高效液相色谱-串联质谱法同时测定果蔬汁中9种农药残留

朱光艳，孙丰收，崔 凯，郑尊涛，龚 勇，朴秀英，李富根*

(1.农业农村部农药检定所，北京 100125；2.山东农业大学环境毒理研究中心，山东 泰安 271001；3.江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所，江苏 南京 2100140)

果蔬汁通常是以新鲜或冷藏的蔬菜、水果为原料，经过物理方法如压榨、离心、萃取等加工而成的汁液产品，因其兼有天然、营养、保健、口感好等特点，消费量日益增长[1]。目前，全球消费的果蔬汁饮料已超过800亿L，预计到2020年，全球果蔬汁饮料消费总量将达到1 050亿L[2]。但是，果蔬汁饮料中农药残留问题值得关注，在果蔬原料的生产过程中，为保证其产量及质量，各类农药被广泛使用，加工后的果蔬汁中就会不可避免的产生农药残留[3]。因此，为适应食品安全监管的需要，维护消费者的合法利益，建立果蔬汁中快速、准确、高效的农药残留检测方法至关重要。

目前，应用于果蔬汁中农药残留检测的方法主要有气相色谱法(GC)[4～5]、液相色谱法(HPLC)[6～7]、气相色谱-质谱法(GC-MS)[8～10]、液相色谱-质谱/质谱法(HPLC-MS/MS)[11～13]等，其中HPLC-MS/MS具有高灵敏度、高准确度、高通量等特点，被广泛应用于农药多残留分析之中。李岩等[11]建立了浓缩果蔬汁中156种农药多残留的快速筛查测定方法，样品采用1%醋酸乙腈溶液萃取，Waters Sep-Pak Vac固相萃取柱净化，以HPLC-MS/MS在正离子多反应监测(MRM)模式下进行测定，156种农药在5种浓缩果蔬汁中平均回收率范围为57.2%～122.7%，相对标准偏差为0.9%～19.8%，定量限(LOQ)为0.33～189.23μg/kg。本研究针对市场上常见的一些农药品种，采用固相分散净化结合HPLC-MS/MS检测技术，建立了果蔬汁中9种农药多残留同时检测分析的方法，为果蔬汁中农药残留快速检测提供了技术支持。

1 实验部分

1.1 主要仪器 Thermo Finnigan-TSQ Quantum液相色谱-质谱联用仪：配电喷雾离子源(ESI)；IKA SIGAM 4-15离心机；METTLER AE240、PC4000分析天平；IKA VORTEX GENIUS 3涡旋混合仪；0.22μm有机滤膜等其他实验室设备。

1.2 主要试剂 乙腈为色谱纯，氯化钠、无水硫酸镁、柠檬酸为分析纯，乙酸为优级纯，水为GB/T 6682中规定的一级水；标准品由农业农村部农药检定所提供。

1.3 样品前处理 量取20mL果蔬汁样品于100mL塑料离心管中，加入20mL乙腈剧烈震荡1min，再加入1.5g柠檬酸、1g氯化钠，4g无水硫酸镁，剧烈震荡1min，4 000r/min转速下离心5min，取上清液10mL于15mL塑料离心管中，加入0.4gPSA、1.2g无水硫酸镁，剧烈震荡至混合均匀后，涡旋混合3min，4 000r/min转速下离心5min，取上清液过0.22μm有机滤膜，上机待测。

1.4 检测条件 色谱柱C18，100mm×2.1mm，粒径5μm；进样体积10μL;流动相为0.05%乙酸水溶液-乙腈，梯度洗脱程序(表1)。

表1 梯度洗脱程序

质谱条件：电喷雾离子源ESI，正离子模式；喷雾电压：3 500V；脱溶剂气温度350℃；鞘气(N2)压力20psi；辅助气(N2)压力10psi；碰撞气(Ar)压力1.5mTorr；多反应监测模式(MRM)，多反应监测条件(表2)。

表2 多反应监测条件

9种农药的标样谱图(图1)。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线 准确称取一定量的标准品(精确至0.1mg)，以乙腈溶解并稀释，配制成一系列标准溶液，其中敌敌畏、毒死蜱浓度分别为0.05、0.1、0.2、0.5和1mg/L，其他浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.2、0.5和1mg/L，按1.4条件测定，得到9种农药的标准曲线。线性回归方程及相关系数R2(表3)。

2.2 添加回收 将空白果蔬汁加入标样，充分混匀后静置2h，做3个水平的添加回收，每个添加浓度重复5次，按1.3方法进行前处理，1.4条件测定。在3个添加水平下，9种农药的回收率在70.3%～105.9%之间，相对标准偏差在1.0%～11.5%之间。添加回收浓度、回收率及相对标准偏差(表4)。

2.3 定量限 根据添加回收试验，敌敌畏、毒死蜱定量限为0.05mg/kg，其他定量限为0.01mg/kg(表4)。

图1 9种农药的标样谱图(敌敌畏、毒死蜱为0.1mg/L，其他为0.05mg/L)

序号农药名称线性回归方程相关系数R21苯醚甲环唑y=1 245 293x+7390.999 82敌敌畏y=48 912x+12 8670.995 03毒死蜱y=17 765x-3950.998 24多效唑y=7 064 578x+149 2420.996 55甲胺磷y=72 213x+35 5540.998 96嘧霉胺y=2 944 943x+70 2120.996 37噻虫嗪y=95 260x+9130.999 78乙草胺y=6 384 180x+148 0260.995 69莠灭净y=40 374 928x+916 0760.994 8

表4 回收率(n=5)及相对标准偏差

3 结论

本文采用乙腈提取，固相分散净化，液质检测，建立了果蔬汁中9种农药的检测方法，并对方法的回收率和精密度进行了探究。在3个添加水平下，回收率及相对标准偏差均满足检测要求。本方法简便快捷、灵敏可靠，为果蔬汁中农药残留量的测定提供了一种简单高效的检测方法。