CEP8联合CD45检测NSCLC患者血液循环肿瘤细胞的应用研究

孙斌

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是世界上最常见、多发的恶性肿瘤之一，约占所有肺癌的85%[1]，其临床检测包括8号染色体着丝粒探针（centromeric enumeration probes for chromosomes 8，CEP8）荧光原位杂交法与CD45 免疫荧光抗体技术两种[2]。虽然两种检测方法应用在NSCLC 检测的准确性均较高，但多以单独检测，两者联合却鲜有报道。故本次研究将通过CEP8 联合CD45 检测NSCLC 患者血液循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTC）检测的价值，为该病的临床诊治提供理论与实践依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018 年2 月至2021 年12 月杭州市萧山区中医院收治的肺癌204 例患者，其中男性101 例、女性103 例；年龄23～68 岁，平均年龄（49.60±7.23）岁；肿瘤分期[3]：Ⅰ期89 例、Ⅱ期64 例、Ⅲ期31 例、Ⅳ期20 例；病理分型：腺癌93 例、鳞癌81 例、腺鳞癌11 例、低分化癌19 例。本课题经医院伦理委员会审核通过。纳入标准包括：①经细胞学检查或组织病理学确诊为NSCLC[4,5]；②年龄22～68 周岁；③入组前1 个月内未接受过任何与疾病相关的放化疗及靶向治疗；④术后生存期＞6 个月；⑤心、肝、肾等重要脏器功能正常或基本正常；⑥临床资料完整且签署（家属代签）知情同意书者。并剔除：①合并有其它恶性肿瘤者；②入组前5 年内患其它恶性疾病者；③有症状性脑转移和/或凝结血块NSCLC 者；④存在大量浆膜腔积液者；⑤临床资料不完整者。

1.2 方法 采用CEP8 荧光原位杂交法结合CD45的免疫荧光抗体技术（CD45-FISH 法）检测CTC。本次研究以CTC≥2 个/3.2 ml 外周血且癌胚抗原≥5 ng/ml 作为NSCLC 诊断金标准。CEP8荧光原位杂交法：CTC≥2 个/3.2 ml 为阳性，CD45 免疫荧光抗体技术：CTC≥2个/3.2 ml为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差（）表示。组间计量资料比较采用t检验；计数资料比较采用χ2检验。设P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CTC检测结果与诊断价值比较见表1

表1 CTC检测结果与诊断价值比较

由表1 可见，联合检测时的CTC 数量、CTC 检出率均高于CEP8 荧光原位杂交法、CD45 免疫荧光抗体技术检测，差异均有统计学意义（t分别=5.53、5.73，χ2分别=6.32、6.74，P均＜0.05），而CEP8 荧光原位杂交法、CD45 免疫荧光抗体技术检测时的CTC数量、CTC 检出率比较，差异均无统计学意义（t=0.41，χ2=0.82，P均＞0.05）。

2.2 CEP8、CD45及联合诊断的价值比较见表2

由表2 可见，联合检测时的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率均高于CEP8 荧光原位杂交法、CD45 免疫荧光抗体技术检测，差异均有统计学意义（χ2分别=5.67、5.98、6.14、6.29、5.67、5.93、7.14、7.27、5.42、5.37、6.92、6.81、6.92、6.39、5.61、5.89、8.17、8.34、5.45、5.37，P均＜0.05）。

3 讨论

肿瘤的复发与转移是一个复杂的病理过程，其中肿瘤细胞就是肿瘤复发转移的种子[6]。CTC 的形成与上皮间质量转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）密切相关，EMT 具有赋予细胞转移和入侵的能力[7]，进而促成了CTC 从原发瘤脱落再进入到血液或淋巴系统里，但不是所有的肿瘤细胞都能在循环系统中存活下来，除非它具有高度活力与高度转移潜能，才能进一步形成微小癌栓[8]。由于CTC具有肿瘤细胞学与基因遗传学特征，所以当它们通过血液循环到达环境合适的远端部位之后，便会在这些部位增殖，继而发展为致命性肿瘤转移病灶[9，10]。

CTC 数量作为液体活检的一项指标，对肿瘤的诊断、复发、转移的监测及预后判断等有重要临床指导意义。由于多数肿瘤患者循环血中CTC 数量极少，因此需要更加高效的CTC 富集及检测技术。目前，被美国食品药品监督管理局批准的CTC 富集检测系统仅有CellSearch®循环肿瘤细胞检测系统[11]，其作用机制是通过免疫磁珠结合上皮细胞黏附分子富集并用CTC 中细胞角蛋白阳性和白细胞标记CD45 阴性来鉴定CTC[12]。本次CTC 检测结果中发现NSCLC 患者的CTC 检测过程中，CEP 和CD45联合检测时的CTC数量、CTC检出率均高于单纯CEP8 荧光原位杂交法、CD45 免疫荧光抗体技术检测（P均＜0.05），本次研究结果还显示，而将CTC≥2 个/3.2 ml 外周血且癌胚抗原≥5 ng/ml 作为NSCLC 诊断指标时，CEP 和CD45 联合检测时的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率均高于CEP8 荧光原位杂交法、CD45 免疫荧光抗体技术检测（P均＜0.05），表明联合检测的诊断价值更高。

综上所述，在NSCLC 患者的血液CTC 检测过程中科学、合理的予以CEP8 荧光原位杂交法联合CD45免疫荧光抗体技术检测准确率更高，但本次研究样本量不足，宜扩大样本量进行相关研究，进一步验证研究结果。