正交试验法优选盐菟丝子的工艺研究

种 振，高 波，罗 川，胡 雨

(1.安徽华润金蟾药业股份有限公司，安徽 淮北 235000 ；2.华润三九医药股份有限公司，广东 深圳 518000)

菟丝子是南方菟丝子CuscutaaustralisR.Br.或菟丝子CuscutachinensisLam.的成熟种子。味辛、甘，平，具有固精缩尿，安胎，明目的功效[1～3]。菟丝子的主要化学成分有黄酮、有机酸、氨基酸及脑磷脂等[2,4～5]。临床上多用于肾虚胎漏，胎动不安，目昏耳鸣，脾肾虚泻；外治白癜风[1～2]。金丝桃苷是菟丝子的主要单体成分之一，具有较强的抗氧化功能[6]。菟丝子盐炙后能引药归肾，增强补肾固涩的作用，用于下元虚弱、腰膝酸软等。临床常用的炮制品为盐菟丝子，通常采用盐炙法进行加工炮制[2,7～9]。《中国药典》2015版描述的盐菟丝子炮制工艺缺少可控的工艺参数[10]。目前，关于盐菟丝子炮制工艺研究的文献[7～8]，多以金丝桃苷、槲皮素等为评价指标，缺少对盐菟丝子外观性状的描述评价。而笔者研究以外观性状及金丝桃苷为指标，采用正交设计[11]，考察闷润时间，盐炙温度，盐炙时间3个因素，优选菟丝子盐炙的炮制工艺，以期为菟丝子盐炙的扩大生产提供参考。

1 仪器和试剂

1.1 仪器

高效液相色谱仪色谱系统，包括四元梯度输液泵、色谱柱温箱、二极管阵列紫外检测器、Chromeleon 7 色谱管理系统；C18色谱柱、超声清洗仪、XP26型百万分之一电子天平、粉碎机

1.2 试剂

菟丝子(批号：2003001)、金丝桃苷(批号：111521-201809；中国食品药品检定研究院)、乙腈(色谱级)、甲醇(色谱级)；研究用的菟丝子饮片购自亳州某饮片公司，经鉴定为：旋花科植物菟丝子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟种子[1,7～8]。

2 方法

2.1 金丝桃苷的测定

2.1.1 色谱条件及系统适用性 C18色谱柱，流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)，检测波长：360 nm；流速为 1.0mL.min-1，柱温：25℃，进样量为10 μL。理论板数应≥5 000(以金丝桃苷峰计算)，色谱峰对称性较好[1]。见图1。

t/min

2.1.2 对照品溶液的制备 取对照品金丝桃苷适量，参照《中国药典》(2015版)菟丝子药材标准含量测定项对照品溶液的制备方法制备对照品溶液，即得[1]。

2.1.3 供试品溶液的制备 参照《中国药典》(2015版)菟丝子药材标准含量测定项供试品溶液的制备方法制备样品溶液，即可[1]。

2.2 正交试验

2.2.1 盐菟丝子工艺的正交试验设计 基于菟丝子盐炙加工文献检索综述[5，7～8]及单因素试验考察，利用L9(34) 正交设计，考察闷润透心时间(A)、盐炙温度(B)、盐炙时间(C) 3个因素，以外观性状及金丝桃苷为指标，优选盐菟丝子的炮制工艺。各因素水平见表1。

表1 正交设计因素水平

2.2.2 外观性状的评分标准 现行版《中国药典》及《安徽省中药饮片炮制规范》2005版[10]盐菟丝子性状项下描述：形如菟丝子，表面棕黄色，裂开，略有香气[1,12]。笔者试验研究按照正交设计制备加工菟丝子盐炙品，参照2015版药典及炮制规范确定评分：棕黄色，略有香气，计10分；棕黄色，有香气及灰棕色，略有香气，均计8分；灰棕色，无香气，计6分。

2.2.3 综合评分标准 为了更客观地评价菟丝子盐炙品的质量，研究以盐菟丝子外观性状和金丝桃苷为评价指标，用综合评分法来评定试验[13]。金丝桃苷是《中华人民共和国药典》(2015版)规定的指标性成分，所以其权重系数拟定为0.6；饮片外观性状是中药饮片的传统质量评价指标，是评价饮片质量优劣的关键性因素之一[10,14,15]，故将其作为评价指标，并拟定其权重系数为0.4。综合的评分=外观性状评分×0.4+金丝桃苷×0.6[13]。试验安排和结果如表2，方差分析如表3。

表2 盐菟丝子工艺的L9 (34) 正交试验结果(n=3)

表3 综合评分方差分析

由直观分析的结果可知，各个因素对菟丝子盐炙加工工艺的影响顺序为 B >C > A。由方差分析可知盐炙温度(B因素)对菟丝子盐炙加工工艺有显著性影响，闷润透心时间及炒制时间(A及C 因素)则对菟丝子盐炙加工工艺无显著性影响[16]。故从直观分析及方差分析结果可知菟丝子盐炙的最佳工艺为 A1B2C3，即取净菟丝子适量，加入2%盐水拌匀，闷润0.5 h，置于130℃的炒药机中，炒制25 min，取出，晾凉，过筛即可[17]。

2.3 验证性试验

取净菟丝子2 kg，按优选的盐炙工艺制备盐菟丝子样品 3 份[16]，观察饮片外观性状及测定金丝桃苷含量，验证结果见表4。

表4 验证试验结果

结果表明，采用该优选工艺盐炙加工的盐菟丝子性状及金丝桃苷含量均较稳定，表明该盐炙工艺较稳定、可控。即菟丝子盐炙的最佳工艺为：取净菟丝子适量，加入2%盐水拌匀[7]，闷润0.5h，置于130℃的炒药机(CY-25炒药机)中，炒制25 min，取出，晾凉，筛去碎屑即可。

3 讨论

菟丝子盐炙加工品炒至表面棕黄色，裂开，略有香气时，成品质量较优，这也与菟丝子盐炙加工成品传统外观性状及现行版药典描述相一致[8]。表明外观性状是中药饮片的关键评价指标之一，是传统意义上饮片内在化学成分及化学成分集群不能替代的评价标准[10,14,18]。

菟丝子盐炙加工文献[5，7～8]优选的工艺各不相同，本研究以外观性状及内在含量指标代替单一内在指标来考察盐菟丝子的炮制工艺，结果更具科学性和实用性。该研究以外观性状及指标性成分金丝桃苷为综合评价指标，采用正交试验法优选出的菟丝子盐炙加工工艺稳定，重现性良好，可为菟丝子盐炙的扩大生产提供技术参考[19]。将来，还应结合药代及药动优选炮制工艺，以便优选工艺更客观实用。