HIV感染患者CXCR5、HCY、RANTES的表达及相关性分析

陈秀芬 潘崇南 金辉

人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是引发艾滋病（acquired immuno deficiency syndrome，AIDS）的主要原因[1,2]。临床资料显示，当HIV 病毒侵入机体后，对机体免疫系统发起攻击，造成人体细胞免疫、体液免疫受损，从而导致机体免疫能力下降，继而引发一系列的免疫缺陷疾病，严重者甚至发展为机体全身衰竭而亡，严重威胁人类健康及生活质量[3,4]。寻求有效、准确的AIDS生物检测标志物对改善死亡率和机会性感染疾病发病率具有重要意义[5]。随研究深入发现，多种免疫细胞及其释放的细胞因子与HIV/AIDS 的发病机制存有一定关联，在抗HIV 病毒免疫应答过程中均有参与，有望成为抗HIV 病毒的新的辅助途径[6,7]。本次研究通过观察HIV 感染者趋化因子CXCR 受体5（CXCR5）、同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）、调节活化正常T 细胞表达与分泌的趋化因子（regulation upon activation normal T-cell expressed and secreted，RANTES）水平变化，了解HIV 感染情况，并分析上述指标与HIV感染的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年10 月至2020 年10 月期间在台州市第一人民医院就诊的HIV 感染患者73 例为HIV 感染组，其中男性44 例、女性29 例；年龄19～65 岁，平均年龄（42.00±19.55）岁，感染时间3～7 年，平均感染时间（5.00±1.70）年；根据HIV 感染分类系统及ADIS 诊断标准将HIV 感染组分为无症状者32 例，有症状者41 例。同期选取70 名体检者为对照组，其中男性40 例、女性30 例；年龄20～65 岁，平均年龄（42.50±19.12）岁。两组患者基线资料比较，差异均无统计学意义（P均＞0.05）。

1.2 纳排标准 纳入标准为：①符合《中国艾滋病诊疗指南（2018 年版）》中HIV 感染相关诊断标准[8]；②免疫印迹法确认HIV-1 型抗体阳性；③体检者近1 年内未服用降脂药物，身体健康无任何疾病；④近1 个月内无尿道感染症状或未被诊断为梅毒、淋病、尿道感染；⑤无免疫系统疾病史；⑥自愿参与本次研究，签署知情同意书。本次研究经本院医学伦理委员会批准。排除标准为：①存在心肺等严重器质性疾病；②合并结核感染、乙型肝炎、丙型肝炎等病毒感染及其他感染性疾病；③合并糖尿病、高血压等内分泌疾病、免疫性疾病；④合并造血系统原发性疾病。

1.3 方法 清晨采集所有研究对象空腹静脉血6 ml，置于EDTA 抗凝管中以3 000 r/min 离心处理20 min，静置分离血清、血浆，于-70 ℃环境下保存待检。用含1%牛血清蛋白的聚丁二酸丁二醇酯溶液将血清样本按照1∶500 稀释，在96 孔板中加入100 μl/孔，覆盖洁净粘条，4 ℃孵育过夜。去除孔内抗体，以洗涤缓冲液重复洗涤3 次，加入200 μl 1%BAS的PBS溶液封闭反应2 h，再次洗涤后拍干备用。将96 孔板中多余板条移除，在第一列中加入100 μl制备好的标准品，剩余的孔板中加入100 μl样品，覆盖洁净粘条，常温下孵育2 h。洗板3 次，以干净纸巾拍打以除去多余冲洗缓冲剂，每孔内加入CXCR5、HCY、RANTES 二抗，覆盖粘条，常温下孵育2 h。冲洗反应板，加入100 μl底物溶液，粘条覆盖，常温孵育40 min，加入50 μl显色液/孔，孵育45 min，加入50 μl终止液。于酶标检测仪450 nm处读取吸光度值，以2-△△ct计算CXCR5、HCY、RANTES浓度。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件对数据进行分析处理。计量资料采用均数±标准差（±s）描述，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，相关性采用Pearson相关性分析，影响因素分析采用logistic回归分析。设P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清CXCR5、HCY、RANTES表达见表1

表1 两组血清CXCR5、HCY、RANTES表达

由表1 可见，HIV 感染组患者血清CXCR5 水平低于对照组，血清HCY、RANTES 表达高于对照组，差异均有统计学意义（t分别=27.88、-26.48、-66.23，P均＜0.05）。

2.2 HIV 感染发生影响因素的多元logistic回归分析 将HIV 感染发生作为因变量，将临床特征及CXCR5、HCY、RANTES 作为自变量，纳入二分类多因素logistic回归模型分析，结果见表2。

表2 HIV感染发生影响因素的多元logistic回归分析

由表2可见，TNM分期、分化程度、淋巴结转移、CXCR5、HCY、RANTES 均为HIV 感染发生的影响因素。

2.3 HIV 感染组中CXCR5、HCY、RANTES 的相关性分析 CXCR5 与HCY、RANTES 呈负相关（r分别=-0.10、-0.87，P均＜0.05），HCY 与RANTES 呈正相关（r=0.33，P＜0.05）。

3 讨论

临床资料证实，HIV 病毒感染后，淋巴细胞数量减少、细胞功能受损，机体免疫功能紊乱，继而引发机体免疫功能缺陷及异常免疫激活[9]。研究指出，抗反转录病毒治疗作为目前AIDS治疗的有效手段，通过抑制病毒复制，增加CD4+T 淋巴细胞术量，降低感染发生率，可有效预防及降低疾病发生率[10]。另有研究证实，HIV 抗病毒治疗虽可恢复部分机体免疫能力，但其恢复速度极慢。故对分子标志物与HIV感染相关性进行研究具有重要意义[11]。

CXCR5 在淋巴等组织中表达丰富，是重要的B淋巴细胞组织因子[12]。有研究指出，CXCR5 在糖尿病、系统性红斑狼疮等患者外周血中存在异常高表达，并在部分自身免疫性疾病中可作为疾病发展阶段的指征[13,14]。CXCR5 CD8+淋巴细胞频率、功能与HIV 感染进展存在紧密关联[15]。赵爽等[16]研究指出，不同血液CD4+T 淋巴细胞计数患者CXCR5 水平与健康人相比存在差异性，但治疗后CXCR5 水平均出现不同水平上升，证实CXCR5 总量较健康人群增高，与前期研究结果相符。本次研究结果显示，HIV感染患者CXCR5 水平相比健康者降低，且随疾病分期的升高而降低。同时CXCR5 是HIV 感染发生的影响因素，由此认定，CXCR5 可影响、促进HIV 感染病情进展。提示CXCRE5水平变化可对病情程度变化作出准确反映，有望成为HIV 感染新的检测生物标志物。

HCY 本身不参与蛋白制合成，在体内以氧化形式与蛋白质结合。随临床深入研究发现，HCY 是导致心脑血管疾病发病的独立危险因素[17]。抗HIV 感染治疗在延长患者生存期同时会引发系列并发症，其中以心血管疾病最为严重。而HIV 本身就为心血管疾病的独立危险因素[18]。故在HIV 感染患者治疗过程中，筛查、预防心血管疾病具有重要意义[19,20]。本次研究结果显示HCY 异常高表达于HIV感染患者血清内，且是HIV 感染发生的影响因素，与Guarale[21]等研究结果相符。提示HIV 本身对HCY代谢过程产生一定影响，可通过检测HCY水平变化相应调整治疗方案，对心血管病预防具有重要意义。

RANTES 作为趋化因子家族成员，是CXCR5 天然配体[22]。RANTES 具有多种不同生物学功能，在对多种细胞产生趋化作用同时强烈激活淋巴细胞，参与炎症反应发生，调节细胞生长分化及HIV 感染[23]。邝建玉等[24]研究指出，RANTES在HIV感染易感性和AIDS 病程中的作用为非特异性的，受体、同类配体、病毒本身变异等多种因素影响。本次研究结果显示，血清RANTES 水平的升高与HIV 感染的发展存在一定关联，提示其可能成为新的抗HIV 治疗靶点。且本次研究发现CXCR5 与HCY、RANTES呈负相关，HCY 与RANTES 呈正相关。因此测定CXCR5、HCY、RANTES 表达对诊断HIV 感染疾病的发展情况具有重要意义。

综上所述，CXCR5、HCY、RANTES 水平表达与HIV 感染存在密切联系，且存在一定相关性。CXCR5、HCY、RANTES 水平变化可作为疾病预判及发展的生物检测指标，为抗HIV 治疗的疗效评估，HIV感染的免疫治疗提供新的方向。