蒸馏酒及配制酒中氰化物测定方法的改进

蔡灵利，许晶冰

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆401121）

蒸馏酒及配制酒中氰化物测定方法的改进

蔡灵利，许晶冰

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆401121）

介绍了对GB/T 5009.48—2003中异烟酸-吡唑酮法测定酒中氰化物方法的改进与研究，优化了样品前处理过程，解决了样品pH值调节超出定容体积，部分样品加入异烟酸-吡唑酮显色后会产生白色浑浊等问题。结果表明，该方法加标回收率为92.5%～98.1%，检出限为0.1 mg/L，RSD＜5%。

氰化物； 酒； 异烟酸-吡唑酮法

食品安全是国家和公众近年来普遍关注的问题，氰化物是严重危害食品安全的剧毒化合物。因此氰化物是酒类的一项重要食品安全检测指标。白酒中的氰化物主要来自原料，以木薯和木薯类粮食酿造的酒，因它们含有氰苷类物质，在生产过程中会水解生产氢氰酸。虽然大部分氢氰酸在原料蒸煮时可挥发，但仍有少量残留在酒中。

国标GB/T 5009.48—2003《蒸馏酒与配制酒卫生标准的分析方法》[1]规定了酒中氰化物的检测仲裁方法，但是该方法存在以下两个主要问题：(1)由于对化学试剂的用量和浓度有明确的规定，在调节溶液的pH值时只有0.8 mL的加液量，这样很容易造成加入的试剂超出定容体积；(2)在样品中加入异烟酸-吡唑啉酮溶液时会出现白色浑浊现象，干扰显色反应发生。有研究表明，出现浑浊是由于酒样中含有的醛类物质和高级醇类导致[2]。针对这两个问题，本文对国标方法进行了改进与优化。

1 材料与方法

1.1 样品、仪器与试剂

白酒样品：共6种，选取市售白酒，根据香型不同，分别为浓香型白酒2种、清香型白酒2种、酱香型白酒2种。

试剂：乙酸（1+6），NaOH（2 g/L），NaOH（20 g/L），酚酞-乙醇指示剂（10 g/L），磷酸盐缓冲溶液（pH7.0），氯胺T溶液(10 g/L)，异烟酸-吡唑啉酮溶液。以上试剂均按国标法配制。

氰化物标准溶液：标准浓度50.00 μg/mL（以CN-计），中国计量科学研究院GWB（E）080115。

氰化物标准使用溶液：吸取2.00 mL氰化物标准溶液，用NaOH（2 g/L）定容于100 mL容量瓶中，浓度为1.00 μg/mL（以CN-计）。

JENA SPECORD 210 PLUS紫外可见光分光光度计；优莱博SW22恒温水浴锅；IKA MS 3涡旋仪；梅特勒PE20 pH计。

1.2 实验方法

1.2.1 样品处理

准确吸取1.00 mL样品于10 mL具塞比色管中，加入400 μL氢氧化钠（20 g/L），涡旋混匀，放置5 min（如样品有颜色或浑浊，则先按照国标法进行蒸馏脱色）。另取氰化物标准液（1.00 μg/mL）0.00、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL分别置于10 mL具塞离心管中。

1.2.2 pH值调节

打开管塞，将样品管及标准管置于80℃水浴中蒸发50 min，取出冷却至室温。分别加入纯水2.00 mL，酚酞指示剂1滴，滴加乙酸（1+6）调至溶液红色褪去，后用氢氧化钠（2 g/L）滴至浅红色。

1.2.3 显色及测定

于各管中分别依次加入2.00 mL磷酸盐缓冲溶液（pH7.0），0.2 mL氯胺T溶液(10 g/L)，2.00 mL异烟酸-吡唑啉酮溶液，定容至刻度（注：每步骤加液后均需混匀并反应2 min）。将各管置于30℃下放置30 min，以1 cm比色皿于638 nm波长处测吸光度。根据标准溶液测得吸光度及对应标准品浓度，绘制标准曲线，以外标法计算样品中氰化物含量。

2 结果与分析

2.1 NaOH加入量的选择

国标GB/T 5009.48—2003中规定取1.00 mL样品后加NaOH（2 g/L）至5 mL。方法中加入过量的NaOH是为了保证将样品中氰化物完全固定，但液体加至5 mL后，用于调节pH值的加液量仅有0.8 mL。而显色反应要求严格控制在pH7.0的条件下进行，因此为实验造成了较大难度，溶液总量很容易超过定容体积。因此，本实验使用较高浓度的NaOH来固定氰化物以减小加液体积，与国标中加入NaOH含量一致，保证了氰化物的充分固定，也增加了调节pH值的加液体积。

2.2 加显色剂后样品浑浊的处理

根据样品检测情况，加显色剂后出现白色浑浊的样品以酱香型白酒最多，浓香型白酒次之，清香型白酒最不易出现浑浊。这也印证了产生浑浊的物质多为醛类和高级醇类。即酒中的香味物质越丰富，沉淀越易产生。由于醛类和高级醇类都具有较强的挥发性，因此，本研究采用样品加碱固定后，80℃水浴50 min的方法，将其挥发。

氰化物在碱性条件下稳定性很好，本文尝试使用沸水浴，90℃水浴50 min，80℃水浴50 min，70℃水浴50 min。实验结果证明，90℃、80℃水浴均能达到除去浑浊的效果，且样品加标回收率在91.2%～98.1%之间。从实验方便及节约能源角度出发，建议选取80℃水浴50 min。

2.3 显色终点的判定与pH值的相关性

国标法中规定调节pH值的终点为“近红色”，本文研究发现，红色的深浅与溶液实际pH值关系大致为：浅红色（pH7.05～7.4）；浅红色+0.5滴2 g/L NaOH（pH7.5～7.8）；浅红色+1滴2 g/L NaOH （pH7.8～8.3）。由此可见，调节pH值时应尽量滴至浅红色，以保证缓冲溶液能将pH值调节至显色反应要求的pH7.0。

2.4 线性范围、检出限、加标回收率

配制多个浓度的标准品进行线性范围及检出限分析，结果表明，加入标准品在0.5～2.0 μg范围内，氰化物浓度与试液吸光度有良好的线性关系。以氰化物质量（µg）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，回归方程为：y=-0.0069+0.2907x，R2=0.9996。以线性最低点作为仪器检出限，1.00 mL取样量计算，样品检出限为0.1 mg/L。

分别取1.00 mL样品，加入1.00 mL氰化物标准液（1.00µg/mL），按上述步骤处理样品并上机测定，样品加标后回收率在92.5%～98.1%之间，相对标准偏差（RSD）在1.42%～4.65%之间。样品分析及回收率、精密度见表1。

表1 样品分析及回收率、精密度（n=6）

3 结论

本研究在国标GB/T 5009.48—2003氰化物检测方法的基础上进行了优化，解决了国标方法中溶液超过定容体积以及加显色液后出现白色浑浊的问题，探讨了酚酞的颜色与试剂pH值间的关系，得到了较好的稳定性和回收率，方法简便可靠，能够满足检验机构对样品日常检验的要求。

[1] 中华人民共和国卫生部.蒸馏酒与配制酒卫生标准的分析方法：GB/T 5009.48—2003[S].北京：中国标准出版社,2004.

[2] 宋楠.测定酒中氰化物时比色液浊变的原因及对策[J].职业与健康,2003,19(10)：52-53.

[3] 黄选中,杜洪山,吕全勇.CTMAB-异烟酸-吡唑酮显色光度法测定白酒中氰化物的研究[J].湖北预防医学杂志,2001,12(1)：35-36.

[4] 王慧,张静,武瑾瑜,等.白酒中氰化物测定方法的改进[J].酿酒科技,2013(9)：59-60.

[5] 张文德,张光仲,郭忠.酒中微量氰化物的测定方法研究[J].中国食品卫生杂志,2004,16(3)：231-235.

[6] 李德豪.氰化物测定中糠醛干扰的消除研究[J].茂名学院学报,2002,12(8)：23-26.

[7] 徐向阳,翟凤兰.杏仁露中氰化物测定方法的研究[J].中国食品卫生杂志,2002,14(6)：20-22.

Improvement of the Determination Method of Cyanide in Distilled Liquor/Liqueur

CAI Lingli and XU Jingbing
（Chongqing Institute of Food&Drug Testing,Chongqing 401121,China）

The isonicotinic acid-pyrazole ketones method stipulated in national standard GB/T 5009.48—2003 for the detection of cyanide in liquor was improved.The pretreatment of liquor samples was optimized,which could settle the problems including liquor sample exceeding constant volume when adjusting pH value,and white precipitate in some samples after the addition of isonicotinic acid-pyrazole ketones,etc.The experimental results suggested that the recovery rate of the improved method was 92.5%to 98.1%, the detection limit was 0.1 mg/L,and RSD＜5%.

cyanide;liquor;isonicotinic acid-pyrazole ketones method

TS262.3；TS262.8；TS261.7

A

1001-9286（2017）06-0074-03

10.13746/j.njkj.2016355

2016-12-01

蔡灵利（1986-），女，本科，助理工程师，研究方向为食品检测。

优先数字出版时间：2017-03-27；地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20170327.1525.009.html。