微波辅助提取黄芪枸杞子中总多糖的工艺研究

邢炎华，陈玉凤，杨 敏，郭亚敏

(1.陕西国际商贸学院 医药学院，陕西 咸阳 712046;2.陕西省中药绿色制造技术协同创新中心，陕西 咸阳 712046)

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge. Var. Mongholicus (Bge.) Hsiao 或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge. 的干燥根，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血等功效；枸杞子为茄科植物宁夏枸杞LyciumbarbarumL. 的干燥成熟果实，具有滋补肝肾、益精明目的功效[1]。现代药理研究表明黄芪、枸杞子水提液具有增强免疫力、抗氧化、抗肿瘤等作用[2,3]。通过对1∶1配伍的黄芪枸杞子中总多糖的工艺进行研究，为1∶1配伍的黄芪枸杞子中多糖的应用提供伦理依据。

1 实验材料

紫外分光光度计(北京普析TP-1810)、微波消解仪(上海屹尧科技WF-4000)、浓硫酸、苯酚、D-无水葡萄糖(上海源叶生物)；黄芪、枸杞子(购于陕西龙海医药有限公司)

2 实验方法

2.1 对照溶液的制备

精密称取无水葡萄糖对照品10 mg置于50 mL的容量瓶中，加水溶解稀释至刻度。从已配置好的溶液中精密吸取1.0 mL置于25 mL容量瓶中加水稀释至刻度，作为对照溶液备用。

2.2 标准曲线的制备

精密吸取对照溶液0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 分别置于6支具塞试管中，分别加水补至5.0 mL ，再分别精密加入5% 苯酚溶液1 mL 摇匀，各支试管中再精密加入硫酸5 mL 摇匀，放置10 min后40 ℃水浴15 min，放置室温后在490 nm 处测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。

2.3 样品溶液的制备

黄芪枸杞按照1∶1 的配伍比例进行称取，将已称取的药材置于100 mL的三角瓶，然后按照设置好的单因素参数进行提取，滤过，滤液转移至50 mL的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.4 含量的测定

精密吸取样品溶液0.1 mL至具塞试管中再加水至2 mL，再精密加入5% 苯酚溶液1 mL 摇匀，再精密加入硫酸5 mL摇匀，放置10 min后40 ℃水浴15 min，然后放置室温后在490 nm 处测定吸光度。

2.5 单因素实验

2.5.1 提取时间 黄芪枸杞按照1∶1 的配伍比例各称取1.0 g，置于三角瓶中，固定料液比1∶20 、提取功率600 W、温度50 ℃，提取时间按照设置参数15 min 、20 min、25 min、30 min、35 min分别进行提取，滤过，滤液转移至50 mL的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.5.2 提取温度 黄芪枸杞按照1∶1 的配伍比例各称取1.0 g，置于三角瓶中，固定料液比1∶20 、提取功率600 W、提取时间25 min，提取温度按照设置参数40 ℃ 、45 ℃、50 ℃、55 ℃、60 ℃分别进行提取，滤过，滤液转移至50 mL的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.5.3 料液比 黄芪枸杞按照1∶1 的配伍比例各称取1.0 g，置于三角瓶中，固定提取功率600 W、提取时间25 min、提取温度50 ℃，料液比按照设置参数1∶10 、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30分别进行提取，滤过，滤液转移至50 mL的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.5.4 提取功率 黄芪枸杞按照1∶1 的配伍比例各称取1.0 g，置于三角瓶中，固定料液比1∶25 、提取温度50 ℃、提取时间25 min，提取功率按照设置参数300 W 、400 W、500 W、600 W、700 W分别进行提取，滤过，滤液转移至50 ml的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.6 正交设计

根据单因素实验结果，选择提取时间(A)、料液比(B)、温度(C)、提取功率(D)作为影响因素，提取液中多糖的含量作为评价指标，采用L9( 34)正交表设计试验。因素水平表见表1。

表1 因素水平

3 实验结果

3.1 标准曲线的制备

实验结果见图1 ，结果显示回归方程y=23.750x+0.0438 ( R2=0.9991 ) 在0.008 ～0.040 mg·mL-1范围内线性关系良好。

图1 葡萄糖的标准曲线

3.2 各因素对多糖含量的影响

单因素实验结果见图2 。从图2 可知在20 min 到35 min之间，多糖的含量与提取时间的关系是先升高再逐渐降低，在25 min时提取液中多糖的含量最高；料液比与多糖的含量关系为随料液比的增加多糖的含量总体呈增加的趋势，料液比达到1∶20 后，随料液比的增加多糖的含量增加缓慢接近于稳定状态；提取温度对多糖的含量影响是在45 ～55 ℃ 之间时温度与多糖的含量呈倒抛物线关系，在50 ℃时提取出的多糖单位含量最高；微波功率对多糖的含量影响为在500 W的功率下进行提取，多糖的含量最高。因此从单因素实验结果可以得出各因素对多糖含量影响的最佳参数为提取时间是25 min、料液比为1∶20、提取温度是50 ℃、微波功率为500 W。

图2 各因素对多糖含量的影响

3.3 正交实验结果

采用L9( 34)正交表对4种因素进行关联设计并进行实验，实验结果见表2、表3。从正交实验结果分析可以得出4种因素对多糖的含量影响为提取时间( A ) > 提取温度( C ) > 料液比( B ) >提取功率( D )；由表3方差分析结果可知提取时间、料液比及提取温度对多糖的含量有显著性影响，提取功率对多糖含量的影响无显著性。因此综合分析最终确定最佳提取工艺为提取时间30 min，提取温度45 ℃，料液比为1∶30，提取功率600 W。

表2 正交试验设计及多糖含量

表3 方差分析

3.4 工艺验证

分别称取三份1:1配伍的黄芪枸杞子，按照最优工艺条件进行提取，提取液定容至50 mL 量瓶中，待测。测得三次实验提取液多糖含量为14.13 mg·g-1、13.12 mg·g-1、14.28 mg·g-1，平均含量为13.84 mg·g-1，RSD为4.56 %。结果表明该工艺稳定、可靠。

4 讨论

黄芪和枸杞子是一种药食两用的中药材，黄芪和枸杞子水提液都具有一定的抗氧化等药理作用[8～12]，且黄芪多糖作为一种增强免疫力的中药也在广范应用。黄芪和枸杞子两药配伍之后不但可以作为一种保健食品进行服用，也可以通过进一步的研究提升为一种中药产品服务于市场。笔者主要研究了黄芪枸杞子组方中多糖的提取工艺，该工艺的研究为黄芪枸杞子组方中多糖的进一步开发和应用提供了一定的理论依据。该工艺与传统水煎煮相比其优势为提取温度低和提取效率高，可大大的减低生产成本和提高生产效率。