酸藤子提取物的抑菌活性研究

廖建良，王 正，秦 歆

（1.惠州学院 生命科学系/生物技术研究所，广东 惠州 516007；2.江苏吉贝尔药业有限公司 江苏 镇江 212009）

1 前言

酸藤子［Embelia laeta（L.）Mez］又名信筒子、酸藤果、入地龙、鸡母酸等，是紫金牛科酸藤子属植物。其根、叶可散瘀止痛、收敛止泻、治跌打肿痛、肠炎腹泻、咽喉炎、胃酸少、痛经闭经等，民间人们有吃叶的习惯，无毒。果可食，强壮补血。分布于广东、广西、云南、台湾、江西等省，福建南部地区常见，资源较丰富［1-2］。目前人们为了延长食品的保藏期限，在食品的生产、加工和贮藏过程中，常常采用添加防腐剂，细菌、霉菌、酵母菌等微生物的是造成食品腐败变质原因。但近来研究发现，合成食品防腐剂有一定的安全问题、不利于人体健康，因此选择新的安全高效的天然食品防腐有现实意义。目前利用植物提取抑菌物，已对鱼腥草、三叉苦叶等植物进行研究［3-8］。但有关酸藤子果与叶的醇提取物抑菌研究鲜见报道。本实验将酸藤子果叶的醇提取物，进行抑菌活性实验和抑菌防腐效果的研究，旨在研究开发出能集防腐与保健为一体的无毒无副作用的天然抑菌防腐剂。

2 材料与方法

2.1 材料与菌种

酸藤子，广东省惠州学院后山采集。

金黄葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、绿脓杆菌（p.aeruginosa）、枯草芽孢杆菌［Bacillussubtilis（Ehrenberg）Cohn］、青霉菌（Penicillium sp.）、黑曲霉（Aspergillusniger）均由惠州学院微生物实验室提供。

培养基

牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15g，加水至1000ml，搅拌煮沸，调PH至7.3±0.2，于121℃、15min灭菌。用于细菌培养。

马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）：马铃薯300g、葡萄糖20g、琼脂15g、氯霉素0.1g，取样本40.1g，加水至1000ml，调PH至6.0±0.2，于121℃、20min灭菌。用于真菌培养。

2.2 方法

2.2.1 酸藤子果提取物和酸藤子叶提取物的制备

按照文献［8］的方法得质量浓度为1g·m L-1的醇提物供试品。

2.2.2 菌种活化及菌悬液制备

按照文献［8］的方法活化菌种，制成菌悬液，备用。

2.2.3 抑菌作用的测定

采用滤纸片扩散法。圆滤纸片用打孔器在白色滤纸上打出直径为6.0mm的小圆片，按照文献［8］的方法将细菌置33℃培养24h，霉菌置28℃培养48h，取出后测量抑菌圈大小，比较其抑菌效果。

2.2.4 抑菌效力的测定

采用平板稀释法。按照文献［8］的方法将酸藤子果提取物和酸藤子叶提取物用无菌水进行稀释（V/V），制成500mg·m L-1、250mg·m L-1、125mg·m L-1、62.5mg·m L-1、31.25mg·m L-1系列浓度稀释液；按照文献［8］的方法测定最低抑菌浓度（MIC）。提取物的MIC越低，其抗菌效力越强。

2.2.5 提取物热稳定性测定

将酸藤子果提取物和酸藤子叶提取物分别放在60℃、80℃、100℃水浴条件下处理15min后，将高压蒸气灭菌的直径6.0mm的圆滤纸片分别放入各个温度提取物中浸泡备用。按照文献［8］的方法比较其抑菌效果，每个温度做3次重复。结果取重复试验的平均值。

主要仪器参考文献［8］

3 结果与分析

3.1 酸藤子果与叶提取物抑菌作用效果

由表1可见，酸藤子果提取物对绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈平均直径分别为27.40、29.10、24.40mm；酸藤子叶提取物对对绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈平均直径分别7.70、9.90、7.70 mm。酸藤子果提取物和酸藤子叶提取物在含有细菌培养基上都有明显的抑制圈，而在含霉菌的培养基上没有抑菌圈出现；说明酸藤子果提取物、酸藤子叶提取物对细菌都有一定的抑菌作用，而对霉菌无抑制作用。由于酸藤子果提取物的抑菌圈明显较大，说明酸藤子植物的果提取物抑菌作用明显，主要取决于酸藤子果中的抑菌成分。结果表明，酸藤子果提取物比酸藤子叶提取物对细菌有较强抑制作用。

表1 酸藤子果提取物及酸藤子叶提取物对供试菌种的抑菌效果

3.2 酸藤子果与叶提取物M IC测定

由表2、表3可见，酸藤子果提取物和酸藤子叶提取物对细菌有一定的抑菌效力，酸藤子果提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌的MIC值为62.5mg·m L-1，酸藤子叶提取物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的MIC值为125mg·m L-1；酸藤子叶提取物对绿脓杆菌的MIC值为62.5mg·m L-1。由此可见，酸藤子叶提取物的抑菌力比酸藤子果提取物的抑菌力较低；由表2、表3可见，对照组物质对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、霉菌均无抑制效果。同时也进一步说明酸藤子果提取物和酸藤子叶提取物对细菌的抑菌效力主要取决于酸藤子果和酸藤子叶中的抑菌成分，而对霉菌则没有抑制效果。这与用滤纸片法测定抑菌作用试验得出的结论一致。

表2 酸藤子果提取物的MIC测定结果

表3 酸藤子叶提取物的MIC测定结果

3.3 酸藤子果与叶提取物热稳定性研究

由表5可见，酸藤子果提取物和酸藤子叶提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌研究，两种提取物对热都有很好的稳定性，在100℃以下，抑菌效力都没有明显的影响。可能是因为酸藤子果和酸藤子叶中的抑菌成分不会被高温破坏，故不会明显影响提取物的抑菌作用。因此，实际应用时可以考虑温度60～100℃之间提取。

表5 热处理对提取物抑菌效果的影响

4 结语与讨论

从本研究的抑菌结果表明，酸藤子果提取物及酸藤子叶提取物对3种供试菌种中的细菌都有抑制作用，这可能与提取物所含有的抑菌活性成分有关，其具体的作用机制有待于进一步探讨。酸藤子果及叶提取物对霉菌没有抑菌作用，但是对细菌有较强的抑制作用，且在60～100℃之间加热提取对这些物质没有明显的破坏作用。无论是酸藤子果还是酸藤子叶都具有抑菌作用，酸藤子果提取物比酸藤子叶提取物抑菌效果更加明显，说明酸藤子果提取物对细菌有较强的抗菌作用，具有作为天然防腐剂应用于食品工业的潜力。虽然唐天君［1］、冯旭［9］等人对酸藤子化学成分研究；但，目前对酸藤子果与叶的抑菌作用研究与应用还没有受到重视。酸藤子在广东等地野外分布广泛，且结果数量多。我们建议要充分开发酸藤子等野生植物资源并加以利用，积极开展野生植物的综合利用研究，开拓山区新的产品，发展我国营养功能保健食品和天然食品防腐剂，满足老百姓的日常生活需要。

［1］唐天君，吴凤锷.酸藤子化学成分的研究［J］.天然产物研究与开发，2004，16（2）：129-130.

［2］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志［M］.第58卷.北京：科学出版社，1979：120．

［3］熊大胜，席在星，邓应威.鱼腥草提取物抑菌作用研究［J］.常德师范学院学报：自然科学版，2002（4）：59-60.

［4］曾莹，姚晓玲，夏服宝.荸荠皮提取物的抗菌性及其应用研究［J］.食品工业科技，2003（11）：17-20.

［5］曾莹，向新柱，夏服宝.荸荠皮提取物对细菌的作用方式研究［J］.食品科学，2004，25（12）：72-75.

［6］张百刚，高春燕，刘小风.甘草、黄花菜提取物复配抑菌防腐作用的研究［J］.食品工业科技，2009（9）：136-138

［7］谭宏亮，刘红卫，朱建新.夹竹桃叶提取物抑菌活性的初步研究［J］.安徽农业科学，2007（4）：70-71.

［8］廖建良，揭育霞.三叉苦叶提取物的抑菌活性研究［J］.广东农业科学，2012，39（19）：90-92.

［9］冯旭，李耀华，梁臣艳等.酸藤子化学成分研究［J］.中药材，2013，36（12），1947-1949.