参麦注射液及其中间体相对分子质量研究

时间：2024-06-19

王雪莲，李响明*，王文鹏，周永妍，孙胜斌

(1.神威药业集团有限公司，河北石家庄 051430；2.中药注射剂新药技术开发国家地方联合工程实验室，河北石家庄 051430)

参麦注射液为红参和麦冬提取有效成分制成的纯中药注射液制剂，主要以人参皂苷类和糖类为主要有效成分[1]。参麦注射液具有益气固脱、养阴生津、生脉的作用，临床用于冠心病、休克、病毒性心肌炎等多种疾病的治疗，为临床常用中药注射液品种之一[2-3]。大分子物质被广泛认为是引起中药注射液中不良反应的源头[4]，受生产工艺及存放环境等因素影响，制剂中可能存在少量鞣质与蛋白质成分等大分子物质。在中药注射液生产过程中去除了绝大多数的大分子物质，而制剂中大分子物质的分子量分布，现有法定标准中鲜有控制。本实验采用高效分子排阻色谱法[5]对参麦注射液及其中间体药液测定其相对分子质量及分布，为参麦注射液质量标准的提高提供依据[6-8]。

1 材料

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260型高效液相色谱；Alltech ELSD6000型蒸发光散射检测器；凝胶柱TSK-Gel GPWXL4000，7.8mm×300mm；四元梯度泵，CPA225D电子天平(德国赛多利斯)；SHB-Ⅲ循环水式真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；KH3200E型超声清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)。乙腈(色谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司)，其余试剂均为分析纯。

1.2 样品及对照品

参麦注射液(市售产品)及参麦注射液中间体。右旋糖酐分子量标准套对照品相对分子质量分别为D0(相对分子质量180，批号140637-201203)、D1(相对分子质量2 700，批号140638-201203)、D2(相对分子质量5 250，批号140639-201203)、D3(相对分子质量9 750，批号140640-201203)、D4(相对分子质量13 050，批号140641-201203)、D5(相对分子质量36 800，批号140642-201203)、D6(相对分子质量64 650，批号140643-201203)、D7(相对分子质量135 350，批号140644-201203)、D8(相对分子质量300 600，批号140645-201203)，均购于中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2.1 测定方法

2.1.1 色谱条件凝胶柱(TSK-Gel GPWXL4000，7.8 mm×300 mm)，以10 mmol·L-1醋酸铵溶液为流动相，柱温40 ℃，流速为0.6 mL·min-1，蒸发光散射检测器(干燥气体流速3.0 L·min-1；漂移管温度115 ℃)。

2.1.2 对照品溶液制备取右旋糖酐D0～D8对照品，精密称定，加水分别制成每1 mL约含2 mg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液制备取参麦注射液过0.45 μm微孔滤膜，即得。参麦中间体药液稀释至每mL含红参0.1 g生药或麦冬0.1 g生药浓度，过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.1.4 测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪测定。将所得的一系列对照品溶液的色谱保留时间为横坐标X，对照品标准分子量的对数值为纵坐标Y，作二次回归方程，计算供试品溶液的分子量分布，即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 系统适应性及专属性试验取空白溶剂水测定，结果见图1，溶剂对结果无影响。

图1 溶剂色谱

右旋糖酐系列标准品色谱见图2。

注：按保留时间由大到小，依次为右旋糖酐对照品D0-D8。

2.2.2 线性范围考察取右旋糖酐对照品溶液，按“2.1.4”注入高效液相色谱仪，采用ELSD检测，记录对照品保留时间。以对照品的标准分子量的对数值为纵坐标Y，相应的对照品色谱峰保留时间为横坐标X，进行二次回归，回归方程为Y=-0.060 7X2+1.334 5X-2.280 5，R2=0.982 9，r=0.991 0。

2.2.3 精密度试验取D4(相对分子质量13 050)对照品溶液，连续进样6次，计算保留时间RSD为0.17%，峰面积RSD为0.57%，表明系统精密度良好。

2.2.4 稳定性试验取SM-1批按“2.1.4”制备供试品溶液，在室温放置0、4、8、12、16、24h时分别进样测定，计算各峰保留时间的RSD分别为0.14%、0.11%、0.18%，各峰峰面积RSD分别为3.94%、3.87%、0.33%，表明供试品在室温放置24h内稳定性良好。

2.2.5 重复性试验取SM-1批按“2.1.4”制备供试品溶液，连续进样6次，计算各峰保留时间RSD分别为0.07%、0.05%、0.08%，各峰峰面积RSD分别为2.36%、2.47%、0.18%，系统重复性良好。

2.3 样品测定

2.3.1 成品测定取10批市售成品，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，结果见表1。

表1 10批市售成品检测结果

2.3.2 中间体样品测定取3批参麦注射液中间体样品，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，由标准曲线可得以下结果，见表2、表3。

表2 参麦注射液中间体(红参)检测结果

表3 参麦注射液中间体(麦冬)检测结果

从10批参麦注射液成品的测定结果可以看出，参麦注射液成品中物质的相对分子质量均小于8 000，其中98.7%物质分子质量小于380；分子量在3 300～3 460间的物质约占总峰面积0.55%～0.56%；极少量分子质量在7 800～7 950间的物质约占总峰面积0.035%～0.047%。这应该与参麦注射液产品中所含的人参皂苷类、糖类物质有关。

结合文献研究及生产工艺，在参麦注射液生产的关键工序取中间体，以考察精制工艺对大分子物质的去除效果。红参醇提液中最大分子质量在80 000～92 000间，约占总峰面积0.15%～0.18%，经过活性炭处理后该部分物质占总峰面积的比例下降。经过调碱、水沉后，可有效去除分子质量大于10 000的物质和极少量分子质量7 000～8 000的物质。麦冬醇提液中最大分子质量在1 300～1 400间，可见提取出来的物质分子量较小，再经过活性炭处理、水沉后，不同分子量间的物质所占总峰面积的百分数变化不大。