比相似的脱毒品种来筛选培养条件和热处理条件，以便尽快建立健全我国葡萄无病毒繁育体系。