利用质量控制和方法确认数据评定肉苁蓉药材中指标含量测量不确定度

李先芝，刘 洋，石 豪，关宏霞，林 露，严 玲，钱全全，胡 杨

(劲牌有限公司 中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室，湖北 大冶 435100)

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanchetubulosa(Schenk) Wight 的干燥带鳞叶的肉质茎[1]，被誉为“沙漠人参”，是中国传统的名贵中药材[2-5]。在2015年版《中华人民共和国药典：一部》中规定，松果菊苷、毛蕊花糖苷是肉苁蓉药材的含量测定指标，其含量检测采用高效液相色谱法进行测定。松果菊苷、毛蕊花糖苷作为肉苁蓉药材的质量控制指标，评定其含量测定不确定度对于评价肉苁蓉药材的质量有着重要意义。

按照《化学检测领域测量不确定度评定利用质量控制和方法确认数据评定不确定度(RB/T 141 2018)》[6]，在期间精密度测量条件下，获得肉苁蓉的质量控制结果和方法确认数据，应用安德森-达林统计检验对测量系统正态性与独立性假设进行检验，对期间精密度不确定度分量uR′和偏倚不确定度分量ub进行合并，最终计算出样品水平下的合成标准不确定度uc与扩展不确定度U[7]，以一种相对简单的方法对肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的测量不确定度进行了评定。

2 肉苁蓉药材含量检测

肉苁蓉药材的含量检测参照2015年版《中华人民共和国药典：一部》“肉苁蓉”项下“含量测定”进行：色谱条件与系统适用性试验：以C18键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为330 nm。理论板数按松果菊苷峰计算应不低于3 000[1]。

表1 流动相梯度洗脱条件

对照品溶液的制备：取松果菊苷对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，即得[1]。

供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约1 g，精密称定，置100 mL棕色量瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，摇匀，称定重量，浸泡30 min，超声处理40 min(功率250 W，频率35 kHz)，放冷，再称定重量，加50%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得[1]。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，得到对照品溶液与供试品溶液中各化合物的保留时间与峰面积，根据保留时间进行定性，峰面积进行定量，计算得到药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷的含量[1]。

3 测量系统的安德森-达林检验

实验室根据高效液相色谱法(通则0512)，将肉苁蓉药材样品(QCS样品)纳入日常检测中，在期间精密度测量条件下，对肉苁蓉药材中的松果菊苷、毛蕊花糖苷含量进行不确定度评定。

实验室在近2个月的时间内，得到24个测试结果(m=24，单位为%)，统计受控检验按下式计算，结果见表2。

表2 期间精密度条件下松果菊苷测量结果统计

(续表2)

表3 期间精密度条件下毛蕊花糖苷测量结果统计

(续表3)

4 期间精密度不确定度分量uR′的评定

当所用QCS样品的测量涵盖全部分析过程时，样品水平下的uR′评定采用uR′=SR′，式中：SR′为期间精密度标准差。根据表2的统计信息，求得uR′松=SR′松=0.115%。根据表3的统计信息，求得uR′毛=SR′毛=0.06%。

5 偏倚不确定度分量ub的评定

偏倚不确定度分量的评定采用加标回收实验分析进行。实验室进行了肉苁蓉药材中50%、80%、100%、120%、150%、200%加标量的加标回收试验，每个水平加标量做三平行。回收率数据见表4。

多水平的偏倚不确定度分量ub的评定采用公式进行计算，式中bi为第i个回收率与平均回收率的差值。由表4的数据计算得到ub松=0.023 1%；由表5的数据计算得到ub毛=0.026 1%。

表4 多水平的松果菊苷加标回收试验数据

表5 多水平的毛蕊花糖苷加标回收试验数据

6 扩展不确定度分量U的评定

在95%概率下，扩展不确定度按U=2uc=2计算。式中：U为扩展不确定度；uc为合成标准不确定度。

已知uR′松=0.115%，ub松=0.023 1%，由上式求得肉苁蓉药材中松果菊苷含量的测量不确定度合理估计值为：U=2=0.24%。

已知uR′毛=0.06%，ub松=0.026 1%，由上式求得肉苁蓉药材中毛蕊花糖苷含量的测量不确定度合理估计值为：U=2=0.13%。

7 讨论

在期间精密度测定条件下，基于质量控制结果和方法确认数据，可算出期间精密度不确定度uR′，同时根据加标回收实验结果，可以算出偏倚不确定度分量ub，即可得出合成标准不确定度uc和扩展不确定度U。

此种不确定度评定方法要求有充分的重复测量次数，所得到的不确定度具有统计学的严格性，更为客观。期间精密度实验数据为劲牌有限公司不同实验室在不同时期检测得到，且uR′的评定数据经过安德森-达林检验，证明整个检测系统处于稳定受控状态。

从扩展不确定度的评定结果看，测量不确定度主要来源于期间精密度不确定度分量。而期间精密度不确定度分量采用的是期间精密度条件下的标准差，表明实验室环境条件的变化对检测结果的影响较大，提示实验室在日常质量控制工作中应加强此方面的控制，从而确保检测结果真实、可信。