腹腔内窥镜输精技术在哈萨克羊改良中的应用

陈童 吐来力江·哈木太 阿依努尔·亚森 罗永明*

（1，新疆畜牧科学院畜牧研究所 830011；2，伊犁州畜牧总站 835000）

在哈萨克羊与特克赛尔羊杂交改良中，杂交优势在杂交后代中得到良好的体现。为了提高冻精的受胎率、较少冻精用量、降低成本，借助内窥镜输精技术进行杂交改良。绵羊腹腔内窥镜输精技术是澳大利亚在20 世纪80 年代初最先使用的一种打破绵羊传统人工输精的繁殖技术，该技术通过腹腔内窥镜手术操作将精子直接注入母羊子宫角，与传统人工授精相比，精子避开了通过子宫颈口才能进入子宫内的路线，从而使进入子宫的精子更多，受胎率得到显著提高[1]。利用腹腔内窥镜输精技术具有剂量低、精度高、效率高的繁殖生产优势，发挥优秀种公畜利用率，提高繁殖生产效率增加养殖收益，对加速推动良种化产业进程，实现工厂化、专业化生产具有重要意义[2]。

1 材料与方法

1.1 时间地点

本次输精工作于2019 年9 月底在新疆伊犁昭苏县军马场肉羊繁育中心开展。

1.2 仪器设备

卡尔史托斯内窥镜头、便携光源、穿刺套管针（德国）、卡苏输精枪（法国）、羊胚胎移植架、显微镜、恒温水浴锅、液氮罐。

1.3 动物

放牧饲养的哈萨克母羊，年龄在2～5 岁，膘情中上等，健康无繁殖疾病。

1.4 药品

羊用阴道海绵栓（澳大利亚）、孕马血清促性腺激素（宁波市三生药业有限公司）、促排卵素3 号（宁波市三生药业有限公司）、酒精、碘酒。

1.5 冻精

进口特克赛尔羊细管冻精（0.25ml/支）。

2 方法

2.1 同期发情

海绵栓经过抗生素处理后，用海绵钳或埋拴器将海绵栓放入母羊阴道中，放置时注意控制好深度。放置12～13d 后取出海绵栓，同时肌肉注射PMSG 400IU/只，撤栓后分别在24、36、48 和60h 用公羊进行试情，做好发情记录和标记，8～10h后对发情羊进行输精。

2.2 母羊准备

试情前对羊群控制饮食，接受输精前发情羊禁食断水12h以上。在输精时将母羊保定在羊胚胎移植架上，对乳房向下20cm 腹中线两侧3～4cm 区域进行刮毛并消毒，铺垫创布遮挡羊毛避免污染。

2.3 精液准备

将室温控制在18～25℃，把细管冻精放置在39℃的水浴锅中，在水浴中摆动细管10～15s 进行解冻，解冻完成后从水浴锅中取出，快速将细管上残留的水珠擦干，剪去封口端，取少量精液在显微镜下检查精液活力，精子活力高于0.3 才可用于输精，绵塞端安装在内窥镜输精抢钢芯上，备用。同批次精液在输精过程中随时抽检精液活力。

2.4 输精状态

将准备好的羊胚胎移植架倾斜45～60°。手握紧羊皮将皮肤与肌肉层错位，选择在乳房向下10cm 左右的位置将穿刺针尖顶住皮肤持续用力，向对侧斜下方刺穿皮肤层与肌肉层，抽出穿刺针，使用外套管钝性穿破腹膜。放入内窥镜镜头和拨棒相互配合，观察子宫角的充血状况与卵巢上卵泡情况，翻动子宫动作要轻缓，参见图1～2。此时发情良好的母羊子宫角会有充血情况，卵巢上会有一个大的卵泡，少数会出现两个较大卵泡，感观卵泡处在透亮即将排卵状态或有新生排卵点。在此时实施输精可以获得较为理想的受胎率。如果看到子宫角颜色苍白无充血状态，形态卷缩，卵巢无明显优势卵泡，说明该母羊并没有处于发情期，不满足输精条件的母羊不予以输精操作[3]。

2.5 输精位置

用拨棒把子宫调整到合适位置，在子宫角正面上1/3 处刺入输精针，输精枪的针尖刺入子宫角时要掌握好位置和刺入力度。把精液缓慢打入子宫角，注意刺入深度和输精时子宫的变化，避免精液被打入子宫壁。无法在子宫正面进行刺入时可选择侧面，避开皱褶多的位置，尽量确定针头在子宫腔内。采用双侧子宫角输精的方式，完成一侧子宫角的输精后可使用同样手法对另一侧子宫角进行输精。每只母羊使用1 支细管冻精，单侧子宫角精液量约0.1ml。输精后肌注促排卵素3 号，整个输精过程尽快完成，未见优势卵泡的羊不做输精。一般来说，青年母羊的子宫角比较细而且硬，针头容易刺入；母羊随着年龄和产羔次数的增加，子宫角会逐渐变大变软，输精枪针尖扎入难度就会增大。

2.6 输精后护理

在完成输精处理后，由于创口比较小，可以不进行缝合，用碘酒对穿刺部位进行消毒处理。放牧过程中跟随观察，避免采食过多，以半饱为宜，2d 后可正常饮食。

3 结果统计

由附表可知，将581 只哈萨克羊分成4 组进行同期发情处理，共发情532 只，发情率91.6%，输精过程中淘汰无优势卵泡的母羊54 只，实际完成腹腔镜输精478 只。35d 后对输精羊群进行B 超早期妊娠诊断，确定怀孕322 只，总体受胎率为67.4%。

附表 内窥镜输精情况统计

4 讨论

（1）在1987 年我国首次引入和应用腹腔内窥镜输精技术，由于当时国内肉羊养殖方式和产业结构相对落后，不适宜该技术的推广和应用，造成技术搁置[3]。近些年，肉羊规模化养殖程度不断扩大和提高，引种成本提高，难度加大。羊腹腔镜输精技术运用已逐步成熟，能熟练掌握操作的技术人员越来越多，此技术的使用在本地绵羊品种杂交改良和肉羊生产产业化等方面做出了很大贡献。虽然采用子宫角输精技术能有效减少冻精使用量且能较大幅度提高母羊受胎率，但受到场地条件、羊群集中情况、设备购买、技术熟练程度、劳动力成本及思想理念等因素的阻碍和限制，该技术在条件有限的情况下仅适合在管理规范的种畜场和规模化肉羊场中使用，大范围推广应用依存在一定难度[3]。

（2）腹腔内窥镜输精技术能成功避开复杂的羊子宫颈口结构阻挡精子通过，缩短了精子在子宫内的运行距离，增加了精子通过数量，降低了精子损耗，提高了母羊受胎率。在输精过程中，发情母羊子宫角和卵巢的情况可用内窥镜观察，在一定程度上可以避免羊假发情或安静发情造成的鉴定失误现象[4]。

（3）子宫角内膜肌层通常的厚度大约为2～3mm，输精针头刺入正确时会有进入空腔的手感。操作时输精枪的针头不能进入过浅或过深，针头停留在子宫角肌层不能顺利完成输精。针头刺入子宫角后可试探着输入精液，在内窥镜视野中观察针头周围是否有白色突起或精液溢出。此种情况表明针头没有准确刺入子宫角的腔体，精液注入受阻，应重新选择位置再刺入[5]。

图2 输精操作

（4）在集约化、规模化程度高的养殖场中能减少劳动力，提高工作效率的技术才能得到推广应用。在内窥镜输精工作中，利用公羊试情确定发情后再输精，需要投入大量人力、时间，而且不能保证试情结果完全准确，输精时观察卵巢进行发情鉴定，不但会延长输精时间，而且会造成应激，影响排卵与卵子接收，造成整体受胎率下降[6]。在使用鲜精进行内窥镜输精时，可以同期处理撤栓后48h 进行定时输精。不进行试情将大幅降低劳动力和时间投入，使内窥镜输精工作效率更高。