超临界二氧化碳法提取延胡索乙素的研究

成帮琴，薛连海

延胡索为罂粟科植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥块茎。主要产于河北、山东、浙江等地。延胡索的主要化学成分为生物碱，其中以延胡索乙素为主要有效成份[1]，具有较好的镇痛作用。目前，延胡索中延胡素乙素的提取方法主要有超声波-甲醇提取法（药典法）和乙醇提取法[2,3,6]。超声波-甲醇提取法由于有甲醇残留、甲醇具有毒性和环境污染问题等而限制了其在制药工业中的应用，乙醇提取法则存在环境污染和提取率较低的问题。而超临界二氧化碳提取法采用作为二氧化碳为萃取剂，具有良好的化学惰性和安全性，是一种提取中草药中有效成分的理想方法[4]。因此，我们采用超临界二氧化碳提取法对从延胡索中提取延胡索乙素的工艺进行了研究。

1 实验方法

1.1 仪器与试剂

仪器：超临界二氧化碳萃取装置（HA-221-50-03型，南通华安超临界萃取设备有限公司）；Agilet1200高效液相色谱仪；Nicolet6700红外光谱仪，超声波清洗器（KQ3200型，昆山超声波设备有限公司）。

试剂:延胡索(市售药材)；延胡索乙素，含量≥98%(中国生物药品鉴定所)；二氧化碳＞99%,食品级；其它均为分析纯化学试剂。

1.2 超声波－甲醇提取法

取经60℃干燥4h的延胡索粉末（60～80目）(以下简称延胡索粉末),每份5g(称准到0.1mg),置于500mL三角烧瓶中,加甲醇 200mL,将三角烧瓶置于超声波振荡器中萃取120min,冷却到室温、过滤并将滤液在容量瓶中定容到 250mL，取样 10μL采用高效液相色谱法测定延胡索乙素含量[5,7]并计算产率。产率为0.069%。

1.3 超临界二氧化碳提取法

取200g经60℃干燥4h的延胡索粉末（60～80目）,加入萃取釜中,在一定的提取温度、压力、时间、改性剂用量的条件下提取,提取液冷却至室温,过滤并将滤液在容量瓶中定容，取样10μL采用高效液相色谱法测定延胡索乙素含量并计算产率。

2 结果与讨论

2.1 超临界二氧化碳提取法

首先,以 200g延胡索粉末为提取对象,以提取温度、提取压力、提取时间、改性剂种类和用量为影响因素,以延胡索乙素的产率为考察目标，进行了单因素影响实验，确定了提取温度、提取压力、提取时间的范围和乙醇作为改性剂。其次，在单因素影响实验的基础上,以提取温度、提取压力、提取时间和改性剂用量为影响因素，进行了四因素三水平正交实验设计,对工艺条件进行了优化。实验因素水平见表1,正交实验结果见表2。

表1 超临界二氧化碳提取因素水平表

表2 超临界二氧化碳提取延胡索乙素结果

结果表明，最佳萃取条件: A2B3C3D2,即萃取压力为35MPa，萃取时间为4h,萃取温度为60℃,改性剂用量为400ml。

由极差分析可见，影响因素顺序：B＞A＞C＞D，即萃取时间＞萃取压力＞萃取温度＞改性剂用量。

在最佳工艺条件下,进行了萃取实验,产率为0.79mg/g。由极差分析可见，萃取时间为主要影响因素，萃取时间分别为3 h和4 h时提取率变化不明显，但萃取时间的这种差别对生产成本的影响较大。因此，在其它萃取条件不改变的情况下，又补充了萃取时间分别为3 h、3.1 h 、3.5 h和4 h的萃取实验。结果表明，萃取时间为3.1 h时，产率仍为 0.79mg/g。因此，最佳萃取工艺条件最终确定为：萃取压力为35MPa，萃取时间为3.1h,萃取温度为60℃,改性剂用量为400ml。

2.2 延胡索乙素的分析

定性分析：提取液经柱层析分离、浓缩、结晶得到延胡索乙素晶体，红外光谱分析。样品及标样谱图见图1和图2。

图1 延胡索乙素样品红外光谱图

图2 延胡索乙素标样红外光谱图

定量分析：提取液经定容后采用高效液相色谱分析，外标曲线法定量[5]。

3 结论

3.1 超临界二氧化碳提取法的适宜工艺条件为：萃取压力35MPa，萃取时间3.1h，萃取温度60℃，改性剂为乙醇，用量为每克延胡索粉末2mL改性剂。在最佳工艺条件下延胡索乙素的产率为0.079%。

3.2 采用超临界二氧化碳提取法从延胡索中提取延胡索乙素，与药典法比较，延胡索乙素的产率提高了 14.5%；由于二氧化碳价格低廉、来源广泛、化学惰性好、对环境友好和对药品的安全性有保障等特点，超临界二氧化碳法提取中草药有效成份将具有广阔的应用前景。

[1] 陈志桃，陈丽香，陈胜辉等.高效液相色谱法测定元胡止痛片中延胡索乙素的含量[J].海峡药学，2004，16（3）：25.

[2] 中华人民共和国卫生部药典编委会编.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：化学工业出版社，1995：:17-118.

[3] 周瑞,陆兔林.延胡索提取工艺的优选[J].时珍国医国药,2003,14(11):662.

[4] 王振中，彭园平.超临界二氧化碳萃取技术提取夏天无成分的研究[J].中国中药杂志,2002，27（8）：32.

[5] 薛连海，邱德昆.高效液相色谱法测定延胡索中延胡索乙素的含量[J].吉林化工学院学报,2006，18（3）：24.

[6] 宾怀玉，李关羽.超声波法提取延胡索乙素的工艺研究[J].农产品加工，2009，（11）：36

[7] 胡晓黎，崔书亚.元胡中延胡索乙素的离子液体－毛细管电泳法测定[J].分析测试通报，2009,28(2)：42.