靖远县包虫病基因型测定及防控技术研究

刘俊石，付宝权，李斌，贾万忠

（1.靖远县畜牧兽医技术服务中心 甘肃白银 730900；2.中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家动物包虫病专业实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室 兰州 730046）

棘球蚴病（echinococcosis）是由棘球属绦虫（echinococcus spp.）的幼虫-棘球蚴引起的一类重要人兽共患寄生虫病，棘球属终末宿主是狗、狐狸、狼等食肉类动物，成虫寄生于其小肠内，虫卵随粪便排出，污染食物、饮水和周围环境，感染棘球绦虫的终末宿主是棘球蚴病的最重要传染源，呈全球性分布。在我国，棘球蚴病主要分为两型：囊型棘球蚴病（cystic echinococcosis，CE）和泡型棘球蚴病（alveolar echinococcosis，AE）。靖远县辖区18 个乡镇、177 个行政村、10.3 万农户，总人口50.35 万人，其中农业人口43.98 万人，占总人口的87.34%。2012 年靖远县被省上确定为养羊大县。2019 年底各类畜禽饲养量达到614.53 万头（只），存栏333.12 万头（只），出栏281.41 万头（只），其中：羊只饲养量122.41 万只，羊只出栏64.81 万只。近几年，全县棘球蚴病人感染病例呈上升趋势，每月以2～7 人的感染速度增加。发病家畜达6 万头（只），年新发病1.26万头（只），年经济损失500 万元。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2019—2022 年，紧紧围绕靖远县动物包虫病综合防治技术试验示范与推广项目，在靖远县万信牛羊定点屠宰场采集典型牛羊肝脏棘球蚴包囊或疑似包囊12 份，将采集的样品保存于-80℃冰箱。

1.2 材料

荧光PCR 仪、基因组提取试剂盒、解剖器具。

1.3 方法

1）基因型分析。用基因提取试剂盒按照产品使用说明书对处理后的包囊样本生发层进行基因组DNA 提取，用荧光PCR 进行检测。

2）犬粪抗原检测。在靖远县包虫病流行的四个乡镇共采集480份犬粪进行检测，阳性数为36 份，阳性率为7.5%。

3）中间宿主羊血清抗体检测。在靖远县包虫病流行的四个乡镇共采集羊血清160 份，进行羊包虫病感染抗体检测，阳性数21份，阳性率13%。

4）屠宰羊肝、肺包虫病感染情况调查。在靖远县万信屠宰场用剖检的方法检查待宰羊800 只。待宰羊只主要来源于该县乌兰镇、刘川镇、大芦镇、高湾镇等周边乡镇，其中一小部分来源于会宁县河畔镇牲畜交易市场，屠宰检查发现肝肺包虫囊感染64 只，感染率为8%。

2 棘球蚴病基因型鉴定结果

通过对采集自本地绵羊肝的12 个疑似包囊（白色而较硬的非囊型棘球蚴包囊）进行了线粒体nad1 基因PCR 扩增和序列测定，结果表明其中7 个棘球蚴疑似包囊的基因型为细粒棘球绦虫（E.granulosus）G1 基因型，结果见图1。3 个疑似包囊为多房棘球绦虫中绦期（E.multilocularis metacestode）。经序列比对，发现3 个多房棘球蚴nad1 基因核苷酸序列之间一致，且与NCBI 数据库中MH259778 序列完全相同，结果见图2[1]。

图1 棘球蚴疑似包囊基因型测定

图2 棘球蚴疑似包囊基因序列测定

3 防控技术

3.1 切断传播途径

对犬只进行驱虫，排泄物集中处理，切断病犬及家畜之间的传播链，禁止用感染棘球蚴病的家畜脏器喂犬，对感染棘球蚴病的家畜脏器进行无害化处理[2]。

3.2 加强宣传培训

通过广泛开展棘球蚴病宣传培训，提高人民群众对棘球蚴病的认识，增强个人防护意识，掌握基本防治知识，形成群防群控的局面。也可通过科普宣传的方式加强对学生的健康教育，将棘球蚴病防治知识的宣传教育和普及纳入中小学生的健康教育内容，从而全面提高棘球蚴病防控能力。

3.3 加强基层防疫队伍建设

加强基层畜牧兽医站的建设，有效改善基层办公环境。不仅使人员能留下来，还要想方设法提高基层人员的业务素质，落实生物安全措施，科学化、正规化地开展棘球蚴病防治工作。同时积极争取县级财政支持，提高村级防疫员劳动报酬，调动其工作积极性。

3.4 认真做好犬驱虫工作

要建立定期对家牧犬的驱虫制度，驱除犬体内的棘球绦虫。各乡镇确定驱虫日，每月对家牧犬采用含诱食剂的吡喹酮咀嚼片进行“月月驱虫，犬犬投药”，吡喹酮对细粒棘球绦虫驱虫率可达100%。服药前12h 将犬拴住禁食可以提高药物吞服率。

3.5 中间畜主的免疫预防

目前，国家对棘球蚴病疫苗研发已取得突破性成就，通过接种疫苗对于棘球蚴病的防控意义重大。

3.6 加强家畜屠宰检疫

在牛羊肉屠宰市场，检疫人员严格检疫程序，对检疫出的病畜监督进行无害化处理，同时，开展流行病学调查，详细了解牛羊产地来源以及饲养方式等情况，为进一步防控工作奠定基础[3]。

3.7 确保经费投入

力争将棘球蚴病防控工作经费纳入靖远县年度财政预算，保证棘球蚴病监测、检疫、无害化处理、安全防护、人员培训、宣传教育、督导评估等配套工作经费，确保此项工作顺利进行。

3.8 持续开展流行病监测工作

建议靖远县以乡镇为单位，建立中间畜主、终末畜主、以及高危人群为监测对象的监测体系，随时掌握全县棘球蚴病流行情况。

3.9 加强宣传灭鼠工作

鼠类亦是棘球蚴病传播的中间畜主，因此对养殖场以及周边环境进行灭鼠意义重大，建议农牧部门联合林草部门组织辖区乡镇进行灭鼠工作。

4 加强组织领导

棘球蚴病防控工作必须各部门联合行动，各部门密切配合，发动全社会力量。从学校的小学生到观念落后的农牧民，从机关领导到一般干部，必须改变传统的生活习惯，真正了解棘球蚴病的传播途径及危害性。

通过此次棘球蚴基因型分析，确定靖远县牛羊细粒棘球蚴均为G1 基因型；通过基因序列分析，发现同一宿主可感染不同的虫卵。另外，经文献检索，这是迄今为止在靖远县首次发现绵羊感染多房棘球蚴的报道。但是经组织形态学鉴定，包囊中未含原头节，与绵羊不是多房棘球绦虫的适宜宿主的情况相一致。这些发现提示，屠宰羊曾经感染多房棘球绦虫，羊活动场所及其周围环境对人类健康构成生物安全风险，其传染源需要进一步调查。这也是此次流行病学调查极为重要的新发现之一。基因检测属于一种实用性较强，在棘球蚴病的控制和预防中工作中应用十分广泛，通过此次棘球蚴病基因序列测定，为下一步研制出更多的基因工程奠定基础，最终实现对棘球蚴病的有效防治。