25%抗倒酯微乳剂气相色谱方法研究

李 婷，高婷婷，赵 霞，李 靖，许艳秋，高立明*

(1.四川省农业农村厅植物保护站，四川 成都 610045；2.成都市食品检验研究院，四川 成都 611135)

1 前言

抗倒酯(Trinexapac-ethyl)，CAS登录号为95266-40-3，分子式C13H16O5，分子量为252，化学名称为4-环丙基(羟基)亚甲基-3，5-二酮环己烷羧酸乙酯。抗倒酯为赤霉酸生物合成抑制剂，通过降低赤霉酸的含量控制植物旺长，可被植物茎、叶迅速吸收，根部吸收很少，是一种可有效降低株高，防治倒伏的植物生长调节剂[1]。

2008年由瑞士先正达作物保护有限公司首次在我国取得抗倒酯的临时登记，2010年取得正式登记。截止目前，在我国有27个取得农药登记证的抗倒酯产品，其中原药11个，微乳剂9个，乳油5个，可溶液剂1个，可湿性粉剂1个，登记作物和对象为：小麦防止倒伏、高羊茅草坪调节生长和玉米防止倒伏[2]。同时有研究表明，抗倒酯在水稻上使用时株高能得到有效控制，结实率高；可作为提高抗倒伏能力的植调剂应用于优质稻生产中[3-4]。抗倒酯在多花黑麦草、遮阴下狗牙根、甘蔗上也有相应研究表明其具有较好的抗倒伏作用[5-7]。

在检测分析方面，国内抗倒酯原药和乳油的液相色谱分析方法已有相关报道[8-9]，使用气相色谱检测抗倒酯的质量分数的方法未见报道，因此本文建立了抗倒酯微乳剂的程序升温气相色谱内标方法进行定量分析，实验结果表明该方法操作简便、快速，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，可为企业生产过程质量控制和质检机构检测提供参考。

2 实验部分

2.1 试剂和溶液 抗倒酯标准品，≥98.0%；25%抗倒酯微乳剂；磷酸三苯酯(分析纯)；丙酮(分析纯)；内标溶液配置：称取磷酸三苯酯0.64 g 于100 mL 容量瓶中，加入丙酮溶解并稀释至刻度，摇匀备用。

2.2 仪器和色谱操作条件 Agilent 7890A气相色谱仪(带FID检测器和工作站)；色谱柱：Agilent HP-1 毛细管柱(0.32 mm×0.25 μm×30 m)。

柱温(程序升温)：120 ℃保持2 min，以10 ℃/min 升至280 ℃，保持5 min；气化室温度：280 ℃；检测室温度：280 ℃；载气(N2)：1.0 mL/min；氢气(H2)：40 mL/min；空气：400 mL/min；分流比：40∶1；进样体积：1.0 μL；保留时间：抗倒酯约为12.3 min；磷酸三苯酯约16.3 min。典型的色谱图(图1、2)。

1-抗倒酯(12.246 min)2-磷酸三苯酯(16.263 min)图1 抗倒酯+磷酸三苯酯气相色谱图

1-抗倒酯(12.246 min) 2-磷酸三苯酯(16.264 min)图2 25%抗倒酯微乳剂+磷酸三苯酯气相色谱图

2.3 测定步骤

2.3.1 标样溶液的配制 准确称取抗倒酯标准品0.05 g(精确至0.000 2 g)，置于25 mL容量瓶中，用移液管准确添加5 mL内标溶液，用丙酮溶解并定容至刻度，摇匀，备用。

2.3.2 试样溶液的配制 准确称取25%抗倒酯微乳剂样品0.2 g(精确至0.000 2 g)，置于25 mL容量瓶中，用移液管准确添加5 mL内标溶液，用丙酮稀释至刻度，摇匀，备用。

2.3.3 测定 在上述色谱操作条件下，待仪器基线稳定后，连续数针标准溶液进样，当相邻2针抗倒酯和磷酸三苯酯的峰面积比值的相对变化<1.5%时，按照标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶液的顺序进样进行分析测定。

2.3.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针抗倒酯标样峰面积和内标物峰面积的比值分别进行平均，试样中抗倒酯的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

(1)

式中：A1——标样溶液中抗倒酯峰面积与内标峰面积比值的平均值；

A2——试样溶液中抗倒酯峰面积与内标峰面积比值的平均值；

m1—抗倒酯标样的质量，g；

m2—试样的质量，g；

ωs—标样中抗倒酯的质量分数，%。

根据化学分析方法验证确认和内部质量控制要求[10]，精密度试验中的变异系数不能超过Horwitz方程计算结果，精确性结果才是可接受的，Horwitz方程按(2)计算：

Horwitz方程：CV=2(1-0.5lgω)

(2)

式中：Horwitz方程计算值(%)；

ω——测定质量分数(%)。

3 结果与讨论

3.1 内标溶液的选择 选择合适的内标物才能准确测定抗倒酯的质量分数，本文使用癸二酸二丁酯、磷酸三苯酯、邻苯二甲酸二丁酯等多种常用的内标物质进行试验，样品在2～5 min有杂质干扰。其中癸二酸二丁酯、邻苯二甲酸二丁酯与待测样品中的杂质出峰位置相近，干扰其含量的测定，磷酸三苯酯的保留时间为16.3 min，在待测物质后面，与样品中的有效成分分离良好，且没有杂质干扰，样品各组分杂质能达到较好的分离，峰形对称。通过对相同条件下的出峰情况的比较，确定磷酸三苯酯为内标物质。

3.2 分析方法的线性相关性 分别称取98%抗倒酯标准物质0.031 7、0.042 7、0.052 1、0.067 6、0.080 8 g于25 mL 容量瓶中，准确添加内标溶液5 mL，用丙酮溶解并稀释定容，配制5个不同质量比的抗倒酯标准品溶液，按标准操作条件分别测定，以质量比为横坐标，以峰面积之比为纵坐标绘制标准曲线。抗倒酯线性关系数据(表1)，线性关系图(图3)。线性方程为y=0.684x+0.010 5，线性相关系数R2=1。

表1 抗倒酯分析方法的线性相关性试验结果

图3 抗倒酯分析方法的线性关系图

3.3 方法准确度 准确称取98%的抗倒酯标样0.223 1 g (准确至0.000 2 g)于100 mL容量瓶中，用丙酮溶解稀释至刻度，得2.186 mg/mL的抗倒酯标准溶液。称取已测定质量分数的不同质量的样品(准确至0.000 2 g)，准确加入10 mL已知质量抗倒酯标准溶液(2.186 mg/mL)，分别测定抗倒酯的回收率，其结果如(表2)。抗倒酯的添加回收率在99.28%～100.43%之间，平均添加回收率在99.86%，满足定量分析对回收率的要求。

表2 抗倒酯添加回收试验结果

3.4 方法精密度 取同一抗倒酯微乳剂样品，按照上述分析条件6次平行测定，测得试样中抗倒酯的平均含量为25.26%，标准偏差为0.068 1，变异系数为0.27%(表3)，经由Horwitz公式检验，本分析方法的变异系数

表3 分析方法精密度试验结果

4 结论

本文通过对气相色谱分析条件的选择与优化，建立了抗倒酯微乳剂的程序升温气相色谱内标分析方法。实验结果表明，本方法对测定25%抗倒酯微乳剂的有效成分含量具有简便、快速的优点，线性关系良好，准确度和精密度高，可用于抗倒酯有效成分质量分数的质量控制和检测。