甲霜灵、霜霉威在人参中的残留检测方法研究

时间：2024-05-28

毛健伟，刘建国，刘哲，王大川，朱翔宇，祁颖慧

(吉林省农业技术推广总站，吉林长春 130033)

甲霜灵(metalaxyl)：化学名称：N-(2-甲氧基乙酰基)-N-(2,6-二甲基苯基)-DL-α-氨基丙酸甲酯，化学分子式：C15H21NO4，水中溶解度8.4(g/L，22℃)。甲霜灵具强内吸性和治疗、保护作用，其杀菌作用机理是抑制病菌RNA的合成，从而抑制真菌的蛋白质合成，甲霜灵在我国已取得登记，主要用于防治人参疫病、黄瓜霜霉病、马铃薯晚疫病、烟草的黑胫病、葡萄的霜霉病等。

霜霉威盐酸盐(propamocarb hydrochloride):化学名称：N-〔3-(二甲基氨基)丙基〕氨基甲酸丙酯盐酸盐，化学分子式：C9H21CLN2O2，水中溶解度>500(g/L，20℃)。霜霉威是一种高效、广谱、内吸性的氨基甲酸酯类杀菌剂，其杀菌机理是抑制病菌细胞膜成分的磷脂和脂肪酸的生物合成，进而抑制菌丝生长、孢子囊的形成和萌发,具有保护和治疗双重作用。霜霉威在我国已取得登记，其制剂为有效成分为霜霉威盐酸盐，主要用于防治人参、甜椒、烟草、葡萄等霜霉病及疫病。

精甲霜灵用于防治人参锈腐病、立枯病，推荐有效成分用药量：4 500～9 000g/ha，施药方法：土壤处理，播种前或移栽前使用，每年最多使用1次，安全间隔期135d，霜霉威用于防治人参疫病，推荐有效成分用药量758.1～1 516.2g/ha，施药方法：茎叶喷雾，危害发生初期使用，每年最多使用1次，安全间隔期21d。同时，有研究表明两者药物混用，对于疫病没有交互抗性。

人参是我国传统中药材，被誉为百草之王，是我国重要的出口药材。目前，我国尚未制定甲霜灵、霜霉威在人参上的MRL(农药最高残留限量)值，欧盟规定甲霜灵、霜霉威在人参上的MRL值均为0.05mg/kg[5～6]。甲霜灵在人参、黄瓜等作物上的残留研究[7～8]及霜霉威盐酸盐在番茄、黄瓜、马铃薯等作物上的残留[9-11]已有相关报道，但2种农药在人参上的残留研究尚未见报道。本文建立高效液相色谱串联质谱法检测鲜园参和生晒参中的甲霜灵、霜霉威盐酸盐的残留量，结果表明，方法快速，精密度好、回收率高，满足残留分析要求。

1 试验部分

1.1 试剂与仪器

1.1.1 试剂甲霜灵标准品：纯度99.2%，国家农药质量监督检验中心(北京)；霜霉威标准品：纯度99.7%，北京勤诚亦信科技开发有限公司；乙腈：色谱纯，sigma-aldrich；氯化钠：北京化工厂；硫酸镁：北京化工厂；C18：Agela technologies；甲酸：CNW；乙酸铵：CNW。

1.1.2 仪器液相色谱-质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI)安捷伦1200-6410；分析天平：XSE204，Mettler Toledo；匀质机：C25，Henc；离心机：北京医用离心机厂LD5-2A；超声波清洗器：SK8210LHC，上海科导超声仪器有限公司；组织捣碎机：CombiMax 600，Braum；植物粉碎机：Cyclotec 1093，FOSS。

1.2 仪器条件

1.2.1 色谱条件色谱柱：Zorbax eclipse plus C182.1×100mm (Agilennt公司) ；流动相：0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵水溶液：乙腈梯度洗脱，洗脱程序(表1)；柱温25℃；进样量：5μL；流速：0.3mL/min。

表1 梯度洗脱参数

1.2.2 质谱条件质谱扫描方式：多反应监测(MRM)；扫描方式：正离子扫描；离子源：ESI；毛细管电压：+3.5kv；干燥器温度：350℃；干燥器流速：10L/min；质谱其他条件(表2)。

表2 甲霜灵、霜霉威测定的质谱离子对、锥孔电压、碰撞能量

1.3 样品制备

1.3.1 鲜园参取鲜参切分成碎块，捣碎制成均匀的浆状。

1.3.2 生晒参取生晒参切分成碎块，用植物粉碎机粉碎，过0.18mm孔径筛。

1.4 样品制备

1.4.1 鲜园参称取2g试样(精确至0.01 g)于50mL 离心管中，加入1mL水和10mL乙腈，涡旋混合1min后，分别加入1gNaCl和1g无水MgSO4，摇匀后以4 000r/min速度离心5min，取3mL上清液于10mL离心管中，加入40mgC18净化剂，摇匀后以4 000r/min速度离心5min，取上清液过0.22μm有机相滤膜，供液相色谱质谱分析。

1.4.2 生晒参称取1g试样(精确至0.01 g)于50mL 离心管中，加入2mL水超声提取10min后，加入10mL乙腈，涡旋混合1min后，分别加入1gNaCl和1g无水MgSO4，摇匀后以4 000r/min速度离心5min，取3mL上清液于10mL离心管中，加入40mgC18净化剂，摇匀后以4 000r/min速度离心5min，取上清液过0.22μm有机相滤膜，供液相色谱质谱分析。

2 结果与讨论

2.1 净化剂的选择人参基质比较复杂，为了减少杂质的干扰，需要进行净化处理。分别采用的C18和PSA剂量分别为20mg和40mg进行分散固相萃取净化，结果表明，C18剂量在40mg净化，回收率符合农残分析要求。

2.2 分析方法的线性相关测定在1.2条件下，由对甲霜灵和霜霉威在0.02～1mg/kg浓度范围内制备0.002、0.004、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1 mg/kg共8个浓度水平的标准溶液进行测定，以浓度与峰面积进行线性回归分析。试验结果表明，标准溶液的浓度与其相应的响应值均具有良好的线性关系。甲霜灵和霜霉威的线性方程分别为Y=1.25e7X-6.85e3和Y=6.80e6X+3.88e3，线性相关系数(R2)分别为0.996 8和0.999 8。

2.3 精密度、回收率试验采用添加法，在样品中添加已知含量的标准品，在上述条件下进行测定，添加水平分别为0.02、0.1、1mg/kg，每水平单独测定10次，实测值、回收率和精密度试验结果(图1、表3～4)。

图1 A:甲霜灵和霜霉威混合标准溶液的MRM色谱图(0.02mg/kg)；B:空白样品MRM色谱图；C：甲霜灵和霜霉威人参添加样品的MRM色谱图(0.02mg/kg)

添加物名称基质添加水平(mg/kg)实测值123456789100.020.0160.0180.0220.0210.0210.0210.0200.0200.0210.020生晒参0.10.1010.0970.1010.1020.1000.0960.0990.0990.1010.101甲霜灵10.9840.9601.0000.9840.9830.9630.9590.9460.9730.9520.020.0200.0210.0200.0200.0210.0200.0200.0200.0190.019鲜园参0.10.1030.1040.1020.0970.0970.0960.1010.0990.0940.09810.9070.9280.9130.9070.9160.8940.8950.8840.8820.8720.020.0190.0190.0220.0210.0210.0200.0200.0180.0200.020生晒参0.10.0870.0760.0850.0890.0850.0830.0810.0830.0830.082霜霉威11.0220.9881.0230.8741.0690.9480.9430.9881.0110.9550.020.0220.0200.0210.0200.0200.0200.0190.0210.0160.019鲜园参0.10.1010.0940.0910.0970.1000.0970.0930.0890.0960.09310.9210.8950.8860.8920.9190.8810.8060.8850.8420.866

表4 不同添加水平平均回收率及精密度数据(n=10)

续表